Какой метод производства гиалуроновой кислоты?

Гиалуроноваякислота (га), также известная как- гиалуронан, является большой молекулы мукополисахарид, который широко встречается в соединительной ткани животных и людей и в капсулах некоторых бактерий- да. В 1934 году мейер и другие впервые изолировали вещество от витального юмора крупного рогатого скота. В 1970 - х годах Balazs и другие [2] извлек гиалуроновую кислоту из комбов кур и пубильных ниток человека и превратил ее в ниф-гиалуроновую кислоту, вспомогательный вискоэластичный агент офтальмологии, который первым начал применять гиалуроновую кислоту в медицине. Он был использован в высококачественной косметике ухода за кожей в начале 1980 - х годов, и его спрос значительно вырос. В 1987 году он был также продан в качестве лечения артрита, и в последние годы широко используется в качестве носителя лекарств и тканевого материала. С постоянным развитием исследований по применению гиалуроновой кислоты в косметике и медицине, она все больше признается в качестве важного нового биохимического препарата, как внутри страны, так и за рубежом.

В 1980 - х годах Китай начал исследования процессов разделения, очистки и подготовки, а также клинические исследованияПрименение гиалуроновой кислоты- да. В начале 90 - х годов препараты гиалуроновой кислоты уже поступали на рынок в качестве новых лекарств, а метод производства также эволюционировал от экстракции к микробной ферментации. Вызывая мутации в штамме ферментации, ферментационное сырье, условия ферментации и процесс ферментации постоянно улучшаются и оптимизируются, а выход гиалуроновой кислоты резко увеличивается. Однако вязкость брота ферментации ограничивает дальнейшее увеличение производства гиалуроновой кислоты. В настоящее время акцент исследований на методы ферментации сместился с простого стремления к урожайности на качество гиалуроновой кислоты, что дает хорошие возможности для развития метаболических инженерных операций. В то же время, некоторые новые и более безопасные генетически модифицированные штаммы постепенно выходят на рынок.

1 свойства и характеристики гиалуроновой кислоты

1.1 структура и физические и химические свойства гиалуроновой кислоты

Гиалуроновая кислота представляет собой линейный полисахаридN- ацетилглюкозамин (GlcNAc) и d-глюконовая кислота (GlcUA) в качестве повторяющейся единицы дисаксаридов. Она имеет относительный молекулярный вес около 10⁵~10⁷ и от 300 до 11 000 disaccharide единиц, что делает ее большой биологической молекулы. Наблюдение под электронным микроскопом подтверждает, что гиалуроновая кислота является линейной одноцепной. В связи с водородными связями между моносакхаридами на линейной оси молекула гиалуроновой кислоты приобретает жесткую форму спиральной колонны в пространстве. Внутренняя часть колонны сильно гидрофилична из-за большого числа гидроксильных групп. Гиалуроновая кислота может связывать до 1000 раз свой собственный вес в воде в растворе, и эта вода закрепляется в спиральной колонке; Его нелегко потерять [3]. Гиббс и др. [4] обнаружили, что при низких концентрациях растворы гиалуроновой кислоты в основном демонстрируют вязкость, в то время как при высоких концентрациях они в основном демонстрируют эластичность.

Различные физические и химические факторы (такие как кислотность и щелочность, ультразвук, ультрафиолетовое излучение, рентгеновские лучи, гамма-лучи, гиалуронидазы и т.д.) могут привести к деградации организмаМакромолекулы гиалуроновой кислоты, что приводит к снижению вязкости. При производстве гиалуроновой кислоты и ее препаратов следует минимизировать деградацию молекулярных цепей, чтобы сохранить ее макромолекулярные свойства.

1.2 распределение и физиологические последствия гиалуроновой кислоты

Гиалуроновая кислота широко распространенаВ интерстициальных тканях различных человеческих и животных тканей. Это также основной компонент капсул бактерий, таких как стрептококк и псевдодомы aeruginosa. Хотя гиалуроновая кислота, получаемая из различных источников, имеет различные молекулярные веса, между ними нет никаких различий по видам, и они не являются антигенными для человека и животных.

