Что такое Papain и его применение в кормовой промышленности?

Папайские ферменты в основном встречаются в корнях, стеблях, листьях и плодах папайи, причем самые высокие концентрации в латексах отмечаются в незрелых плодах (Ye Qiteng В то же времяal., 1999); Чжао юанфан и др., 1999 год; И ин и др., 2000 год. Благодаря своей сильной белково-разрушающей способности и способности гидролизировать амидные и эфирные облигации, папайские ферменты широко используются в фармацевтической, пищевой, текстильной, кожевенной, кормовой и красительной промышленности (Wu Xianrong В то же времяal., 1988).

1 обзор ферментов папайна

Папин, получаемый из сока папайи, не является чистым ферментом. Эти сырые ферменты содержат не только папин, но и лисозимы, протеазы цистеина, целлюлазу, глюканазу, глутамин и соединения тиола с низким молекулярным весом. Исходя из изоэлектрических точек, цистеин-содержащие ферменты папайи латекс можно разделить на три основные категории: папайн, комплекс папайн комплекс (чимопапайн) и лисозым. У папы пи 9,55, у чимопапайна пи 10,10, а у лисозима пи > 11.0. В практически нейтральных условиях эти три фермента могут быть легко разделены хроматографией колонки обмена катионов. В латексе папайя на долю папайна приходится приблизительно 10% растворимых белков, на долю чимопапайна - 45%, а на долю лизозима - 20% (Ling Xinghan et al., 1998).

2 структура папайна

2.1 папайн

Папайн был первым ферментом, который был открыт, изучался и широко применялся. В 1937 году шары и линейные ткачи извлекли кристаллический папин сок из свежего сока папайи, используя метод сортировки соленых осадков. В 1970 году была определена последовательность папайна, а в 1971 году его третичная структура была определена с помощью рентгеновской кристаллографии.

Папайн имеет относительную молекулярную массу 21 000 и состоит из одной полипептидной цепи, состоящей из 212 остатков аминокислоты. В 1969 году хусейн и тове сообщили о последовательности аминокислотных соединений этого фермента (см. рис. 1).

Папайн содержит семь остатков цистеина, шесть из которых образуют дисульфидные связи в рамках трех цепей, в то время как остальные свободные остатки цистеина являются одним из основных остатков аминокислоты активного центра. Дрент и др. определили третичную структуру молекулы папаайна, которая эллиптична по форме и состоит из двух областей, с узким наклоном на стыке, где находится активное место фермента (Chen Zizhen, 1978).

2.2 Curd Papain

Папайн был впервые обнаружен, извлечен и назван Jansen иBalls в 1941 году (Jansen et al., 1941). Состав папайна является относительно сложным. В 1967 году кунимицу и др. разделили папайн, используя колонки ионного обмена, и разделили его на два типа в зависимости от порядка выделения: папайн A/данные отсутствуют.и B; В 1982 году Brocklehurst и др. сообщили, что папайн состоит из четырех компонентов. В 1985 году они использовали чрезвычайно медленный градиент NaCl для получения пяти активных пиков (Кунимицу (Kunimitsu)et al., 1985; Brocklehurst et al., 1987.

Силвия и др. (Silvia et al., 1989) провели анализ циркулярного дихроизма по четырем подтипам папайна. В настоящее время установлено, что папайн существует в различных подтипах с лишь одним или двумя различиями между аминокислотами (buttet al., 1984). Согласно данным из таких баз данных, как EMBL/GenBank/DDJB, существует по крайней мере девять подтипов, каждый из которых кодируется различными генами. Из них шесть подтипов состоят из полипептидных цепей с 218 аминокислотами, два-с 227 аминокислотами и Один-с 226аминокислотами. Последовательность аминокислотных соединений девяти подтипов показана на рис. 2. Результаты сопоставления показывают, что из этих девяти подтипов только подтипы II, подтипы III. Яи подтипы V имеют отдельные остатки аминокислоты на конкретных участках, которые отличаются от остатков других подтипов.

