Из чего изготовлен аллюлозный порошок?

D. Д.Allulose (D- псикозаor D-1. Аллюлозы) is a monosaccharide that occurs naturally in very small quantities. It is soluble in water, methanol иethanol, but not in acetone. Its melting point is 109 °C. D  Аллюлоза — диастереоизомер D Фруктоза в положении C3 и альдопентозный изомер редкого сахара D аллозы (рис. 1). (рис. 1) встречается в небольших количествах в природе в инжире, сахарном тростнике, сухом фрукте, сахарной продукции, пшенице и растениях рода Tribulus.

D аллюлоза обладает особыми благотворными свойствами для человеческого организма, такими как нулевые калории, регулирование глюкозы в крови и антиокисление. Его сладость схожа с сахарозом (70%) и считается заменителем сахарозы с наибольшим потенциалом крупномасштабного применения [1]. По сравнению с D Фруктоза и D - глюкоза, ди Аллюлоза может генерировать больше антиоксидантов, которые могут поддерживать антиоксидантный статус пищи в течение длительного времени и сохранять вкус, цвет и текстуру пищи [2-4].

In addition, it also has a significant effect on plants. Researchers at Kagawa University in Japan found that D-1. Аллюлозыcan induce crops such as rice По адресу:defend against pests иregulate plant growth [1]. In 2011, В настоящее времяUS Food and Drug Administration (FDA) determined that D-allulose is generally recognized as safe (GRAS) дляfood. D-allulose can be used as a sweetener or as a component Соединенные Штаты америкиfood additives, and has broad application prospects in the fields of diet, health care medicine and agriculture. As a new type of functional sweetener, its huge commercial value and markВ то же времяprospects are waiting to be developed. This paper reviews the research progress of the physicochemical properties, synthetic process and genetic engineering modification of D-allulose, and discusses the development prospects of D-allulose with D-allulose 3- эпизодический стеретьas the object to predict the development prospects of D-allulose and provide a theoretical reference дляfuture research trends.

1 D стратегия синтеза аллюлозы

D  The chemical synthesis of allulose mainly uses glucose as the raw material, molybdate as the catalyst, and goes through chemical catalysis, chromatographic separation and purification, concentration and crystallization to prepare crystalline D  Аллюлоза [5]. Bilik В то же время- эл. - привет.[6] ускорили производство D Аллюлоза от ди Фруктоза путем добавления ионов молибдата в кислой раствор. Однако полученная смесь содержала лишь 0,5% D allulose  Составляет лишь 0,5%, и смесь также содержит 4,5% d-сорбитола, 1,0% d-тагатозы и другие вещества. Урожайность была низкой, и было много побочных продуктов, что не способствовало последующему разделению и очистке. McDonald [7] использовал трехступенчатый химический метод для преобразования 1,2,4,5 - ди-о-изопропилиденебета-д-фруктофуранозного окисления и уменьшения для получения D - аллюлоза.

Doner [8] boiled D fructose in a mixture of ethanol and triethylamine to prepare D allulose. Almost all chemical methods for preparing D  Аллюлозы имеют такие проблемы, как низкая урожайность, громоздкие последующие операции по разделению, легкое загрязнение тяжелых металлов и кислотных сточных вод и многие побочные продукты. По сравнению с химическим синтезом экологически чистый биологический метод стал новой точкой исследования. Биологический метод синтеза D Аллюлоза использует D Фруктоза в качестве субстрата и катализаторов D ⁃psicose 3 ⁃epimerase (DPE фермент) или D ⁃tagatose 3 ⁃epimerase (DTE enzyme) для выполнения D ⁃psicose 3 ⁃epimerase реакции на D  Фруктоза возникает в результате реакции диастереоизомеризации. Из-за высокого содержания D фруктозы в системе продукта, продукт должен быть отделен и очищен с помощью ионной обменной смолы, чтобы получить конечный продукт. По сравнению с химическим методом, биологический синтез D аллюлозы не только является низким по стоимости, но и безопасным и экологически чистым, и он менее вероятно вызывает загрязнение, поэтому он имеет широкие перспективы развития.

2 D аллюлозный биосинтез

2. 1 скрининг ключевых ферментов

В 1993 году японские ученые Izumori et - эл. - привет.Этот фермент наиболее специфичен для д-тагатозы, поэтому он был назван DTE фермент [10]. Фермент DPE из Agrobacterium tumefaciens может, в частности, катализировать d-фруктозу (700 г/л) для получения d-аллюлозы (230 г/л) с коэффициентом преобразования 32,9% [11 12]. Ризобий из почвы (Sinorhizobium sp.) становится проницаемым после обработки толуолом и катализаторов 700 г/л фруктозы (3,9 моль/л), чтобы производить 37 г/л алдонической кислоты в оптимальных условиях [13].