Физиологические эффекты гиалуроновой кислоты варьируются в зависимости от ткани, в которой она находится. Например, в коже он действует как водоудерживающее средство, в синовиальной жидкости он в основном смазывает суставы, а в кровеносных сосудах в основном регулирует проницаемость. Кроме того,Гиалуроновая кислота взаимодействуетС различными белками, такими как CD44, R гиалуронан и фибронектин, что влияет на многие физиологические метаболические процессы, такие как ангиогенез, опухоригенез, движение клеток, заживление ран и клеточной адгезии.

2. Применение гиалуроновой кислоты

2.1. В косметике

Гиалуроновая кислота-это веществоЭто естественно встречается в коже. Экзогенная гиалуроновая кислота дополняет эндогенную гиалуроновую кислоту в коже. В международной косметической промышленности гиалуроновая кислота признана идеальным природным увлажняющим фактором (NMF). Косметика, содержащая гиалуроновую кислоту, получила международное признание как "биомиметическая косметика" и "косметика четвертого поколения", и многие страны конкурируют за их исследования и развитие.

2.2 косметические и оздоровительные средства

Гиалуроновая кислотаВводится в кожу в качестве наполнителя для уменьшения морщин [6]. Гиалуроновая кислота также используется как продукт красоты и здоровья, который всасывается через пищеварительную систему после перорального приема, увеличивая синтез гиалуроновой кислоты в коже и других тканях.

2.3 гиалуроновая кислота в медицинских целях

2.3.1 хирургия глаз

Balazs et al. 2] использованоГиалуроновая кислота в офтальмологической хирургииДля внутриглазных линз имплантации и обнаружили, что он защищает роговицу эндотелия, а также защищает радужную оболочку от повреждений, вызванных опорными стойками внутриглазных линз. В других офтальмологических операциях использование гиалуроновой кислоты может повысить успешность операции и уменьшить осложнения. В частности, гиалуроновая кислота является идеальным и уникальным материалом для вязкой хирургии. Гиалуроновая кислота, как ожидается, будет иметь еще большую ценность в хирургии отслоения сетчатки, открытой витректомии, восстановления поврежденных глазных ядер, трансплантации роговицы и глаукомы хирургии.

2.3.2 лечение заболеваний суставов

Гиалуроновая кислота и ее соли (гиалуронан)Являются основными компонентами синовиальной жидкости суставного хряща и играют важную роль в физиологической функции сустава. При заболевании суставов снижается содержание гиалуроновой кислоты в суставах и изменяются ее физические и химические свойства. Добавки экзогенной гиалуроновой кислоты могут способствовать увеличению эндогенной гиалуроновой кислоты, восстановлению смазки синовиальной жидкости, восстановлению хряща, сокращению производства воспалительных посредников, улучшению совместной функции. Большое количество клинических результатов показало, что гиалуроновая кислота имеет явный терапевтический эффект и является безопасной для заболеваний суставов, таких как остеоартрит и ревматоидный артрит, и имеет хорошие перспективы применения [8].

2.3.3 применение в медицине

Гиалуроновая кислотаИспользуется в качестве носителя наркотиков, который выполняет функции медленно отпускаемых наркотиков и способствует трансдермальному всасыванию наркотиков. Из-за большого молекулярного веса гиалуроновой кислоты молекулы взаимодействуют и переплетаются, образуя сеть в растворе. Эта сеть прикрепляется к молекулам препарата, что приводит к медленному выпуску препарата из носителя гиалуроновой кислоты. Скорость рассеивания в организме значительно замедляется, что приводит к долгосрочному, отсроченному эффекту.

Технология адресной доставки лекарственных средств предполагает сочетание гиалуроновой кислоты или ее производных с различными лечебными препаратами для формирования соединения, которое позволяет препаратам оставаться в различных патологических местах в организме, чтобы оказывать свое воздействие, тем самым уменьшая системные побочные эффекты лекарств.

2.3.4 содействие заживлению ран

После гиалуроновой кислотыУспешно применяется в глазной хирургии, а также в других хирургических процедурах. В настоящее время гиалуроновая кислота используется в кардиоторакальной хирургии, акушерстве и гинекологии, детской урологии, лапароскопической хирургии и других хирургических процедурах. Являясь высоковязким биологическим материалом, он предотвращает послеоперационное сцепление тканей и способствует заживлению ран.

