Из чего изготовлен аллюлозный порошок?

D- да. Д.аллюлоза (D- псикозаили D- аллюлоза) является моносакваридом, который происходит естественным образомВ очень небольших количествах. Растворим в воде, метаноле и этаноле, но не в ацетоне. Температура плавления 109 градусов. D. Д. Аллюлоза — диастереоизомер D Фруктоза в положении C3 и альдопентозный изомер редкого сахара D аллозы (рис. 1). (рис. 1) встречается в небольших количествах в природе в инжире, сахарном тростнике, сухом фрукте, сахарной продукции, пшенице и растениях рода Tribulus.

D аллюлоза обладает особыми выгодными свойствамиДля человеческого организма, таких как нулевые калории, регулирование глюкозы в крови, и антиокисление. Его сладость схожа с сахарозом (70%) и считается заменителем сахарозы с наибольшим потенциалом крупномасштабного применения [1]. По сравнению с D Фруктоза и D - глюкоза, ди Аллюлоза может генерировать больше антиоксидантов, которые могут поддерживать антиоксидантный статус пищи в течение длительного времени и сохранять вкус, цвет и текстуру пищи [2-4].

Кроме того, он также оказывает значительное влияние на растения. Исследователи из университета кагава в японии обнаружили, что d-аллюлоза может стимулировать такие культуры, как рис, к защите от вредителей и регулированию роста растений [1]. В 2011 году это было определено управлением по контролю за продуктами питания и лекарствами США (FDA)D аллюлоза, как правило, признается безопасным (GRAS) для пищи- да. D аллюлоза может использоваться в качестве подсластителя или компонента пищевых добавок и имеет широкие перспективы применения в области питания, медицины здравоохранения и сельского хозяйства. Как новый вид функционального подсластителя, его огромная коммерческая ценность и перспективы рынка ждут своего развития. В этой статье рассматривается прогресс в исследованиях физико-химических свойств, синтетических процессов и генной инженерии модификации d-аллюлозы, а также обсуждаются перспективы развития d-аллюлозы с d-аллюлозы 3- эпистереровать как объект, чтобы предсказать перспективы развития d-аллюлозы и обеспечить теоретическую основу для будущих тенденций исследований.

1 D стратегия синтеза аллюлозы

D  По химическому оружиюСинтез аллюлозыВ основном использует глюкозу в качестве сырья, молибдата в качестве катализатора, и проходит через химический катализатор, хроматографическое разделение и очистку, концентрацию и кристаллизацию для подготовки кристаллического D Аллюлоза [5]. Bilik В то же время- эл. - привет.[6] ускорили производство D Аллюлоза от ди Фруктоза путем добавления ионов молибдата в кислой раствор. Однако полученная смесь содержала лишь 0,5% D 1. Аллюлозы Составляет лишь 0,5%, и смесь также содержит 4,5% d-сорбитола, 1,0% d-тагатозы и другие вещества. Урожайность была низкой, и было много побочных продуктов, что не способствовало последующему разделению и очистке. McDonald [7] использовал трехступенчатый химический метод для преобразования 1,2,4,5 - ди-о-изопропилиденебета-д-фруктофуранозного окисления и уменьшения для получения D - аллюлоза.

Донор [8] вареный D фруктоза в смеси этанола и триэтиламина вПриготовьтесь к аллюлозе- да. Почти все химические методы подготовки D Аллюлозы имеют такие проблемы, как низкая урожайность, громоздкие последующие операции по разделению, легкое загрязнение тяжелых металлов и кислотных сточных вод и многие побочные продукты. По сравнению с химическим синтезом экологически чистый биологический метод стал новой точкой исследования. Биологический метод синтеза D Аллюлоза использует D Фруктоза в качестве субстрата и катализаторов D ⁃psicose 3 ⁃epimerase (DPE фермент) или D ⁃tagatose 3 ⁃epimerase (DTE enzyme) для выполнения D ⁃psicose 3 ⁃epimerase реакции на D  Фруктоза возникает в результате реакции диастереоизомеризации. Из-за высокого содержания D фруктозы в системе продукта, продукт должен быть отделен и очищен с помощью ионной обменной смолы, чтобы получить конечный продукт. По сравнению с химическим методом, биологический синтез D аллюлозы не только является низким по стоимости, но и безопасным и экологически чистым, и он менее вероятно вызывает загрязнение, поэтому он имеет широкие перспективы развития.