Цзян бо's team at Jiangnan University is committed to screening for new D  allulose industrial strains. They screened a strain Из российской федерацииa fish pond water sample with a high D  Аллюлозный урожай и идентифицировал его как родобактерские спаероиды, по имени родобактерские спаероиды SK011. Этот штамм может давать d-аллюлозу с выходом 6,54%, когда d-фруктоза (36 г/л) используется в качестве субстрата. Из исследования следует, что DTE фермента, производимый родобактер sphaeroides SK011 вызывает диастереоизомеризацию D-fructose на позиции C3 для производства d-аллюлозы. Впервые в китае сообщается о штамме, способном биотрансформировать d-фруктозу в d-аллюлозу [14]. В последние годы ученые внутри страны и за рубежом успешно обнаружили ферменты DTE и DPE различных штаммов, заложив прочную исследовательскую основу для дальнейшей работы. Краткая информация о конкретной ситуации приводится в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, рн, соответствующая максимальной ферментной активности DTE от Dorea sp. DPE и R. sphaeroides, составляет 6,0 и 9,0, соответственно, а рн, соответствующая максимальной ферментной активности других DPE и DTE, составляет 7,0 ~ 8,0. Температура, соответствующая максимальной ферментной активности DTE от R. sphaeroides составляет 40 градусов, в то время как температура, соответствующая максимальной ферментной активности DPE от T. primita's DPE и Dorea sp.' максимальная ферментная активность s DPE соответствует температуре 70 °C, а температура, соответствующая максимальной ферментной активности других DPE и DTE, находится между этими двумя температурами. Большинство DPE демонстрируют высокую ферментную активность в присутствии Co2+. При 60 °C период полураспада фермента DPE от C. cellulolyticum составляет 408 мин, что на сегодняшний день является самой высокой термостойкостью, о которой сообщается для DPE и DTE. Фермент F. plautii DPE ускоряет реакцию 750 г/л fructose при pH 7,0 и 65 °C в течение 60 мин, который может производить 239 г/л аллюлозы, с коэффициентом преобразования 32%, и интенсивность производства до 353 г /(л · ч). DPE Desmospora sp. и DPE Dorea sp. имеют самые высокие коэффициенты преобразования для D фруктозы и D аллюлозы; Кроме того, реакция, катализируемая D-fructose и D-allulose реакции D-fructose и D-allulose обратима. Интересно отметить, что в большинстве случаев DPE катализирует производство d-фруктозы из d-аллюлозы в 2-3 раза эффективнее, чем производство d-аллюлозы из d-фруктозы (за исключением C. scindens DPE, который катализирует d-аллюлозы 7). 2 раза, что указывает на то, что фермент в большей степени способствует катализатору D - аллюлоза. В настоящее время содействие промышленному производству D Аллюлоза остается сложной и горячей темой для ученых, и проверка эффективного каталитического фермента, пригодного для промышленного производства, стала узким местом.

2.2 фермент/катализатор клеток

Технология фермента/катализаторов клеток имеет чрезвычайно важное значение в области пищевой биотехнологии. Она участвует в самых различных процессах: от виноделия и производства сыров до молочной промышленности, хлебопекарной промышленности, мясоперерабатывающей промышленности, крахмальной и сахарной промышленности, нефтяной промышленности и проверки безопасности пищевых продуктов, производства напитков и соков и т.д. Большинство ферментов могут значительно ускорить процесс реакции, не нарушая химического равновесия, за счет снижения энергии активации химической реакции или активации субстрата, тем самым значительно увеличивая скорость реакции.

These advantages are very consistent with the development thinking of the food industry, and enzyme/cell catalysis technology has also become the mainstream technology for the industrial Производство и продажаof D-allulose- да. Бай вей и др. [26] клонировали ген dpe из - клостридиумcellulolyticum H10 и выразили и очистили его в B. subtilis. В оптимальных условиях 2,5 градиента очищенного фермента дпэ стимулировали производство d-аллюлозы из 500 градиентов d-фруктозного раствора (10 г/л) для производства d-аллюлозы с коэффициентом преобразования 27,3%.