2.3.5 в качестве диагностического показателя заболевания

Изменения в системе организации объединенных нацийКоличество гиалуроновой кислотыВ человеческой крови также может быть использован в качестве индикатора для диагностики заболеваний, чтобы помочь в диагностике некоторых заболеваний. Установлено, что количество гиалуроновой кислоты в крови пациентов с циррозом печени значительно возрастет [10], а повышение уровня гиалуроновой кислоты после трансплантации печени является ранним признаком отторжения тканей. При злокачественных опухолях изменения количества гиалуроновой кислоты связаны с инфильтрацией опухолевых клеток [1].

2.3.6 материалы тканевого машиностроения

Гиалуроновая кислота также имеет широкое применениеПерспективы в области биоматериалов. В настоящее время искусственная кожа и искусственные костные продукты успешно развиваются с использованием гиалуроновой кислоты, а также демонстрируют большие перспективы применения в исследованиях материалов для ремонта таких органов, как нервы и кровеносные сосуды [12]. Сфера применения гиалуроновой кислоты также постоянно расширяется.

3 подготовка гиалуроновой кислоты

3.1 метод экстракции тканей животных

Этот метод является самым ранним методом используетсяПроизводить гиалуроновую кислотуИ он использует такие материалы, как куриные комбы, человеческие пуповинные шнуры, свиная кожа, и глаза говядины vitreous в качестве сырья. Гиалуроновая кислота, извлекаемая из тканей животных, часто содержит много белка и других полисахаридов, что усложняет процесс экстракции, снижает урожайность, затрудняет очистку, повышает стоимость и качество продукции. Это также приводит к снижению молекулярного веса гиалуроновой кислоты в процессе экстракции [13]. В то же время ограниченные источники сырья, такие, как кокскомбы, ограничивают производство. В настоящее время наблюдается тенденция к постепенному замене метода экстракции тканей животных методом ферментации.

3.2 метод микробной ферментации

3.2.1 стрептококковый синтез гиалуроновой кислоты

Основные штаммы, о которых сообщалось за годПроизводство гиалуроновой кислотыСтрептококк. Чтоpyogenes (группа A) и Стрептококк. ЧтоЗоэпидемический синдром(группа C), Streptococcus Организация < < экки > >и Streptococcus equisimilis. Стрептококчи группы а являются высокопатогенными и не часто используются в качестве штамма для крупномасштабной ферментации; Группа C стрептококчи менее патогенны и часто используются в микробной ферментации. Недавние исследования показали, что в природе существуют два типа гиалуронанской синтазы (гиалуронанская синтаза, гиалуронанская с) : тип I и тип II. Синтаза в streptococci и позвоночных-это синтаза типа I hyaluronan, а синтаза типа II-только в пастерелла multocida¹⁴. Синтаза типа I, как правило, изучается в производстве. Оператор (оператор) по синтезу гиалуронана (гиалуронана с) состоит из трех генов гиалуронана sA, гиалуронана sB и гиалуронана sC, кодирующих гиалуронановый синтаз, удглюкозу-дегидрогеназу и удглюкозу-пирофосфорилазу, соответственно 15. Конкретный маршрут синтеза гиалуронана в стрептококке [16] показан на рис. 1.

3.2.2 выбор штаммов производства гиалуроновой кислоты

Штаммы стрептококка дикого типа в основном производят стрептолизин и гиалуронидаз. Стрептолизин действует как липсы красных кровяных клеток, убивая белые кровяные клетки и отравляя сердце; При смешивании с гиалуроновой кислотой, это также снижаетКачество гиалуроновой кислоты- да. Гиалуронидаз может разлагать гиалуроновую кислоту, снижая ее урожайность. Поэтому в крупномасштабном производстве принято сначала мутировать для получения дефективных штаммов гемолизина и гиалуронидазы, чтобы повысить качество и урожайность гиалуроновой кислоты. Методы мутагенеза включают физический мутагенез [17], химический мутагенез [18] и комбинированный мутагенез [19].

3.2.3 гиалуроновая кислота оптимизация условий ферментации

Стрептококк имеет высокие потребности в питании. Сыворотка, инфузия головного сердца и другие средства массовой информации, как правило, необходимы для хорошего роста. Однако эти питательные вещества стоят дорого, а их стоимость слишком высока для крупномасштабного производства. Поэтому вместо этого обычно используются сложные источники азота, такие, как пептон, дрожжевой экстракт и экстракт говядины. Источником углерода являются главным образом различные моносакхариды, наиболее часто используемым из которых является глюкоза. Другие питательные вещества включают неорганические соли и микроэлементы. Оптимизация культурной среды для различных штаммов может увеличитьВыход гиалуроновой кислотыВ определенной степени [20,21].