2 D аллюлозный биосинтез

2. 1 скрининг ключевых ферментов

В 1993 году японские ученые Izumori В то же время- эл. - привет.Этот фермент наиболее специфичен для д-тагатозы, поэтому он был назван DTE фермент [10]. Фермент DPE из Agrobacterium tumefaciens может быть специальноКатализатор d-фруктозы (700 г/л)Для получения d-аллюлозы (230 г/л), со скоростью преобразования 32,9% [11 12]. Ризобий из почвы (Sinorhizobium sp.) становится проницаемым после обработки толуолом и катализаторов 700 г/л фруктозы (3,9 моль/л), чтобы производить 37 г/л алдонической кислоты в оптимальных условиях [13].

Цзян бо's команда в университете цзяньнань приверженПроверка на наличие нового D Аллюлозные промышленные штаммы.Они проверили штамм из пробы воды в пруду с высоким содержанием D Аллюлозный урожай и идентифицировал его как родобактерские спаероиды, по имени родобактерские спаероиды SK011. Этот штамм может давать d-аллюлозу с выходом 6,54%, когда d-фруктоза (36 г/л) используется в качестве субстрата. Из исследования следует, что DTE фермента, производимый родобактер sphaeroides SK011 вызывает диастереоизомеризацию D-fructose на позиции C3 для производства d-аллюлозы. Впервые в китае сообщается о штамме, способном биотрансформировать d-фруктозу в d-аллюлозу [14]. В последние годы ученые внутри страны и за рубежом успешно обнаружили ферменты DTE и DPE различных штаммов, заложив прочную исследовательскую основу для дальнейшей работы. Краткая информация о конкретной ситуации приводится в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, рн, соответствующая максимальной ферментной активности DTE от Dorea sp. DPE и R. sphaeroides, составляет 6,0 и 9,0, соответственно, а рн, соответствующая максимальной ферментной активности других DPE и DTE, составляет 7,0 ~ 8,0. Температура, соответствующая максимальной ферментной активности DTE от R. sphaeroides составляет 40 градусов, в то время как температура, соответствующая максимальной ферментной активности DPE от T. primita's DPE и Dorea sp.' максимальная ферментная активность s DPE соответствует температуре 70 °C, а температура, соответствующая максимальной ферментной активности других DPE и DTE, находится между этими двумя температурами. Большинство DPE демонстрируют высокую ферментную активность в присутствии Co2+. При 60 °C период полураспада фермента DPE от C. cellulolyticum составляет 408 мин, что на сегодняшний день является самой высокой термостойкостью, о которой сообщается для DPE и DTE. Фермент F. plautii DPE ускоряет реакцию 750 г/л fructose при pH 7,0 и 65 °C в течение 60 мин, который может производить 239 г/л аллюлозы, с коэффициентом преобразования 32%, и интенсивность производства до 353 г /(л · ч). DPE Desmospora sp. и DPE Dorea sp. имеют самые высокие коэффициенты преобразования для D фруктозы и D аллюлозы; В дополнение к этому,Реакция, катализируемая D-fructose и D-allulose реакции D-fructose и D-allulose обратима- да. Интересно отметить, что в большинстве случаев DPE катализирует производство d-фруктозы из d-аллюлозы в 2-3 раза эффективнее, чем производство d-аллюлозы из d-фруктозы (за исключением C. scindens DPE, который катализирует d-аллюлозы 7). 2 раза, что указывает на то, что фермент в большей степени способствует катализатору D - аллюлоза. В настоящее время содействие промышленному производству D Аллюлоза остается сложной и горячей темой для ученых, и проверка эффективного каталитического фермента, пригодного для промышленного производства, стала узким местом.

2.2 фермент/катализатор клеток

Технология фермента/катализаторов клеток имеет чрезвычайно важное значение в области пищевой биотехнологии. Она участвует в самых различных процессах: от виноделия и производства сыров до молочной промышленности, хлебопекарной промышленности, мясоперерабатывающей промышленности, крахмальной и сахарной промышленности, нефтяной промышленности и проверки безопасности пищевых продуктов, производства напитков и соков и т.д. Большинство ферментов могут значительно ускорить процесс реакции, не нарушая химического равновесия, за счет снижения энергии активации химической реакции или активации субстрата, тем самым значительно увеличивая скорость реакции.