The DPE enzyme Из российской федерацииA. tumefaciens (AtDPE) has poor thermal stability. After being modified По запросу:protein engineering technology, the DPE enzyme can catalyze the production of 178 g/L D-allulose from 700 g/L D-fructose under optimal reaction conditions, with a conversion rate of 25%; while the wild-type AtDPE enzyme can only produce 107 g/ L D  Аллюлоза [27]. Использование целых клеток для стимулирования производства D Аллюлоза от ди Фруктоза более удобна, чем энзиматический катализатор. Ген dpe от двойного мутанта I33L/S213C а. тумефасиенса был выражен в E. coli. 4 г/л бактерий может катализировать 700 г/л d-фруктозы для производства 230 г/л d-аллюлозы, с коэффициентом преобразования 33%. Однако при использовании сырого экстракта фермента в реакции использовалось только 182 г/л D  Аллюлоза, со скоростью преобразования 26% [28]. Кроме того, после того, как dpe ген с. целлюлолита был выражен в E. coli, культурный бульон может напрямую катализировать 750 г/л d-фруктозы, чтобы получить 218 г/л d-аллюлозы, а коэффициент преобразования достиг 29% [17]. После того как ген dpe из Clostridium bolteae был выражен в E. coli, 2 г сухого порошка c-клетки C. bolteae стали катализатором преобразования 750 г/л fructose в 216 г/л алдонической кислоты с коэффициентом преобразования 28,8% [16].

2. 3. Технология иммобилизации

По сравнению со свободными ферментами, иммобилизованные ферменты/клетки могут дополнительно повысить стабильность ферментов, продлить срок службы ферментов и имеют преимущества в разделении продуктов и возможности повторного использования, которые не могут сравниться с бесплатными ферментами. Поэтому промышленное производство d-аллюлозы часто использует иммобилизованные ферменты или иммобилизованные клеточные технологии. Itoh et al. [29]извлекли DTE (PsDTE) из культурных псевдономов sp. ST 24 и иммобилизовали фермент на Chitopearl beads BCW 2503 носителей.

После добавления d-фруктозы, около 20% фруктозы была преобразована в d-аллюлозы после 48 часов реакции. После дальнейшей оптимизации, Chitopearl beads BCW 2510 иммобилизованный PsDTE может конвертировать 25% d -fructose в d -allulose после реакции на 40 °C за 60 d [30]. В каталитическом процессе DPE (AtDPE) в Agrobacterium tumefaciens добавление борной кислоты в систему реакции может эффективно повысить эффективность преобразования всего каталитического процесса. Это объясняется тем, что способность борной кислоты к d-аллюлозе сильнее, чем способность борной кислоты к d-фруктозе. В процессе обратимой реакции, после связывания борной кислоты с d-аллюлозой, концентрация d-аллюлозы в системе снижается. Для поддержания баланса всей системы реакции, больше субстрата (D-fructose) движется в направлении вперед (D-allulose) реакции. Концентрация снижается. Для поддержания баланса всей системы реакции, больше субстрата (D фруктоза) движется в направлении вперед реакции (D аллюлоза).

Тем не менее, есть предел количества борной кислоты, которые могут быть добавлены. Когда молярное соотношение борной кислоты достигает 0,6, количество d-аллюлозы достигает максимума. Если молярное соотношение превышает 0,6, то количество d-аллюлозы имеет тенденцию к снижению [31]. При использовании дуолита а568 бус в качестве иммобилизационного перевозчика выход d-аллюлозы (441 г/л) и скорость преобразования реакции (63%) иммобилированного AtDPE с добавлением борной кислоты в 2,3 раза выше, чем у иммобилированного AtDPE без борной кислоты, а интенсивность производства в 1,3 раза выше, чем у иммобилированного фермента без борной кислоты [32]. 3 раза [32].

Когда изомеры глюкозы GI Thermus thermophilus и AtDPE mutant (Ile33Leu/Ser213Cys) были одновременно установлены на клеточной стенке спор Saccharomyces cerevisiae, скорость преобразования глюкозы в d-аллюлозу составила 12% [33]. Ген dpe Ruminococcus sp. был клонирован и выразил в Bacillus pumilus. После очистки и иммобилизации фермента DPE на анионной обменной смоле иммобилизованный фермент сохранил около 70% своей ферментной активности после 10 повторных видов применения, а скорость преобразования каталитической реакции может достичь 26%. По сравнению с DPE, производимым оригинальной бактерией, DPE фермент значительно улучшил растворимость белка, биологическую активность и выражение и секрецию по сравнению с DPE, производимым оригинальными бактериями [34].