Стрептококк — это искусственный анаэроб, который может расти и синтезировать гиалуроновую кислоту как в аэробных, так и в анаэробных условиях, но более высокая урожайность и скорость преобразования продукта могут быть получены за счет аэродированной ферментации. Растворенный кислород в броте ферментации может быть увеличен за счет увеличения аэрации и двигательной скорости, но слишком высокая скорость может привести к механическому разложению гиалуроновой кислоты.

Значение pH является важным факторомФерментация гиалуроновой кислоты- да. Обычно она контролируется при температуре около 7,0. Бактерии не могут расти при значениях pH ниже 5,5 или выше 8,5. Стрептококк — это молочная кислотная бактерия, которая производит небольшие органические кислоты, такие как молочная кислота и уксусная кислота. В процессе ферментации значение pH должно быть нейтрализовано щелочным слоем для поддержания соответствующего значения pH.

Температура брожения, как правило, 37 градусов, но более низкие температуры, такие как 35 градусов или 33 градусов, также используются, или различные температуры используются на различных стадиях. На стадии семенной культуры и ранней стадии ферментации, 37°C культуры может привести к росту и размножению бактерий быстрее. На средней и поздней стадиях ферментации температура может быть соответствующим образом снижена. Сообщается, что это может привести к смещению метаболизма глюкозы с синтезирующих стенок бактериальных клеток на синтезирующую гиалуроновую кислоту, увеличивая ееВыход гиалуроновой кислоты[2].

Сохранение воды в водеЕмкость гиалуроновой кислотыПоложительно коррелируется с его относительным молекулярным весом, и чем выше молекулярный вес, тем лучше удерживающая способность воды. Таким образом, молекулярный вес также является важным фактором при оценке качества гиалуроновой кислоты. Армстронг [23] и другие пришли к выводу, что соответствующее увеличение аэрации и снижение температуры ферментации способствуют увеличению молекулярного веса гиалуроновой кислоты; Начальная концентрация глюкозы оказывает значительное влияние на молекулярный вес гиалуроновой кислоты. Кроме того, добавление глюкозамина, пировиновой кислоты, урацила и других подобных веществ в процессе ферментации может также способствовать увеличению производства гиалуроновой кислоты, поскольку они являются прекурсорами для синтеза гиалуроновой кислоты, и, добавив их, можно получить гиалуроновую кислоту с высоким молекулярным весом [24].

Брот ферментации может накапливать определенное количество свободных радикалов под аэрацией. Свободные радикалы могут привести к деградации гиалуроновой кислоты. Добавляя некоторые свободные радикальные мусорщики, такие как ванильная кислота,Салициловая кислота, соляная кислота и т.д., к броту ферментации может защитить гиалуроновую кислоту в определенной степени и увеличить относительную молекулярную массу гиалуроновой кислоты. Добавление небольшого количества лизозима в брот ферментации также может увеличить выход гиалуроновой кислоты. Lysozyme' функция s заключается в уничтожении клеточных стен бактерий, так что бактерии должны выделять больше гиалуроновой кислоты, чтобы защитить себя. Добавление некоторых пав, таких как икб, может деактивировать гиалуронидазу, тем самым повышая урожайность и относительный молекулярный вес гиалуроновой кислоты.

3.2.4 исследования процесса ферментации гиалуроновой кислотой

Раствор гиалуроновой кислотыN-типичная неньютоновская кезоновая жидкость; Скорость перемешивания и концентрация гиалуроновой кислоты оказывают значительное влияние на скорость газожидкого переноса кислорода; Ферментация при более высокой скорости перемешивания может получить более высокую производительность гиалуроновой кислоты 25], а использование реактора-смесителя сетки обеспечивает лучший эффект смешения, чем турбинный смеситель, что приводит к более высокой производительности гиалуроновой кислоты [26].