Maes et - эл. - привет.(1996) и Azarkan et al. (1996) определили трехмерную структуру папайна (см. рис. 3). Как показано на рисунке 3, полипептид складывающийся из папайна образует два домена одинакового размера, но разных форм — домен L и домен R. Домен L состоит в основном из α-helices, в то время как домен R состоит в основном из anti-parallel β-sheets. Активный сайт находится в интерфейсе между этими двумя доменами. Папайн относится к классу α+β, где C-terminal domain папайна является полностью словочной структурой, в то время как N-terminal domain является полностью словочной структурой (Schulz et al., 1979). В отличие от этого, папайн относится к классу "α/β", вторичная структура которого содержит больше "α-helices" и "β-sheets", а также различные модели складывания вторичных структур (Ssolis-Mendiola et al., 1992).

Папайн содержит восемь остатков цистеина, шесть из которых образуют внутримолекулярные дисульфидные связи, в то время как остальные две активные свободные сульфидные группы находятся на уровне остатков 25 и 117. Из-за их значительного расстояния и различных регионов эти два остатка не могут образовывать внутримолекулярные дисульфидные связи. Оба остаточных продукта имеют одинаковую активность. Из трехмерной модели papain, Cys117 расположен на молекулярной поверхности, что делает его легко доступным для производных реагентов и восприимчивым к полному и необратимому окислению. Каталитические Cys25 вместе с сохраняющимися Cys22 и Cys56 образуют микроузел S1. Из-за относительно большого "кармана" микроучастка S1, он практически не влияет на фермент#39;s субстратная специфика. Однако микрообъект S2, состоящий из остатков в позициях 67, 68, 69, 133, 157 и 207, оказывает влияние на фермент#39;s специфика субстратов (Maes et al., 1996).

2.3 папайя лысозым

В 1955 году смит и др. изолировали чистый кристаллический папайн от папайи латекс. Позже Haward и Glazer определили структуру и свойства этого фермента. Молекулярный вес папайна составляет 24 000, что выше, чем у животного лизозима. Она состоит из 223 аминокислот, состав которых показан в таблице 1. По сравнению с животным лизозимом, у папайна значительно выше уровни пролайна, тирозина и фениланина.

Расположение аминокислот на терминале n: глицин-изолейцин-серин-изолейцин. Расположение аминокислот на терминале с: серин-фенилалин-глицин. Более высокая структура папайна определялась циркулярной спектроскопии дихроизма, на долю одной спирали приходилось около 30% от общего количества. Спектроскопические измерения и реакции химических реагентов свидетельствуют о Том, что триптопанские остатки полностью интегрированы в молекулу фермента и не участвуют в связывания n-ацетилглюкозамина или активных реакций. Папайн лисозым содержит 8 остатков цистеина, 4 из которых образуют дисульфидные облигации, а 4 являются свободными группами SH. Одна группа SH необходима для фермента#39;s активный сайт. Структура активного участка папайна лисозима значительно отличается от структуры яичного белка и человеческого лисозима (Funatsu et al., 1982).

3 свойства папайна

3.1 свойства папайна и папайна протеазы

Структурное сходство протеазов папайна определяет их значительное сходство в свойствах. Как папайн, так и папайн протеазе обладают широкой субстратной спецификой, большинство пептидных связей могут быть в определенной степени гидролизированы папайном, однако темпы гидролиза сильно различаются между различными пептидскими связями, причем некоторые отличаются друг от друга на три порядка величины; Многие производные аминокислоты и пептиды могут служить субстратами, среди которых производные аргинина особенно чувствительны к гидролизу. Тем не менее, папин скрепляет различные связи гораздо быстрее, чем папин.

Янсен и др. (1941 год) сообщили, что папин касейн протеазе гидролиз касейн составляет лишь половину от папайна. Ebara и Yasunobue использовали касейн протеазы папайна для гидролиза цепи окисленного инсулина (окисленного перманганатом калия), выделяя фермент 's преимущество в гидролизирующих пептидных соединениях, содержащих кислотные остатки аминокислоты и ароматические остатки аминокислоты. При изучении цепей A и B инсулина и различных пептидных сегментов различной длины, содержащих глутамическую кислоту, лейл также отметил преимущество папайна в гидролизирующих пептидных соединениях, содержащих глутамическую кислоту. Следует отметить, что папин обладает более широкой субстратной спецификой в органических растворителях по сравнению с водными средами (Jin-Eon So et al., 2000).