3 методы генной инженерии 

3.1 структура фермента

Для достижения промышленного производства d-аллюлозы, исследователи генетически модифицировали DPE фермента, используя методы молекулярной биологии, чтобы дать ему потенциал для промышленного применения. Структура белкового хрусталя AtDPE была проанализирована с использованием рентгеновской дифракционной технологии, которая может способствовать дальнейшему изучению каталитического механизма DPE. Молекулярное моделирование показало, что AtDPE представляет собой тетрамерическую протеазу, состоящую из четырех идентичных подгрупп a, B, C и D, как показано на рисунке 2(a) [35]. Каждая подединица состоит из 8 слоёв и 12 слоёв, и 8 слоёв плотно окружены 12 слоёв, как показано на рисунке 2(b) [35]. Фермент является ферментом, зависящим от ионов металла. Glu150, Asp183, His209 и Glu244 связывают ионы металлов и образуют активный центр AtDPE. Trp112, Glu156 и Arg215 являются ключевыми площадками для связывания фермента под давлением [36]. Трехмерная структура P. cichorii DTE (PcDTE) показывает, что PcDTE имеет такую же каталитическую и пространственную структуру, что и AtDPE, и состоит из четырех подблоков: Mol a, Mol B, Mol C и Mol D [21], как показано на рис. 3.

Choi et al. [36]использовали подверженные ошибкам ПЦР для случайного мутации AtDPE и проверяли на наличие двух штаммов мутантов с высокой стабильностью, Ser213Cys и Ile33Leu. В то же время периоды полураспада двойного мутанта Ile33Leu/Ser213Cys (265 мин) в 26, 9 и 4 раза превышали периоды полураспада AtDPE, Ser213Cys и Ile33Leu, соответственно, что указывает на то, что термоустойчивость двойного мутанта может быть улучшена синергетически за счет мутации суперположения. На основе молекулярного имитационного анализа Choi et al. [36] пришли к выводу, что изменение термоустойчивости штамма мутантов может быть вызвано увеличением водородных связей и штамповки. Чжан и др. [37]изучали влияние различных добавок на стабильность хранения ДПЗ с использованием циркулярного дихронизма и флюоресцентной хроматографии. Они пришли к выводу о Том, что структура "вертикальная спираль" тесно связана со структурной стабильностью дпэ. Некоторые добавки (например, марганцевый сульфат, фруктоза и этиленгликоль) могут защитить структуру гравитационной спирали фермента DPE, в то время как акорбиновая кислота оказывает разрушительное воздействие на структуру гравитационной спирали.

Хотя кристаллическая структура многих DPE/DTE хорошо известна в последние годы, их каталитический механизм до сих пор четко не определен. Для определения роли некоторых аминокислотных участков в катализаторах и привязке к субстратам используется мутагенез, направленный на конкретные участки, для замены этих остатков аминокислот конкретными видами аминокислот и измерения их свойств. Это является основой для понимания специфики субстратов и катализаторов фермента. Сравнительный анализ последовательности аминокислот DPE (AsDPE) Agrobacterium sp. ATCC31749 и AtDPE показал, что, хотя AsDPE и AtDPE на 98% схожи (различается только 6 аминокислот), удельный вид деятельности AtDPE (8,89 U/ мг) составляет лишь 10%, что и AsDPE (90,5 U/ мг) лишь 10%.

В целях дальнейшей проверки влияния этих шести участков на ферментную активность, различные штаммы мутантов были построены с помощью мутагенеза, управляемого сайтом, чтобы имитировать интерфейсы взаимодействия AtDPE. Было установлено, что за исключением штамма мутантов Asn234Asp, ферментная активность которого составляла лишь 25,5% от активности дикого типа AsDPE, ферментная активность остальных пяти остатков, расположенных на поверхности каждого мутации подблока, привела лишь к 15% снижению ферментной активности AsDPE. Это показывает, что Asn на позиции 234 является важным остатком интерфейса. После мутации сайта в Asp активность фермента снижается на 74,5%. Причиной этого может быть то, что после мутации сеть водородных соединений вокруг тетрамерного интерфейса меняется (рис. 4), ослабляя тем самым фермент 's способность связывать д-фруктозу [38].