На более поздних стадиях ферментации, когда рост бактерий вступает в стационарную фазу, клетки начинают производить токсины и разлагающие ферменты. Ферменты вызывают аутолиз бактерий, а клеточные компоненты выпускаются в среду культуры, что затрудняет извлечение. Использование непрерывной культуры для производства гиалуроновой кислоты, непрерывной культуры в среде со стабильным составом, может уменьшить выражение этих ферментов и снизить темпы обновления клеточной стенки, что выгодно для разделения и очистки [27]. Тем не менее,Выход гиалуроновой кислотыЧасто нестабильна во время непрерывной ферментации. Холостой [28] и другие использовали метод периодического разбавления брота ферментации, увеличив его многократное разбавление до 0,4h ⁴, что увеличило урожайность гиалуроновой кислоты на 25% и сделало урожайность более стабильной.

3.2.5 исследования в области метаболической инженерии на основе гиалуроновой кислоты

 Метаболическая инженерия является новой дисциплиной, которая изучает модификацию метаболических путей для улучшения микробных характеристик и повышения урожайности конечной продукции. Широко используется для целенаправленного улучшения микробных штаммов. Исследователи изучили метаболический путь производства гиалуроновой кислоты стрептококком и обнаружили, что теоретический максимумКоэффициент преобразования гиалуроновой кислотыПревышает 0,84 г/г, в то время как скорость преобразования гиалуроновой кислоты в производстве составляет лишь около 0,1 г/г, и большая часть источника углерода преобразуется в небольшие молекулярные кислоты, такие как молочная кислота и уксусная кислота. Некоторые исследователи используют методы молекулярной биологии для регулирования ключевых узлов метаболической сети стрептококковой гиалуроны, пытаясь значительно увеличить урожайность и коэффициент урожайности гиалуроновой кислоты в пределах, допускаемых термодинамикой.

Чонг [16,29] и другие обнаружили, что энергетический метаболизм Str. zooepidemicus регулируется деятельностью окислителя надх. Они клонировали ген для оксидазы надха и перегрузили его в клетке. По мере повышения активности оксидазы нада основной продукт ферментации глюкозы также изменился с молочной кислоты на уксусную кислоту, в результате чего значительно возросла биомасса бактерий. На более поздних стадиях ферментации гиалуроновая кислота образует обертывания вокруг клеток, повышая вязкость брота ферментации, снижая содержание растворенного кислорода и ограничивая рост клеток и производство гиалуроновой кислоты. Haoning et al. [30] ввели ген гемоглобина (VGB) прозрачного тремеллы (vitreoscillA/данные отсутствуют.sp.) в стрептококк, что значительно улучшило использование кислорода бактериями, способствовало росту бактерий и увеличило производствоГиалуроновая кислота примерно на 20%- да. Стрептококк производит избыточную молочную кислоту во время ферментации, которая не только потребляет большое количество углеродного источника, но и снижает рн брота ферментации, препятствуя росту бактерий.

Wu³ et al. ввел в S. zooepidemicus ген системы полигидроксибутирата (PHB) и выразил ген phbCAB под индукцией IPTG, чтобы получить новый путь регенерации NAD, тем самым избегая накопления NADH и снижая синтез молочной кислоты. В то же время, NAD. Д.необходим для синтеза гиалуроновой кислоты, что также способствует синтезу гиалуроновой кислоты. Выход гиалуроновой кислоты в тряпичной фляжке увеличился на 29%. Krahulec³²] et al. обнаружили, что гиалуроновая кислота гиалуроновой кислоты b-глюкуронидного деформации была на 20% выше, чем у дикого типа, и молекулярный вес также был увеличен на 2%. Предполагается, что это происходит потому, что b-глюкуронидаза может гидролизировать свободную b-глюкуроновую кислоту из неснижающегося конца- полисахарид, и свободная b-глюкуроновая кислота может вызвать выражение его оперона, в результате чего отходы обильной глюкозы в среде.

3.2.6 исследования по производству гиалуроновой кислоты с использованием генетически модифицированных штаммов

Дикая группа а и группа с стрептококчи производят гемолизины, которые являются патогенными для человека и животных. Хотя штаммы мутантов, не являющиеся патогенными, отбираются для крупномасштабного производства, гемолизиновые остатки нельзя игнорировать во время ферментации; А стрептококковая ферментация стоит дорого. Поэтому в центре внимания научных исследований находится строительство новых инженерных штаммов GRAS (общепризнанных безопасными).