Эти преимущества в значительной степени согласуются с концепцией развития пищевой промышленности, и технология фермента/катализаторов клеток также сталаОсновные технологии для промышленного производства d-аллюлозы- да. Бай вей и др. [26] клонировали ген dpe из - клостридиумcellulolyticum H10 и выразили и очистили его в B. subtilis. В оптимальных условиях 2,5 градиента очищенного фермента дпэ стимулировали производство d-аллюлозы из 500 градиентов d-фруктозного раствора (10 г/л) для производства d-аллюлозы с коэффициентом преобразования 27,3%.

Фермент DPE от A. tumefaciens (AtDPE) характеризуется низкой термоустойчивостью. После модификации белковой инженерии, DPE фермент может катализировать производство178 г/л d-аллюлозы от 700 г/л d-фруктозыПри оптимальных условиях реакции, с коэффициентом преобразования 25%; В то время как дикий фермент AtDPE может производить только 107 г/л D Аллюлоза [27]. Использование целых клеток для стимулирования производства D Аллюлоза от ди Фруктоза более удобна, чем энзиматический катализатор. Ген dpe от двойного мутанта I33L/S213C а. тумефасиенса был выражен в E. coli. 4 г/л бактерий может катализировать 700 г/л d-фруктозы для производства 230 г/л d-аллюлозы, с коэффициентом преобразования 33%. Однако при использовании сырого экстракта фермента в реакции использовалось только 182 г/л D  Аллюлоза, со скоростью преобразования 26% [28]. Кроме того, после того, как dpe ген с. целлюлолита был выражен в E. coli, культурный бульон может напрямую катализировать 750 г/л d-фруктозы, чтобы получить 218 г/л d-аллюлозы, а коэффициент преобразования достиг 29% [17]. После того как ген dpe из Clostridium bolteae был выражен в E. coli, 2 г сухого порошка c-клетки C. bolteae стали катализатором преобразования 750 г/л fructose в 216 г/л алдонической кислоты с коэффициентом преобразования 28,8% [16].

2. 3. Технология иммобилизации

По сравнению со свободными ферментами, иммобилизованные ферменты/клетки могут дополнительно повысить стабильность ферментов, продлить срок службы ферментов и имеют преимущества в разделении продуктов и возможности повторного использования, которые не могут сравниться с бесплатными ферментами. Таким образом,Промышленное производство d-аллюлозы часто использует иммобилизованные ферментыИли иммобилизированные клеточные технологии. Itoh et al. [29]извлекли DTE (PsDTE) из культурных псевдономов sp. ST 24 и иммобилизовали фермент на Chitopearl beads BCW 2503 носителей.

После добавления d-фруктозы, около 20% фруктозы была преобразована в d-аллюлозы после 48 часов реакции. После дальнейшей оптимизации Chitopearl beads BCW 2510 иммобилизовал PsDTE can cОнверт 25% от д-фруктозы до д-аллюлозы после реакции на 40 градусов на 60 градусов[30]. В каталитическом процессе DPE (AtDPE) в Agrobacterium tumefaciens добавление борной кислоты в систему реакции может эффективно повысить эффективность преобразования всего каталитического процесса. Это объясняется тем, что способность борной кислоты к d-аллюлозе сильнее, чем способность борной кислоты к d-фруктозе. В процессе обратимой реакции, после связывания борной кислоты с d-аллюлозой, концентрация d-аллюлозы в системе снижается. Для поддержания баланса всей системы реакции, больше субстрата (D-fructose) движется в направлении вперед (D-allulose) реакции. Концентрация снижается. Для поддержания баланса всей системы реакции, больше субстрата (D фруктоза) движется в направлении вперед реакции (D аллюлоза).

Тем не менее, есть предел количества борной кислоты, которые могут быть добавлены. Когда молярное соотношение борной кислоты достигает 0,6, количество d-аллюлозы достигает максимума. Когда молярное соотношение превышает 0,6, тоКоличество d-аллюлозы будет иметь тенденцию к снижению[31]. При использовании дуолита а568 бус в качестве иммобилизационного перевозчика выход d-аллюлозы (441 г/л) и скорость преобразования реакции (63%) иммобилированного AtDPE с добавлением борной кислоты в 2,3 раза выше, чем у иммобилированного AtDPE без борной кислоты, а интенсивность производства в 1,3 раза выше, чем у иммобилированного фермента без борной кислоты [32]. 3 раза [32].