Папин и папин чимопапин могут также гидролизировать амидные и эфирные облигации (Ling Xinghan et al., 1998). Они могут катализировать синтез олигопептидов, но производить несколько побочных продуктов, которые могут быть из-за широкой субstrate специфичности фермента#39; объект S1 (Jin-Eon So et al., 2000).

Оптимальные значения pH папайна и папайна протеазы варьируются в зависимости от субстрата. Папайн протеаз, используя кейсин в качестве субстрата, имеет оптимальную температуру реакции 80°C (pH 7,0) и оптимальный диапазон pH 3-5 °C при 37°C. Постоянная величина михаэлина (км) составляет 1,25 г/л (при pH 7,0 и температуре реакции 37°C) (Zucker et al., 1985). Оптимальное значение pH для papain составляет 7,0, а стабильность pH варьируется от 4 до 9. Фермент активность остается стабильной ниже 60 градусов и сохраняет некоторую активность до 90 градусов. Благодаря высокой термоустойчивости и хорошей стабильности, он подходит для обработки кормов.

ПХМД, хлорбензилмеркурная кислота, йодидная уксусная кислота, йодистая уксусная кислота, перекись водорода, ним и тяжелые металлы, такие как Hg²⁺, Ag⁺, Cu²⁺ и Zn², могут необратимо препятствовать ферментной активности. Папин, содержащий две свободные сульфидные группы, в большей степени подвержен окислению окислителями или связыванию ионами тяжелых металлов, что приводит к неактивации. Однако при наличии различных редукционных агентов (цистеин, тиогликолическая кислота, глутатион, ДТТ и т.д.) и некоторых металлических хелатирующих агентов (эдта) они могут уменьшить остатки цистеина в активном центре, тем самым активизируя ферментную активность (Deng Jing etal., 2004).

3.2 свойства папайна лизозима

Лизозим фермент, который может соединять 1,4 фазы между n-ацетилглюкозамином и n-ацетилглюкозамином. Папин лизозим — щелочный белок с изоэлектрической точкой 10,5, проявляющий только треть активности лизозима белого яйца против моноцитогенов листерии, с оптимальным pH 4,5 и оптимальной ионной прочностью 0,04-0,07. При разложении клеточных стен, он ведет себя аналогично животным лизозимом, он генерирует n-ацетилмурамную кислоту в конце снижения. У папы высокая активность в разложении читина. Например, его активность в разложении гелатинового титина в 10 раз превышает активность в разложении белоснежного лизозима яйца, а активность в разложении (n-ацетилглукозамин)₄ в 200 раз превышает активность белоснежного лизозима яйца. Изделия из фермента#39; разложение (n-ацетилглюкозамин) гравара (n-ацетилглюкозамин) гравара (n-ацетилглюкозамин). N- ацетилглюкозамин не существует в свободном состоянии, и реакции переноса сахара наблюдаются редко (So et al., 2000).

4 определение ферментной активности

4.1 определение активности папайна

Активность папайна определяется измерением фермента#39;s способность катализировать гидролиз субstrate белков при определенных условиях (таких как определенная температура и значение pH), при этом количество аминокислот, полученных в результате гидролиза белков, служит в качестве единицы ферментной активности. Чем выше количество аминокислот, производимых в тех же условиях, тем больше фермент 's каталитическая способность реакции и чем выше фермент активности.

Существуют три метода определения активности папайна: ультрафиолетовый спектрофотометрический метод с использованием в качестве субстрата casein, индофеноловый колориметрический метод и метод BAEE (этиловый эфир бензола-аргинина). Каждый метод имеет свои особенности. Ультрафиолетовый спектрофотометрический метод с использованием кейзеина в качестве субстрата прост в эксплуатации, дешев и подходит для сравнения ферментной активности во время очистки фермента, а также для определения активности папайновых продуктов и пищевых ферментов. Хотя колориметрический метод индофенола является громоздким, он требует простого оборудования, позволяющего его использовать в районах с ограниченными ресурсами; Метод BAEE является стабильным и воспроизводимым, что делает его пригодным для теоретических исследований свойств фермента и определения ферментной активности в реагентных ферментах (Wu Xianrong, 2005). Метод, указанный в фармакопеи соединенных штатов и китайских фармацевтических стандартах для определения активности папайна, представляет собой ультрафиолетовый спектрофотометрический метод с использованием в качестве субстрата кейсина (Luo Yanshou, 2000); Chen Deming et al., 2004.