Ю. и др. [33 искусственно синтезировали sseA ген с. зоэпидемика, который кодирует синтазу гиалуроновой кислоты, и перенесли его в E. coli вместе с гомологическими генами стрептококковой гиалуроновой кислоты sB или гиалуроновой кислоты sB+Гиалуроновая кислота sC- да. Для получения рекомбинантных штаммов кишечной палочки с образованием гиалуроновой кислоты 190 мг/л и 160 мг/л, соответственно, и средним молекулярным весом 3,5-1,9-1,9-10. Новозимы ввели ген S. equismilis - гиалуронанв Bacillus subtilis. Манипулируя ключевыми этапами пути синтеза гиалуроновой кислоты, можно максимизировать экспрессию генов, увеличить производство гиалуроновой кислоты и контролировать ее молекулярный вес. Генная экспрессия не требует использования конкретных веществ, чтобы вызвать его, и гиалуроновая кислота, которую он выделяет, имеет высокую урожайность и легко восстанавливается.

Chien [34] и другие ввели гиалуроновую кислоту sA и гиалуроновую кислоту sB гены Streptococcus equi 1. Подсп.Zooepidemicus в NICE (система выражения с контролируемым низином) - лактококкlactis, в результате чего одновременное выражение гиалуроновой кислоты sA и гиалуроновой кислоты sB в Lactococcus lactis, и производство гиалуроновой кислоты достигает 0,65 г/л. Кроме того, некоторые люди использовали вирус хлореллы для заражения зеленых водорослей, чтобы разработать систему синтеза гиалуроновой кислоты. Хотя эти новые генетически модифицированные штаммы гиалуроновой кислоты не имеют конкурентного преимущества с точки зрения урожайности, они обладают тем потенциальным преимуществом, что молекулярный вес гиалуроновой кислоты можно контролировать, чистоту легко контролировать, и эти штаммы не производят токсинов, вредных для людей или животных, и не производят гиалуронидазу. Поэтому они более пригодны для производстваВысококачественная гиалуроновая кислота.

3.3 метод синтеза In vitro

Исследования показали, что у живых организмов гиалуроновая кислота синтезируетсяСинтаза гиалуроновой кислотыАктивизация синтеза СДПГ-glcua и СДПГ-glcnac. Поэтому в последние годы некоторые ученые пытались синтезировать гиалуроновую кислоту В случае необходимостиvitro с помощью ферзиматических методов и добились определенного прогресса. Ling MВ случае необходимостиet al. [35 усилили ген гиалоронана синтазы (sqHyal) от Str. equi, создали выражение plasmid псевдоним -sqHyal и превратили его в Escherichia coli DH5α. После индукции и культуры, sqHyal белок и активность были обнаружены в клеточной мембране. Используя клеточную мембрану, несущую этот фермент, UDP-GlcUA и UDP-GleNAc использовались в качестве субstrates для синтеза гиалуроновой кислоты с молекулярным весом 3,6 ×10⁶ В случае необходимостиvitro. Это примерно в 2,5 раза и в 5 раз больше молекулярного веса гиалуроновой кислоты, полученной методом ферментации и экстракции, соответственно.

Сиро кобаяси, профессор киотского университета в японии, искусственно синтезировал гиалуроновую кислоту через естественную реакцию полимеризации ферментов. В статье, опубликованной на ежегодном собрании химического общества японии, профессор сиро кобаяси сказал, что синтетический метод для гиалуроновой кислоты заключается в Том, чтобы сначала синтезировать гиалуроновую кислоту оксазолидин производный с использованием полисахаридного полимера, а затем добавить гиалуронидаз фермент, чтобы разрушить его, создавая комплекс производного и фермента. Наконец, фермент удаляется из раствора 90 - грационной реакции, и производится гиалуроновая кислота. В настоящее времяСинтетическая гиалуроновая кислотаПроизводимая в пробирке не отличается коренным образом от естественно производимой гиалуроновой кислоты, но ее структура менее чиста и в настоящее время находится на стадии исследований и разработок.