Когда изомеры глюкозы GI Thermus thermophilus и мутант AtDPE (Ile33Leu/Ser213Cys) были одновременно закреплены на клеточной стенке спор Saccharomyces cerevisiae, скорость преобразования катализирующих веществПреобразование глюкозы в d-аллюлозу составило 12%[33]. Ген dpe Ruminococcus sp. был клонирован и выразил в Bacillus pumilus. После очистки и иммобилизации фермента DPE на анионной обменной смоле иммобилизованный фермент сохранил около 70% своей ферментной активности после 10 повторных видов применения, а скорость преобразования каталитической реакции может достичь 26%. По сравнению с DPE, производимым оригинальной бактерией, DPE фермент значительно улучшил растворимость белка, биологическую активность и выражение и секрецию по сравнению с DPE, производимым оригинальными бактериями [34].

3 методы генной инженерии 

3.1 структура фермента

Для достижения промышленного производства d-аллюлозыИсследователи генетически модифицировали DPE фермент, используя методы молекулярной биологии, чтобы дать ему потенциал для промышленного применения. Структура белкового хрусталя AtDPE была проанализирована с использованием рентгеновской дифракционной технологии, которая может способствовать дальнейшему изучению каталитического механизма DPE. Молекулярное моделирование показало, что AtDPE представляет собой тетрамерическую протеазу, состоящую из четырех идентичных подгрупп a, B, C и D, как показано на рисунке 2(a) [35]. Каждая подединица состоит из 8 слоёв и 12 слоёв, и 8 слоёв плотно окружены 12 слоёв, как показано на рисунке 2(b) [35]. Фермент является ферментом, зависящим от ионов металла. Glu150, Asp183, His209 и Glu244 связывают ионы металлов и образуют активный центр AtDPE. Trp112, Glu156 и Arg215 являются ключевыми площадками для связывания фермента под давлением [36]. Трехмерная структура P. cichorii DTE (PcDTE) показывает, что PcDTE имеет такую же каталитическую и пространственную структуру, что и AtDPE, и состоит из четырех подблоков: Mol a, Mol B, Mol C и Mol D [21], как показано на рис. 3.

Choi et al. [36]использовали подверженные ошибкам ПЦР для случайного мутации AtDPE и проверяли на наличие двух штаммов мутантов с высокой стабильностью, Ser213Cys и Ile33Leu. В то же время периоды полураспада двойного мутанта Ile33Leu/Ser213Cys (265 мин) в 26, 9 и 4 раза превышали периоды полураспада AtDPE, Ser213Cys и Ile33Leu, соответственно, что указывает на то, что термоустойчивость двойного мутанта может быть улучшена синергетически за счет мутации суперположения. На основе молекулярного имитационного анализа Choi et al. [36] пришли к выводу, что изменение термоустойчивости штамма мутантов может быть вызвано увеличением водородных связей и штамповки. Чжан и др. [37]изучали влияние различных добавок на стабильность хранения ДПЗ с использованием циркулярного дихронизма и флюоресцентной хроматографии. Они пришли к выводу о Том, что структура "вертикальная спираль" тесно связана со структурной стабильностью дпэ. Некоторые добавки (например, марганцевый сульфат, фруктоза и этиленгликоль) могут защитить структуру гравитационной спирали фермента DPE, в то время как акорбиновая кислота оказывает разрушительное воздействие на структуру гравитационной спирали.

Хотя кристаллическая структура многих DPE/DTE хорошо известна в последние годы, их каталитический механизм до сих пор четко не определен. Для определения роли некоторых аминокислотных участков в катализаторах и привязке к субстратам используется мутагенез, направленный на конкретные участки, для замены этих остатков аминокислот конкретными видами аминокислот и измерения их свойств. Это является основой для понимания специфики субстратов и катализаторов фермента. Сравнительный анализ последовательности аминокислот DPE (AsDPE) Agrobacterium sp. ATCC31749 и AtDPE показал, что, хотя AsDPE и AtDPE на 98% схожи (различается только 6 аминокислот), удельный вид деятельности AtDPE (8,89 U/ мг) составляет лишь 10%, что и AsDPE (90,5 U/ мг) лишь 10%.