При использовании ультрафиолетового спектрофотометрического метода для определения ферментной активности единица деятельности определяется следующим образом: в условиях испытания количество фермента, необходимое для высвобождения из казея гидролизированного вещества, растворимого в трихлоруксусной кислоте, в минуту, когда поглощающая способность на длине волны 275 нм эквивалентна поглощающей способности 1 граван/мл тирозина, представляет собой одну единицу ферментной активности.

Несколько вопросов требуют внимания при использовании этого метода: различные концентрации трихлоруксусной кислоты приводят к различным результатам ферментной активности. - наличие значительных различий в деятельности папайнов различного происхождения; Импортный кезин обладает лучшей растворимостью и более высокой ферментной активностью. Проверка должна проводиться в оптимальных условиях pH (Zhao Yuanfan et al., 1999).

4.2 определение активности коагуляционного протеазы папайна

Метод определения гидролитической активности коагуляционного протеазы папайна использует ультрафиолетовый спектрофотометрический метод с использованием в качестве субстрата касейна. Этот фермент также обладает коагуляционной активностью по сравнению с папайном, единица коагуляционной активности определяется как количество фермента, необходимого для коагуляции 1 мл обезжиренного молока (содержащего 0,01 моль/л CaCl₂) в течение 40 минут, которое определяется как одна единица ферментной активности, т.е. одна единица Soxhlet (SU). Относительная активность (RU) используется для указания влияния различных факторов (Arima et al., 1967).

4.3. Раздел 4.3  Определение активности папайна лизозима

Как правило, существуют три метода определения лизозимной активности.

Использование клеточной стенки в качестве субстрита, фермент активность указывает на изменение мутности до и после действия.

Использование культурного носителя моноцитогенов листерии в качестве субстрата, фермент активность обозначает изменение мутности до и после действия.

Поскольку два вышеупомянутых метода связаны с реакциями твердой и жидкой фазы, трудно точно измерить скорость реакции. Поэтому некоторые исследователи подготовили однородный субстрат с использованием водорастворимого полисахарида гексана диола читина для определения ферментной активности.

Спектрофотометрический метод: при 450 нм растворить определенное количество замороженного бактериального порошка или оттереть растворимые бактерии суспензии в определенном объеме фосфатно-буферизованного раствора, чтобы достичь поглощающего значения около 1,3. Этот субстратный раствор и стандартный фермент вырабатываются при температуре 25°C в водяной ванне. Поместить 2,5 мл субструта в кювет 1 см в водяной ванне, добавить 0,5 мл фермента раствора, начать отсчет времени, записать показания E1 в 1 минуту и E2 в 2 минуты, и рассчитать активность фермента по формуле. Различные стандартные ферменты с различной ферментной деятельностью соответствуют различным значениям дуги, и ферментную активность используемого стандартного фермента можно рассчитать на основе этих значений дуги, тем самым проверяя точность обнаружения (Zhang Yong, 2004).

5 иммобилизация папайна

Иммобилизованные ферменты — это новая технология, разработанная в 1960 - х годах. Иммобилизация означает процесс объединения свободных клеток или ферментов с твердым нерастворимым носителем с использованием физических или химических методов для поддержания их активности и обеспечения возможности многократного использования. В целях повышения эффективности использования папайна и сокращения производственных издержек исследователи во всем мире провели обширные исследования по вопросам иммобилизации и применения папайна.

В 1961 году дж. чебрай успешно имплантировал папайн на полиаминокислотном носителе и использовал его для гидролиза фрагментов грау-глобулина. В 1977 году дж. В 1978 году п. монсан и др. во франции использовали аминоалкилированное микропористое стекло в качестве средства соединения папайна с поверхностью, а также применяли его для очистки пива (Ling Xinghan et al., 1998).