4. Выводы

В настоящее времяГлобальный спрос на гиалуроновую кислотуПродолжает расти с каждым годом. Хотя метод экстракции тканей является относительно зрелым, удовлетворить рыночный спрос путем экстракции гиалуроновой кислоты только из соединительной ткани человека и животных трудно. Стоимость производства гиалуроновой кислоты путем ферментации значительно снижается по сравнению с экстракцией, а урожайность и молекулярный вес также улучшаются, но эффективность преобразования все еще очень низка. Используя методы метаболической инженерии, ключевые узлы метаболического пути производства гиалуроновой кислоты стрептококком могут быть скорректированы в соответствии с метаболическим путем производства гиалуроновой кислоты стрептококком. Можно значительно увеличить урожайность и молекулярный вес гиалуроновой кислоты в пределах, допускаемых термодинамикой. В качестве альтернативы штамм может быть изменен с помощью методов генной инженерии для синтеза гиалуроновой кислоты в новом микроорганизме или за его пределами, что позволит сократить производственные издержки и повысить урожайность и качество гиалуроновой кислоты. С постоянным развитием молекулярной биологии технологии, это будет новое направление развития.

Ссылка на сайт

[1] мейер к., палмер джей-ви. Полисахарида животного юмора. 1. БиолChem,1934,107:629~634

[2] Герман д с,Denlinger JL,Balazs E a.экзогенная Na — гиалуронит в передней камере совы обезьяны и ее Воздействие на окружающую среду По состоянию на В настоящее время Внутриглазное отделение. На меня давят. В экспериментальном порядке Смотреть в глаза - да, сэр. 1984,39(2):137~152

[3]Fouissac E,Milas M,Rinaudo M.Shear rate, концентрация, молекулярная Вес (кг) и - температура воздуха Вязкость и вязкость 3. Категории иждивенцев Гиалуронат, глиноподобный полиэлектролитемакромолекул, 1993,26:6945~6951

[4] гиббс д - а, меррилл    Фу, смит к, и Аль.реология (al.Rheology)    - офгиалуронический Cid.биополимеры,1968,6(6):777~791

[5] ямада  - ти, кавасаки  T.Microbial (микробные)  Ii. Обобщение  Соединенные Штаты америки  - гиалуронан  И читин: новый - на подходе. Bioeng,2005,99(6):521~ 528

[6] бергерт  - GC, латуш  - икс, илуз  - ага. - ага. В настоящее время  1. Стоимость  Соединенные Штаты америки  a   Новая версия сайта  Наполнитель из материала  В процессе исправления положения  и  - косметические средства  Операция: дермейв  И дермадип, эстех       Пласт (пласт)        Цур,2001,25(4):249~255

[7] аршинов  Офтальмологический вискохирургический  - устройства. В: кохнен   - т, кох.   D. Д.    D. катаракта   и    1. Рефракционные свойства   Хирургия (предметы первой необходимости)    В офтальмологии, клинической      Медицина, Германия: спрингер,2005.37~62

[8] кортиво   Р, д   - на галате.   - а, кастеллани    I,et   - аль.гиалуроническая   Кислота способствует выражению эмбриона цыплят f6broblast и chondroblast.  1. Ячейка  Biol   По запросу Int  Отчеты,1990,14:111~114

[9] Юлия   Q, ван   F. F.    С, линг,   PX,et    Al.Chinese язык   Фармацевтический журнал,2005,40(7):485~488

[10] чжэн D. журнал организации объединенных наций Радиоиммунология,2007,20(3):233~ 234

[11] ю л, джисль. Китайский язык (english)  - джумал.  Соединенные Штаты америки  1. Биохимическая технология  Фармацевтика, 2007,28(2):127~129

[12] фан джей, сян дс, хуан   - да. - да. Китайский язык (english)    Медицинское обслуживание населения   Оборудование Joumal,2006,27(5):22~26

[13] Лу м, цзян   1. О   K,Xi   J. прогресс В биохимии   Биофизика,1999,26(6):596~600          

 [14] вайгель К.Т.Н  Общие сведения о компании  и   3. Каталитические нейтрализаторы  Механизмы и механизмы  Соединенные Штаты америки  В качестве бактерии   hyaluronan    - синтазы. Мслюбмб (IUBMB)   Жизнь,2002,54:201~ 211

[15] и#39; реган м., мартини Я, крещенци F, и др. молекулярные механизмы и генетика биосинтеза гиалуронан. Int J Biol Macromol,1994,16:283~286