В целях дальнейшей проверки влияния этих шести участков на ферментную активность, различные штаммы мутантов были построены с помощью мутагенеза, управляемого сайтом, чтобы имитировать интерфейсы взаимодействия AtDPE. Было установлено, что за исключением штамма мутантов Asn234Asp, ферментная активность которого составляла лишь 25,5% от активности дикого типа AsDPE, ферментная активность остальных пяти остатков, расположенных на поверхности каждого мутации подблока, привела лишь к 15% снижению ферментной активности AsDPE. Это показывает, что Asn на позиции 234 является важным остатком интерфейса. После мутации сайта в Asp активность фермента снижается на 74,5%. Причиной этого может быть то, что после мутации сеть водородных соединений вокруг тетрамерного интерфейса меняется (рис. 4), ослабляя тем самым фермент 's способность связывать д-фруктозу [38].

3.2 молекулярная биологическая модификация

Ромеро и др. [39]пришли к выводу, что двухферментная система выражения сцепления имеет много преимуществ. Когда два фермента находятся близко друг к другу, первый фермент может создать благоприятную микросреду для реакции второго фермента, так что второй фермент имеет достаточное количество субструта, сокращая время диффузии субструта по отношению к ферменту, и может более эффективно способствовать реакции. Мужчины и др. [40]клонировали ген D- глюкозы изомеров (GI) из Bacillus sp. Bacillus (Bacillus sp.) D изомеров глюкозы (Bacillus sp.) и микроорганизмы румины (Ruminococcus sp.) DPE ген были совместно преобразованы в штамм E. coli BL21 для создания одношаговой каталитической системы D аллокетозной кислоты, которая может катализировать преобразование глюкозы в D аллокетозную кислоту до 16%. Аналогичным образом, соединение GI из Acidothermus cellulolyticus и DPE из Dorea sp. CAG 317 образует систему совместного выражения, которая может катализировать производство89.1 г/л d-аллюлозы из 500 г/л d-глюкозы [41].

4. Разделение и очистка d-аллюлозы

В производстве D - аллюлоза,Продукт, получаемый с помощью ферзиматических катализаторов субстрата, необходимо дополнительно отделить, чтобы отделить D Аллюлоза из фруктозы D и других сахара для получения высокой чистоты D - аллюлоза. Из-за отсутствия знаний о D Аллюлозы и ограничения в методах измерения, специфическое содержание D О наличии аллюлозы в продуктах питания сообщается редко. На протяжении многих лет отделение d-аллюлозы от d-фруктозы было проблемой. Поскольку оба имеют одинаковые физические и химические свойства, такие как молекулярный вес, молекулярный размер и заряд, трудно полностью отделить D-fructose и d-аллюлозы с помощью общих методов разделения.

Смоделированный подвижный слой (SMB) — это метод разделения, основанный на принципе хроматографического разделения.

Она использует ионообменную смолу в качестве стационарной фазы. Благодаря своим низким эксплуатационным затратам, простоте эксплуатации и эффекту разделения, он подходит для масштабного непрерывного производства и в настоящее время широко используется при сортировке сахарной продукции [42]. Нгуен и др. [43]использовали в качестве стационарной фазы ионную обменную смолу Dowex 50WX4 Ca2+ и имитировали процесс SMB. И, наконец, обнаружили, что:Чистота и доходность аллюлозы были 99. 04% хлопок-сатинИ 97. 46%, соответственно, в то время как чистота и выход раффината (D fructose) были 99. 06% и 99. 53%, соответственно.

В оптимизированных условиях эксплуатации была достигнута полная сепарация (экстракционная чистота 99). 36%, чистота раффината 9 99. - 67%. Результаты моделирования и экспериментов показывают высокую степень согласия и хорошие результаты разделения, что указывает на то, что SMB, как эффективный метод разделения, может быть использован вФактическое производство d-аллюлозы- да. Вагнер и др. [44]показали, что SMB может использоваться для реализации многоступенчатых каскадов фермента в непрерывной хроматографии. Используя ферменты трансглюкозидазе, D-xylose изомеров и DTE, D- аллюлоза может эффективно производиться через опосредованно D- глюкозы и D Фруктоза, эффективно производящая D Аллюлоза, которая может быть очищена и отделена, чтобы достичь конечной чистоты 99. 9% и доходность 89%.