Xu Fengcai et al. (1992) использовали целлюлозу и нейлон сахарного тростника для обездвиживания папайна, определили ферментативные свойства обездвиженного фермента и применили его для уточнения содержания пива. Ли хонг и др. (Li Hong et al., 2001) использовали микросферы читосан для иммобилизации папайна, изучали ферментативные свойства иммобилизованного фермента и применяли его к гидролизу кейсина для производства тирозина. Авторы также провели ряд исследований в этой области, включая иммобилизацию папайна с использованием шелковых волокон из шелкопрядов, изучили ферментативные свойства иммобилизированного фермента и применили его к гидролизу касейна для производства тирозина, а также к безшелковому папайну в реакторе с пакетным слоем и его применению, все из которых дали удовлетворительные результаты (Chen Fangyan et al., 2004, 2005a, 2005b) и получили соответствующие иммобилированные продукты папайна.

6  Применение папайна в кормовой промышленности

При переработке пищевых продуктов образуется большое количество белков, таких как перья животных, кровь животных после убоя, обрезь Рыбы и головки рыб при переработке Рыбы. Эти белки, когда они непосредственно загружаются в корм, животных трудно переварить и поглотить. Их выброс не только приводит к разбазариванию ресурсов, но и загрязняет окружающую среду. Используя протеазы для гидролиза этих белков в растворимые мелкомолекулярные белки и аминокислоты, они становятся легко усваиваемыми и поглощаемыми животными. Это не только позволяет разрабатывать недорогостоящие высококачественные белковые кормы, но и повышает эффективность использования кормов и снижает затраты на корм (Lu Shimin et al., 2001; Тан айхуан и др., 1998 год; Yang Ping et al., 2008. В настоящее время ферменты животных белков являются слишком дорогими для гидролиза; Методы микробной ферментации подвержены загрязнению Другие бактерии и могут содержать токсины; Тем не менее, papain обладает высокой активностью, высокой термоустойчивостью и хорошей стабильностью, что делает его пригодным для обработки кормов.

Кроме того, при добавлении папайна в качестве кормовой добавки к кормовому рациону корма он помогает пищеварению кормов, повышает эффективность кормов, снижает потребление кормов, улучшает темпы роста поголовья скота и оказывает значительное влияние на производство молока, качество молока и профилактику мастита у молочных коров.

Чжан цин и др. (Zhang Qing et al., 1996) добавляют 0,3% папайна в корм для креветок и изучают изменения в активности папайна во время производства и их влияние на аквакультуру. Они обнаружили, что в условиях производства кормов для креветок (85 градусов, 45 минут), папайн потерял активность была тяжелой. Тем не менее, в условиях производства кормов для птицы (температура 75 градусов) протеазы сохранились довольно хорошо. Таким образом, в условиях пеллетизации температура, при которой фермент может быть сохранен, составляет около 75 градусов. В разведении креветок она продемонстрировала определенный стимулирующий рост эффект, увеличив урожайность на 5%.

Binshiyu et al. (1996) добавляют 0,1% папайна в рацион растущих свиней, что улучшает ежедневный прирост веса и коэффициент преобразования кормов, причем наиболее значительный эффект наблюдается у свиней весом 10-20 кг (P <) 0,01. - 1. Результаты показывают, что добавление папайна в рацион растущих свиней на ранней стадии роста является наиболее целесообразным и может также использоваться в умеренных количествах на средней стадии роста.

He Ting et al. (1992) кормили цыплят мясного типа диетой, дополненной папайном (40 000 единиц/кг корма). Результаты показали, что, несмотря на отсутствие существенных различий в среднем приросте веса между группами, дополненными папайном (P >) 0.05 потребление кормов было несколько ниже во всех экспериментальных группах по сравнению с контрольной группой. Кроме того, использование белка FS (ферментированная кровяная пища) в рационе питания было более эффективным, чем рыбная пища. Причиной может быть то, что FS белковый корм содержит не только животных крови, но и различных растительных волокон торт и пищевые носители, которые могут позволить другим ферментам в папайне оказывать свое влияние.