[16] чон F. F. - би, нильсен 1. О К. аэробик Выращивание сельскохозяйственных культур Соединенные Штаты америки Streptococcus zooepidemicus и роль надх оксидазы. Biochem Eng J, 2003,16:153~162

[17] чжан с р, сюй   Вю, чжан п и др   Технологии,1999,26(1):1~4

[18]Meng Q   F,Teng    Лр, Гонконг    Сс, и, и   Аль.журмал (al.Jourmal)   Из джилинского университета (научное издание),2004,42(1):121~125

[19] Дэн и, ю л, рен    - LQ. - джунал. Джилинский университет (инженерное дело)    и     В области технологии    Издание,2005,35(2):210~ 213

[20] рангасвами V,Jain, D. ан.  Конференция организации объединенных наций по торговле и развитию В рамках процесса  для Производство и продажа И очистка гиалуроновой кислоты Стрептококк экки subsp.  Зоэпидемический синдром. Биотехнол (биотехнол)   Летт,2008,30(3):493~496

[21] лю ир, чэнь   - привет, лю   RJ,et  Al.High (высота над уровнем моря)  В области технологии  Письма, 2006,16(3):275~280

[22] ван р, чжан    Зк, вей. Привет    H,et и    На острове альгуанси    Сельскохозяйственные науки,2001,4:190~192

[23] аммстронг  D    C, джонс.  С. О.  R.Culture-культура   Условия эксплуатации  Влияние на окружающую среду   В молекулярной области Вес (кг) Недвижимость в болгарии  Соединенные Штаты америки - гиалуроническая болезнь - кислота; Производство и продажа - стрептококк  Зоэпидемический синдром. Группа по планированию семьи  1. Окружающая среда  Microbiol,1997,63 (7):2759~2764

[24] стангол С. методы работы И средства их достижения Для целей производства - гиалуроновой кислоты. США,6537795,2003

[25]Gao HJ,Chen  J,DuGC,et   Аль.журмал (al.Jourmal)  Соединенные Штаты америки  По химическому оружию   Промышленности и развитию Инжиниринг (Китай),2003,54(3):351~356

[26] хирута  0. 3. Применение  Соединенные Штаты америки  Maxblend fermentor для микробных процессий. Журнал по ферментации   и   Биоинженерия,1997, 83(1):79~86

[27] полупальто   Мг, цзян    Джей ди, кан    WK.streptococcus Зоэпидемический мутант  - штамм  для  Подготовка к конференции  - гиалуроническая болезнь  - кислота. EP:625576,1994

[28] бланк  - привет, маклафлин   - эрл, нильсен  Lk.стабильное производство гиалуроника  - кислота;  in   Streptococcus   zooepidemicus   Химиостаты оперировали в Высокий коэффициент разбавления. Биотехнология и биоинженерия,2005,90(6):685~693

[29] чон  Ф б, нильсен  1. О К. усиливающий эффект  В настоящее время   С помощью сотовой связи  Потенциал сокращения Streptococcus zooepidemicus. Биотехнология,2003, 100:33~41

[30] хао н, чжан Чэнь, чэнь, чэнь - GQ. Китай (Китай)    Биотехнология,2005, 25(6):56~60

[31]WuX,Gao H,Tian    G, и др. преобразование От стрептококуса зоэпидемика Гены, ответственные за Для синтеза полигидроксибутирата. В чем дело? Науки и техники Технологии,2002,7(4):387 ~392

[32] крахулек ж., крахулькова J. увеличение расходов Производство гиалуроновой кислоты По запросу: Streptococcus   equi  subsp.zooepidemicus Дефицит напряжения in  Бета-глюкуронидазе in  А. лабораторные исследования В каких условиях? Appl Microbiol Biotechnol,2006,71(4):415~422

[33] юй Хм, стефанопулос Г.метаболическая инженерия Escherichia coli для биосинтеза гиалуроновой кислоты. М. : метаб инг., 2008. 10(1):24~32

[34]Chien L J,Lee CK. - гиалуроническая болезнь Производство кислоты рекомбинантом  Lactococcus   - лакс. - лакс. Группа по планированию семьи  Микробиол (микробиол)  Biotechnol, 2007,77:339~346

[35] линг м, хуан  RB,Huang K,et al.Industrial  Микробиология, 2003,33(2):4~8