Li et al. [45]использовали анионную смолу для преобразования d-фруктозы в глуконическую кислоту, что легкоОтделена от ди-аллюлозы- да. Вся система состоит из двух постоянно перемещаемых реакторов (CSTRs), содержащих иммобилизованный изомер глюкозы (GI) и иммобилизованный оксидаз глюкозы (GOD), соответственно. Реакция сначала преобразует d-фруктозу в d-глюкозу под каталитическим действием иммобилизованного GI, а затем в глюконическую кислоту под каталитическим действием иммобилизованного бога.

Наконец, глюконическая кислота адсорбируется и рециркулируется анионной обменной смолой D309. Окончательные результаты показывают, что продукт сильно разбавлен SMB и требует большой концентрации, прежде чем кристаллизация. Тем не менее,Концентрация d-аллюлозы после очистки этой ферзиматической системойДовольно высокая, что экономит много рабочего времени и очень подходит для промышленного применения. Хотя адсорбентная матрица, используемая в SMB, относительно дорогая, материалы, используемые для иммобилизации ферментов GI и GOD, а также анионные обменные смолы, используемые в этой системе, являются обычными и недорогими в промышленности, поэтому процесс прост в эксплуатации и масштабировании. Наконец, скорость очистки d-аллюлозы достигла 91,2%, большая часть d-фруктозы была удалена из системы, а очищенная d-аллюлозы была дополнительно кристаллизована до чистоты > 99%.

5 резюме и перспективы

В последние годы,D- аллюлоза была признана идеальной заменой сукроуз- да. Он не только сладок, как sucrose, но и не содержит калорий, нетоксичен и прост в обработке. Это, несомненно, идеальный новый подсластитель с превосходными рыночными перспективами и коммерческой стоимостью. Однако в настоящее время d-аллюлоза все еще не может производиться в больших количествах в промышленности по следующим причинам: ① из-за воздействия эндотоксина кишечной палочки, есть скрытые опасности с точки зрения безопасности пищевых продуктов. В то же время, было относительно мало разработок и исследований по пищевых продуктов DPE и DTE фермента хозяев выражения. Поэтому на следующем этапе исследований микроорганизмы пищевой ценности (такие, как Saccharomyces cerevisiae, Bacillus glutamicum, Bacillus subtilis и т.д.) могут использоваться в качестве носителей выражений для устранения дефектов штаммов для промышленного производства. В настоящее время все изученные ферменты DPE и DTE имеют такие проблемы, как низкая ферментативная активность и низкая стабильность.

На основе определенного понимания фермента структура, соответствующие мутации или изменения могут быть сделаны в целевой белок. Разработка штамма с высокой ферментативной активностью все еще является долгой и трудной задачей. Исследования по производству d-аллюлозы использовать d-фруктозы в качестве субстрата. Однако по сравнению с фруктозой фруктозно-глюкозный сироп дешевле и может также использоваться для производства d-аллюлозы под энзиматическим катализатором, что благотворно влияет на снижение стоимости промышленного производства d-аллюлозы. - потому что...D аллюлоза трудно кристаллизоватьсяЭто не способствует его окончательному отделению и очистке от реакционного раствора, что значительно увеличивает сложность производственного процесса и делает операционный комплекс более сложным. В настоящее время необходимо разработать метод, который может вызвать D Аллюлоза кристаллизоваться, чтобы продукт можно было лучше отделить, что способствует последующей рекуперации и снижает эксплуатационные затраты на разделение и очистку. По мере углубления исследований разработка высокоэффективного и недорогого метода производства, пригодного для промышленного производства d-аллюлозы, в конечном итоге принесет пользу общественности.

Справочные материалы:

[1] Хуанг к Y, сюй з, сюн к и др. Прогресс в исследованиях и разработках заменителя d-аллюлозы с нулевым содержанием калорий [J]. Промышленная микробиология, 2020, 50(3):57. 63.

[2] Сунь и, хаякава с, огава м и др. Влияние редкого сахара, D ⁃psicose, на физико-химические и функциональные свойства аэродированной пищевой системы, содержащей яичный альбум [J]. J Agric Food Chem,2008, 56(12) :4789⁃4796.

[3]  Ким с е, су джей к, ким х джей и др. Диафрагма, заменитель сахара, подавляет - тело? - да.  - жир; На большие расстояния По запросу: 3. Изменение параметров В сети интернет Воспалительной реакции и липидного метаболизма в C57BL/6J⁃ob/ob,mice[J].J Funct Foods,2017,28 :265⁃274.