7. Выводы

Папайн является чистым натуральным продуктом с сильными протеолитическими гидролизами и синтезированными возможностями, а также коагуляцией, липолизом и бактериологической деятельностью, что делает его очень универсальным. В настоящее время глобальный коэффициент применения папайна является следующим: 75% в пивоваренной промышленности и производстве напитков, 10% в мясоперерабатывающей промышленности, 5% в рыбной промышленности, 3% в фармацевтической промышленности, 5% в кормоперерабатывающей промышленности и 2% в других областях. Очевидно, что коэффициент применения папайна в кормовой промышленности относительно низок, что указывает на значительный потенциал для дальнейшего развития. Причинами могут быть: относительно высокая стоимость фермента при переработке кормов, значительная потеря ферментной активности, что ограничивает его применение; Или, в качестве кормовой добавки, фермент не используется научно в процессе кормления. Поэтому вопрос о Том, как более эффективно и устойчиво расширять и поддерживать деятельность папайн; И как правильно и разумно использовать этот фермент в различных видах животных и на различных стадиях кормления, чтобы максимизировать его эффективность, являются ключевыми областями, достойными будущих исследований и разработок.

Ссылки на статьи

[1] е цитенг, чэнь цян. Применение папайна [J].Наука и техника о тропических культурах гуанси, 1999(4):34-35.

[2] чжао юанфан, дин ренкван. Технология обработки и применение папайна [J].Журнал юньнаньского нормального университета, 1999, 19(5):46-48.

[3] и ин, тан айхуан, лю нин. Исследование, посвященное процессу производства папайна [J].Сельскохозяйственные науки гуйчжоу, 2000, 28(5): 24-25.

[4] у сяньжун, чжу ликан. Папа [дж]. Журнал пекинского сельскохозяйственного университета, 1988 год, 14(1): 13-17.

[5] лин синган, у сяньжун. Выращивание папайна и папайи [м]. Пекин: China Agricultural Press, 1998:104.

[6] чэнь цзечжэнь. Пищевая энзимология [м]. Тайвань: издательство фувен, 1978: 142.

[7] Kunimitsu  - к, - ясуноба К. К. - т, - чимопапен I  - ви. - привет. В настоящее время Хромато-графический 3. Фракция  Соединенные Штаты америки Часть 2 из 3 - очищенные, очищенные - чимопапен  and  В настоящее время Характеристика кристаллического чимопапайна [J]. Биохимика и био - Физика Acta, 1985, 828(2):413-417.

[8] броклхерст - к, - уиленброк. F, F,F, - салих е. Цистеинные протеиназы [J]. Новая комплексная биохимия, 1987,16:139-158.

[9] Сильвия С м, Рафаэль з л, а.рохо-домингес и др. Структурная сими-величие форм чимопапайна, обозначаемое циркулярным дихроизмом [J]. Биохимический журнал,1989, 257:183-186.

[10] батл D. Д. - джей, - баррет. A  - джей. - привет. - чимопапен Хроматографические пурификационные и иммунологические характеристики [J].  Biochemical Journal,  1984 год, 223(1):81-88.

[11] май - д, Компания < < буккаерт > > - джей, Организация < < пуртманс > > F,  et  al.  Ii. Структура Чимопа-боль с разрешением 1.7A [J]. Биохимия, 1996,35:16292-16298.

[12] азаркан М, доминик м, джули б и др. Тиол пегиляционные установки-тейты очистки чимопапайна, что приводит к дифракционным исследованиям с разрешением 1.4A [J]. Журнал хроматографии а, 1996 год, 749: 69-72.

[13] шульц г - рик, ширмер. Принцип, согласно которому Содержание белка в крови Ii. Структура  [м]. Нью-Йорк: спрингерверлаг, 1979:44-107.

[14] солис-мендиола с, арройо-рейян а, эрнандес-арана а. цирку — лар дихроизм цистеиновых протеинов из папайи латекс — свидетельства различий в складывании их полипептидных цепей. Биохим [дж]. Биохимика и биофизика Acta, 1992, 1118:288-292.

[15] фунацу, кацутоши и цуру, даисуке. Перевод ли синфу. Лизозим [м]. Наука и техника шаньдуна, 1982:74-76.

[16]Jansen E F, Balls A K. Chymopapain: новая кристаллическая белка 3. Папайя - латекс.  [J].   В настоящее время  Журнал по теме  Соединенные Штаты америки  Биологического оружия и  Химия, 1941,137:459-460.