3.2 молекулярная биологическая модификация

Romero et al. [39]found that the dual-enzyme coupling expression system has many advantages. When the two enzymes are close to each other, the first enzyme can create a favorable microenvironment for the second enzyme to react, so that the second enzyme has sufficient substrate, reducing the diffusion time of the substrate relative to the enzyme, and can more efficiently promote the reaction. Men et al. [40]cloned the D-glucose isomerase (GI) gene from Bacillus sp. bacillus (Bacillus sp.) D glucose isomerase (glucose isomerase, GI) gene and rumen microorganism (Ruminococcus sp.) DPE gene were co-transformed into the E. coli BL21 strain to construct a D allo-keto acid one-step catalytic system, which can catalyze the conversion of glucose to D allo-keto acid up to 16 %. Similarly, the coupling of GI from Acidothermus cellulolyticus and DPE from Dorea sp. CAG 317 forms a co-expression system that can catalyze the production of 89.1 g/L D-allulose from 500 g/L D-glucose [41].

4. Разделение и очистка d-аллюлозы

В производстве D Аллюлоза, продукт, получаемый с помощью ферментативного катализатора субстрата, должен быть отделен, чтобы отделить D Аллюлоза из фруктозы D и других сахара для получения высокой чистоты D - аллюлоза. Из-за отсутствия знаний о D Аллюлозы и ограничения в методах измерения, специфическое содержание D allulose in food is rarely reported. For many years, the separation of D-allulose from D-fructose has been a problem. Because the two have similar physical and chemical properties, such as molecular weight, molecular size and charge, it is difficult to completely separate D-fructose and D-allulose using common separation methods.

Смоделированный подвижный слой (SMB) — это метод разделения, основанный на принципе хроматографического разделения.

Она использует ионообменную смолу в качестве стационарной фазы. Благодаря своим низким эксплуатационным затратам, простоте эксплуатации и эффекту разделения, он подходит для масштабного непрерывного производства и в настоящее время широко используется при сортировке сахарной продукции [42]. Нгуен и др. [43]использовали в качестве стационарной фазы ионную обменную смолу Dowex 50WX4 Ca2+ и имитировали процесс SMB. process, and finally found that: the purity and yield of allulose were 99. 04% and 97. 46%, respectively, while the purity and yield of the raffinate (D fructose) were 99. 06% and 99. 53%, respectively.

В оптимизированных условиях эксплуатации была достигнута полная сепарация (экстракционная чистота 99). 36%, чистота раффината 9 99. - 67%. Результаты моделирования и экспериментов показывают высокую степень согласия и хорошие результаты разделения, что указывает на то, что SMB, как эффективный метод разделения, может быть использован в фактическом производстве d-аллюлозы. Вагнер и др. [44]показали, что SMB может использоваться для реализации многоступенчатых каскадов фермента в непрерывной хроматографии. Используя ферменты трансглюкозидазе, D-xylose изомеров и DTE, D- аллюлоза может эффективно производиться через опосредованно D- глюкозы и D Фруктоза, эффективно производящая D Аллюлоза, которая может быть очищена и отделена, чтобы достичь конечной чистоты 99. 9% и доходность 89%.

Ли и др. [45]использовали анионную обменную смолу для преобразования d-фруктозы в глуконическую кислоту, которая легко отделена от d-аллюлозы. Вся система состоит из двух постоянно перемещаемых реакторов (CSTRs), содержащих иммобилизованный изомер глюкозы (GI) и иммобилизованный оксидаз глюкозы (GOD), соответственно. Реакция сначала преобразует d-фруктозу в d-глюкозу под каталитическим действием иммобилизованного GI, а затем в глюконическую кислоту под каталитическим действием иммобилизованного бога.

Наконец, глюконическая кислота адсорбируется и рециркулируется анионной обменной смолой D309. Окончательные результаты показывают, что продукт сильно разбавлен SMB и требует большой концентрации, прежде чем кристаллизация. Однако концентрация d-аллюлозы после очистки этой ферзиматической системой довольно высока, что экономит много рабочего времени и очень подходит для промышленного применения. Хотя адсорбентная матрица, используемая в SMB, относительно дорогая, материалы, используемые для иммобилизации ферментов GI и GOD, а также анионные обменные смолы, используемые в этой системе, являются обычными и недорогими в промышленности, поэтому процесс прост в эксплуатации и масштабировании. Наконец, скорость очистки d-аллюлозы достигла 91,2%, большая часть d-фруктозы была удалена из системы, а очищенная d-аллюлозы была дополнительно кристаллизована до чистоты > 99%.