[4] Солнце и Солнце - да, хаякава - с, В настоящее время - г, et  al.  Реологические характеристики гелей с высокой антиоксидативной активностью [J]. Biotechnol Biochem, 2006, 70(12) :2859.

[5] Ван ченфу, фан чунлей, ду рюйфенг и др. Способ подготовки аллюлозы и ее применения: 104447888A[P]. 2015. 03. 25.

[6] Билик V, тихларик к. реакция сахаридов, катализированных ионами молибдата: IX. Epimerization Соединенные Штаты америкиketohexoses[J].Chem Zvesti, 1973,28:106⁃ 109.

[7]  "Макдональд е" J. новый синтез D ⁃psicose (D-ribo-hexulose) [J].карбогидр Res, 1967, 5:106. 108.

[8]  (подпись) донор Л в. изомеризация Od D ⁃fructose by base: жидкая ⁃chromatographic evalution иВ настоящее времяisolation of D ⁃psicose [J].Carbohydr Res, 1979,70 :209⁃216.

[9] Идзумори к, хан а р, окая х и др. Новый фермент, d-кетогексоза 3- эпистерер, из псевдодоминаса sp. ST⁃24 [J]. Biotechnol Biochem, 1993, 57(6) : 1037⁃ 1039.

[10] Ито х, окая х, хан а р и др. Очистка и характеристика D ⁃tagatose 3 ⁃epimerase Из российской федерацииPseudomonas sp.ST-24[J].Biosci Biotech Biochem, 1994, 58(12) :2168⁃2171.

[11]  Ким х джей, хён э к, ким и др. Характеристика Agrobacterium tumefaciens D ⁃psicose 3 ⁃ epim⁃ that converts D-fructose По адресу:D ⁃psicose[J].Appl Environ Microbiol, 2006, 72(2) :981 985.

[12]  KIM K, KIM H J, OH D K, et al.Crystal structure of D- псикоза3- эпизодический стеретьИз российской федерацииAgrobacterium tumefaciens, иits complex with true substrate D ⁃fructose: a central role of metal in sis, an active Сайт на сайте  для the  негравитафосфорил - субстрат, and  Конформационные изменения [J].J Mol Biol,2006, 361(5) :920.

[13] OH D K, KIM N H, KIM H J, et al.D ⁃Psicose Производство и продажаfrom D ⁃ fructose using изолированный штамм, Sinorhizobium sp. [J]. Мир J Microbiol Biotechnol,2006,23(4) :559⁃563.

[14] чжан лонгтао, му ванменг, цзян бо и др. Скрининг сфингобактерических средств для биотрансформации в D-allulose [J]. Пищевая и ферментационная промышленность, 2008, 34(9): 40. 43.

[15] Му у м, чжан у л, фанг д и др. Характеристика образования D-psicose  - фермент, D-псикоза   3- эпистереровать,  Из Clostridium sp. [J].Biotechnol Lett,2013, 35(9) : 1481 ⁃ 1486.

[16] Дзя м, му в м, чу ф ф и др. D- псикоза3- эпизодический стеретьс нейтральным pH Оптимальный из Clostridium  Болтеи для производства гравсикозы: клонирование, выражение, очищение и характеристика [J].Appl Microbiol Biotechnol,2014,98(2) :717-725.

[17] Му W, чу F, син Q и др. Клонирование, выражение и характеристика D ⁃psicose 3 ⁃epimerase from Clostridium cellulolyticum H10 [J]. J Agric Food Chem, 2011, 59 (14) : 7785⁃7792.

[18] Чжан у, фан д, син кью и др. Характеристика нового металла ⁃psicose D ⁃psicose 3 ⁃epimerase from Clostridium scindens 35704[J].PLoS ONE,2013, 8(4) :e62987.

[19] Чжан у, фанг д, чжан т и др. Характеристика металла ⁃psicose D ⁃ epim⁃ из нового штамма, Desmospora sp. 8437 [J]. J Agric Food Chem, 2013, 61 (47) : 11468. 11476.

[20] Чжан (Китай)W, LI H, ZHANG T, и др. характеристика D⁃psicose 3 ⁃epimerase из Dorea sp. CAG317 с кислотным pH оптимальным и высокой удельной активностью [J].J Mol Catal B,2015, 120:68⁃74.