[17] чжин ын со, чон шик син, бён ги ким. Синтез трипептида с протезированным катализатором (RGD) [J]. Фермент и микробные технологии, 2000,26:108.

[18] цукер - с, - батл. D. Д. - джей. - привет. В настоящее время - протеолитик Мероприятия в области развития Из чимопапайна, папайна, папайи протеиназ [J].  1. Биохимика et  1. Биофизика Acta, 1985, 828(2):196-204.

[19] Дэн цзин, чжао шуцзинь. Ферментативные свойства соагуляционной протеиназы папайи [J]. Аминокислоты и биологические ресурсы, 2004, 26(2):18-20.

[20] так J E, шин Джей эс, ким би джи катализирована Синтез рипептида (RGD) [J]. Фермент и микробная технология, 2000, 26(2):108 — 114.

[21] Wu, X. R. разработка и применение папайна [J]. Журнал китайского сельскохозяйственного университета, 2005, 10(6):11-15.

[22] Luo, Y. X. исследование метода определения активности папайна [J]. Китайский фармацевтический журнал, 2000, 35(8):556-558.

[23] чэнь демей, фу сюхуан. Применимость методов анализа ферментной активности папайна в фактическом производстве [J]. Журнал гуандунского фармацевтического университета, 2004, 20(3):244-245.

[24] Arima K, Shinjiro I, Gakuzo T. молочный фермент, сгущающий микроорганизмы, часть I, скрининговая проверка и идентификация сильного грибка [J]. Сельскохозяйственная биология и химия, 1967, 31(5):540-545.

[25] чжан ё н. Lysozyme и его применение в пищевой промышленности [J]. Зерноперерабатывающая и пищевая техника, 2004(3):64-65.

[26] сюй фенцай, чжан вэй, Лу ганьюэ и др. Исследование по вопросу о иммобилизации папайна на сахарный тростник багассы целлюлозы и его применении [J]. Журнал южно-китайского сельскохозяйственного университета, 1992, 13(1):53-59.

[27] сюй фенцай, ли минчи. Исследование по иммобилизации папайна на нейлоне и его применению [J]. Биохимия, 1992, 8(3):302-306.

[28] ли хон, ван вэйцзюнь, сюй фэнцай. Исследование характеристик читосана microsphere-impapain [J]. Журнал южно-китайского сельскохозяйственного университета, 2001, 22(2):56-58.

[29] чэнь фаньян, чжи пинсян. Исследование по иммобилизации папайна на шелковый шелковый фиброин [J]. Журнал южно-китайского сельскохозяйственного университета, 2004, 25(3):83-86.

[30] чэнь фаньян, чжи пинсян. Исследование характеристик папайна, иммобилизованного на шелковый фиброин [J]. Журнал южно-китайского сельскохозяйственного университета, 2005, 26(4):81-83.

[31] чэнь фаньян, чжи пинсян. Исследование реактора-наполнителя шелка из безволокнистого папайна и его применения [J]. Наука о шелководстве, 2005, б, 31(3):286 — 289.

[32] лю шимин, тан айхуан. Гидролитическое действие папайна на белок свиной кровяной муки [J]. Сельскохозяйственные науки гуйчжоу, 2001, 29(4):6-7.

[33] тан айхуан, ян сон, сян лангтао. Оптимальные условия для гидролиза папайна кормового белка [J]. Журнал горного сельского хозяйства и биологии, 1998, 17(2):106-109.

[34] ян пин, ся юнцзюнь, фан вэйцюань. Гидролитическое воздействие папайна на побочные продукты тилапии [J]. Наука о рыболовстве, 2008, 27(6):290-292.

[35] чжан цин, ли жуоджао, чэнь кэнгл и др. Исследование по вопросу о добавлении папайна в корм для креветок [J]. Кормовая промышленность, 1996, 17(5): 8-10.

[36] бин шию, Пан шичжун. Применение папайна в рационе растущих свиней [J]. Зерновые и кормовая промышленность, 1996, 17(7): 24-25.

[37] He Ting, Liang Lin, Pan Suihua, et al. Эффект добавления папайна в рацион бройлеров цыплят [J]. Гуандунский журнал животноводства и ветеринарии, 1992(2): 9-11.