5 резюме и перспективы

In recent years, D-allulose has been recognized as an ideal substitute for sucrose- да. Он не только сладок, как sucrose, но и не содержит калорий, нетоксичен и прост в обработке. Это, несомненно, идеальный новый подсластитель с превосходными рыночными перспективами и коммерческой стоимостью. Однако в настоящее время d-аллюлоза все еще не может производиться в больших количествах в промышленности по следующим причинам: ① из-за воздействия эндотоксина кишечной палочки, есть скрытые опасности с точки зрения безопасности пищевых продуктов. В то же время, было относительно мало разработок и исследований по пищевых продуктов DPE и DTE фермента хозяев выражения. Поэтому на следующем этапе исследований микроорганизмы пищевой ценности (такие, как Saccharomyces cerevisiae, Bacillus glutamicum, Bacillus subtilis и т.д.) могут использоваться в качестве носителей выражений для устранения дефектов штаммов для промышленного производства. В настоящее время все изученные ферменты DPE и DTE имеют такие проблемы, как низкая ферментативная активность и низкая стабильность.

На основе определенного понимания фермента структура, соответствующие мутации или изменения могут быть сделаны в целевой белок. Разработка штамма с высокой ферментативной активностью все еще является долгой и трудной задачей. Исследования по производству d-аллюлозы использовать d-фруктозы в качестве субстрата. Однако по сравнению с фруктозой фруктозно-глюкозный сироп дешевле и может также использоваться для производства d-аллюлозы под энзиматическим катализатором, что благотворно влияет на снижение стоимости промышленного производства d-аллюлозы. Поскольку D аллюлоза трудно кристаллизоваться, это не способствует его окончательному отделению и очистке от раствора реакции, что значительно увеличит сложность производственного процесса и сделает операцию сложной. В настоящее время необходимо разработать метод, который может вызвать D Аллюлоза кристаллизоваться, чтобы продукт можно было лучше отделить, что способствует последующей рекуперации и снижает эксплуатационные затраты на разделение и очистку. По мере углубления исследований разработка высокоэффективного и недорогого метода производства, пригодного для промышленного производства d-аллюлозы, в конечном итоге принесет пользу общественности.

Справочные материалы:

[1] Хуанг к Y, сюй з, сюн к и др. Прогресс в исследованиях и разработках заменителя d-аллюлозы с нулевым содержанием калорий [J]. Промышленная микробиология, 2020, 50(3):57. 63.

[2] Сунь и, хаякава с, огава м и др. Влияние редкого сахара, D ⁃psicose, на физико-химические и функциональные свойства аэродированной пищевой системы, содержащей яичный альбум [J]. J Agric Food Chem,2008, 56(12) :4789⁃4796.

[3]  Ким с е, су джей к, ким х джей и др. Диафрагма, заменитель сахара, подавляет - тело? - да.  - жир; На большие расстояния by  3. Изменение параметров В сети интернет Воспалительной реакции и липидного метаболизма в C57BL/6J⁃ob/ob,mice[J].J Funct Foods,2017,28 :265⁃274.

[4] Солнце и Солнце - да, хаякава - с, В настоящее время - г, et  al.  Реологические характеристики гелей с высокой антиоксидативной активностью [J]. Biotechnol Biochem, 2006, 70(12) :2859.

[5] Ван ченфу, фан чунлей, ду рюйфенг и др. Способ подготовки аллюлозы и ее применения: 104447888A[P]. 2015. 03. 25.

[6] Билик V, тихларик к. реакция сахаридов, катализированных ионами молибдата: IX. Epimerization of ketohexoses[J].Chem Zvesti, 1973,28:106⁃ 109.

[7]  "Макдональд е" J. новый синтез D ⁃psicose (D-ribo-hexulose) [J].карбогидр Res, 1967, 5:106. 108.

[8]  (подпись) донор Л в. изомеризация Od D ⁃fructose by base: жидкая ⁃chromatographic evalution and the isolation of D ⁃psicose [J].Carbohydr Res, 1979,70 :209⁃216.

[9] Идзумори к, хан а р, окая х и др. Новый фермент, d-кетогексоза 3- эпистерер, из псевдодоминаса sp. ST⁃24 [J]. Biotechnol Biochem, 1993, 57(6) : 1037⁃ 1039.

[10] Ито х, окая х, хан а р и др. Очистка и характеристика D ⁃tagatose 3 ⁃epimerase from Pseudomonas sp.ST-24[J].Biosci Biotech Biochem, 1994, 58(12) :2168⁃2171.

[11]  Ким х джей, хён э к, ким и др. Характеристика Agrobacterium tumefaciens D ⁃psicose 3 ⁃ epim⁃ that converts D-fructose to D ⁃psicose[J].Appl Environ Microbiol, 2006, 72(2) :981 985.

[12]  KIM K, KIM H J, OH D K, et al.Crystal structure of D- псикоза3- эпизодический стеретьfrom Agrobacterium tumefaciens, and its complex with true substrate D ⁃fructose: a central role of metal in sis, an active Сайт на сайте  for  the  негравитафосфорил - субстрат, and  Конформационные изменения [J].J Mol Biol,2006, 361(5) :920.

[13] OH D K, KIM N H, KIM H J, et al.D ⁃Psicose production from D ⁃ fructose using изолированный штамм, Sinorhizobium sp. [J]. Мир J Microbiol Biotechnol,2006,23(4) :559⁃563.

[14] чжан лонгтао, му ванменг, цзян бо и др. Скрининг сфингобактерических средств для биотрансформации в D-allulose [J]. Пищевая и ферментационная промышленность, 2008, 34(9): 40. 43.

[15] Му у м, чжан у л, фанг д и др. Характеристика образования D-psicose  - фермент, D-псикоза   3- эпистереровать,  Из Clostridium sp. [J].Biotechnol Lett,2013, 35(9) : 1481 ⁃ 1486.

[16] Дзя м, му в м, чу ф ф и др. D- псикоза3-epimerase с нейтральным pH Оптимальный из Clostridium  Болтеи для производства гравсикозы: клонирование, выражение, очищение и характеристика [J].Appl Microbiol Biotechnol,2014,98(2) :717-725.

[17] Му W, чу F, син Q и др. Клонирование, выражение и характеристика D ⁃psicose 3 ⁃epimerase from Clostridium cellulolyticum H10 [J]. J Agric Food Chem, 2011, 59 (14) : 7785⁃7792.

[18] Чжан у, фан д, син кью и др. Характеристика нового металла ⁃psicose D ⁃psicose 3 ⁃epimerase from Clostridium scindens 35704[J].PLoS ONE,2013, 8(4) :e62987.

[19] Чжан у, фанг д, чжан т и др. Характеристика металла ⁃psicose D ⁃ epim⁃ из нового штамма, Desmospora sp. 8437 [J]. J Agric Food Chem, 2013, 61 (47) : 11468. 11476.

[20] Чжан (Китай)W, LI H, ZHANG T, и др. характеристика D⁃psicose 3 ⁃epimerase из Dorea sp. CAG317 с кислотным pH оптимальным и высокой удельной активностью [J].J Mol Catal B,2015, 120:68⁃74.

[21] Йошида х, ямада м, ниситани т и др. Кристальные конструкции D ⁃tagatose 3⁃ epimerase from Pseudomonas cichorii and its ⁃ c D ⁃tagatose and D ⁃fructose[J].J Mol Biol,2007, 374(2) :443 453.

[22] Чжан л, му W, цзян б, и др. характеристика d-тагатосе -3- эпистерер из родобактерских спаероидов, которые преобразовывают D-fructose в D-psicose[J].Biotechnol лет,2009, 31(6) : 857⁃862.

[23] Чжу и, ян м, вей б и др. Чрезмерное сжатие D -psicose 3 -epimerase из Ruminococcus sp. в Escherichia coli, и Его потенциальное применение в производстве д ⁃psicose [J].Biotechnol Lett,2012, 34(10) : 1901 ⁃ 1906.

[24] ZHANG  Ч, чжан, - т, В настоящее время - B, et  al.  Биохимическая характеристика D-psicose 3 -epimerase из Treponema primitia ZAS- 1 и его применение на ферментативном производстве D ⁃psicose[J].J Sci Food Agric,2016,96(1) :49⁃56.

[25] Пак СИ, ким ти, хон с и др. D⁃allulose производство из D-fructose по пропитанным рекомбинатным клеткам коринебактериальных глутамических клеток, выражающих D⁃allulose 3⁃epimerase Flavonifractor plautii[J].PLoS ONE,2016, 11(7) :e0160044.

[26] бай вей, чжу юмин, мен ян и др. Производство d-аллозы из d-фруктозы по роману преобразования изомеров [J]. Китайский журнал биоинженерии, 2012, 28(4): 457⁃465.

[27] Пател с н, шарма м, лата к и др. Улучшена операционная стабильность D-psicose 3-epimerase с помощью новой белковой инженерной стратегии, и D-psicose  production  from  Фрукты и фрукты and  Растительные остатки [J].Bioresour Technol,2016,216:121 — 127.

[28] Парк C S, парк C S, шин K C, и др. производство D-psicose из D-fructose целыми рекомбинантными клетками с высоким выражением лица of  D-psicose  3-epimerase  from  Agrobacterium tumefaciens[J].J Biosci Bioeng,2016, 121(2) : 186-190.

[29]  ITOH H, SATO T, IZUMORI K.Preparation of D-psicose from D-fructose by im⁃ D ⁃tagatose 3 epimerase [J]. J Ferment Bioeng, 1995, 80(1) : 101 — 103.

[30] Такешита к, суга а, такада г и др. Массовое производство D-psicose из D-fructose непрерывной биореакторной системой с использованием иммобилизированного D-tagatose 3-epimerase[J].J Biosci Bioeng,2000,90(4) :453-455.

[31] LIM B C, KIM H J, OH D K. стабильный иммобилизации D-psicose 3- эпистерер для производства D ⁃psicose в присутствии borate[J].Process Biochem,2009,44:822-828.

[32] Ким н х, ким х дж., кан ди и др. Конверсионный сдвиг d-фруктозы to  D-psicose  for  Фермент под катализатором - эпимеризация; Путем добавления бората [J]. Appl Environ Microbiol, 2008, 74 (10) :3008-3013.

[33]  Ли зи, ли и, дуан с и др. Биоконверсия D- глюкозы в D-psicose с импотентированным D ⁃xylose изомером и D-psicose 3-epimerase на Saccharomyces cerevisiae спорах [J].J Ind Microbiol Biotechnol,2015,42(8) : 1117⁃ 1128.

[34]  Ли СИ, лин джей, го Q, и др. D ⁃Psicose 3 ⁃ epim. Секретная чрезмерная компрессия, иммобилизация и деформация, разделение и кристаллизация [J]. J Chem Technol Biotechnol,2018. DOI: 10. 1002/ октп. 5360.

[35] YOSHIDA H, YOSHIHARA A, ISHII T, и др. Appl Microbiol Biotechnol,2016, 100(24) : 10403⁃ 10415.

[36]  Чхве джей г, чжу ю х, йом с джей и др. Повышение термостабильности D-psicose 3-epimerase  От Agrobacterium tumefaciens случайным и сайта ⁃ agenesis [J]. Appl Environ Microbiol,2011,77(20) :7316⁃7320.

[37]  Чжан-кью, цзян-б, чжан-т и др. Кинетика отключения и влияние добавок на стабильность хранения и структуру D-psicose 3-epimerase[J].Biotechnol Lett,2018,40(1) : 173-179.

[38] TSENG W C, CHEN C N, HSU C T и др. Характеристика рекомбината D ⁃allulose 3 ⁃epimerase from Agrobacterium sp.ATCC 31749 и идентификация важного межлицевого остатка [J]. Int J Biol Macromol,2018, 112 :767⁃774.

[39]  Ромеро с, санчес с, манджон с и др. Оптимизация пектинестеразе /endo⁃D ⁃polygalacturonase co⁃ imмобилизационный процесс [J].Enzyme Microb Technol, 1989, 11(12) :837⁃843.

[40]  Мужчины Y, ZHU Y, ZENG Y, и др. Совместное выражение D- изомеров глюкозы и D-psicose 3-epimerase: разработка эффективного одноступенчатого производства D ⁃psicose [J]. Фермент Microb Technol,2014, 64/65:1 1. 5.

[41] Чжан у, ли х, цзян б и др. Производство D- аллюлозы из D- глюкозы с помощью преобразующих клеток Escherichia coli с кодами D- изомеров глюкозы и D ⁃psicose 3 ⁃epimerase genes [J]. J Sci Food Agric,2017,97(10) : 3420⁃3426.

[42] цай юйцзе, дин яньжуй, чжан дабинг и др. Моделирование хроматографии подвижного слоя и ее применение [J]. Хроматография, 2004, 22(2): 111 — 115.

[43]  Нгуен V D, LE T H, KIM J I, et al. Отделение D-psicose и D-fructose с помощью симуляции хроматографии подвижного слоя [J].J Sep Sci,2009, 32(11) : 1987⁃ 1995.

[44]  Вагнер н, бошарт а, файлмезгер дж., и др. Раздельная параметрическая каскадная реакция для преодоления термоциклических ограничений в редких параметрических синтезах сахара [J].Angew Chem Int Ed,2015,54(14) :4182⁃4186.

[45]   LI C, ZHANG C, LIN J, et al.Enzymatic fructose removal from D ⁃ psicose bioproduction model solution and the system modeling and simulation[J].J Chem Technol Biotechnol,2018,93:1249⁃ 1260.