[21] Йошида х, ямада м, ниситани т и др. Кристальные конструкции D ⁃tagatose 3⁃ epimerase from Pseudomonas cichorii and its ⁃ c D ⁃tagatose and D ⁃fructose[J].J Mol Biol,2007, 374(2) :443 453.

[22] Чжан л, му W, цзян б, и др. характеристика d-тагатосе -3- эпистерер из родобактерских спаероидов, которые преобразовывают D-fructose в D-psicose[J].Biotechnol лет,2009, 31(6) : 857⁃862.

[23] Чжу и, ян м, вей б и др. Чрезмерное сжатие D -psicose 3 -epimerase из Ruminococcus sp. в Escherichia coli, и Его потенциальное применение в производстве д ⁃psicose [J].Biotechnol Lett,2012, 34(10) : 1901 ⁃ 1906.

[24] ZHANG  Ч, чжан, - т, В настоящее время - B, et  al.  Биохимическая характеристика D-psicose 3 -epimerase из Treponema primitia ZAS- 1 и его применение на ферментативном производстве D ⁃psicose[J].J Sci Food Agric,2016,96(1) :49⁃56.

[25] Пак СИ, ким ти, хон с и др. D⁃allulose производство из D-fructose по пропитанным рекомбинатным клеткам коринебактериальных глутамических клеток, выражающих D⁃allulose 3⁃epimerase Flavonifractor plautii[J].PLoS ONE,2016, 11(7) :e0160044.

[26] бай вей, чжу юмин, мен ян и др. Производство d-аллозы из d-фруктозы по роману преобразования изомеров [J]. Китайский журнал биоинженерии, 2012, 28(4): 457⁃465.

[27] Пател с н, шарма м, лата к и др. Улучшена операционная стабильность D-psicose 3-epimerase с помощью новой белковой инженерной стратегии, и D-psicose  production  from  Фрукты и фрукты and  Растительные остатки [J].Bioresour Technol,2016,216:121 — 127.

[28] Парк C S, парк C S, шин K C, и др. производство D-psicose из D-fructose целыми рекомбинантными клетками с высоким выражением лица of  D-psicose  3-epimerase  from  Agrobacterium tumefaciens[J].J Biosci Bioeng,2016, 121(2) : 186-190.

[29]  ITOH H, SATO T, IZUMORI K.Preparation of D-psicose from D-fructose by im⁃ D ⁃tagatose 3 epimerase [J]. J Ferment Bioeng, 1995, 80(1) : 101 — 103.

[30] Такешита к, суга а, такада г и др. Массовое производство D-psicose из D-fructose непрерывной биореакторной системой с использованием иммобилизированного D-tagatose 3-epimerase[J].J Biosci Bioeng,2000,90(4) :453-455.

[31] LIM B C, KIM H J, OH D K. стабильный иммобилизации D-psicose 3- эпистерер для производства D ⁃psicose в присутствии borate[J].Process Biochem,2009,44:822-828.

[32] Ким н х, ким х дж., кан ди и др. Конверсионный сдвиг d-фруктозы to  D-psicose  для Фермент под катализатором - эпимеризация; Путем добавления бората [J]. Appl Environ Microbiol, 2008, 74 (10) :3008-3013.

[33]  Ли зи, ли и, дуан с и др. Биоконверсия D- глюкозы в D-psicose с импотентированным D ⁃xylose изомером и D-psicose 3-epimerase на Saccharomyces cerevisiae спорах [J].J Ind Microbiol Biotechnol,2015,42(8) : 1117⁃ 1128.

[34]  Ли СИ, лин джей, го Q, и др. D ⁃Psicose 3 ⁃ epim. Секретная чрезмерная компрессия, иммобилизация и деформация, разделение и кристаллизация [J]. J Chem Technol Biotechnol,2018. DOI: 10. 1002/ октп. 5360.

[35] YOSHIDA H, YOSHIHARA A, ISHII T, и др. Appl Microbiol Biotechnol,2016, 100(24) : 10403⁃ 10415.

[36]  Чхве джей г, чжу ю х, йом с джей и др. Повышение термостабильности D-psicose 3-epimerase  От Agrobacterium tumefaciens случайным и сайта ⁃ agenesis [J]. Appl Environ Microbiol,2011,77(20) :7316⁃7320.

[37]  Чжан-кью, цзян-б, чжан-т и др. Кинетика отключения и влияние добавок на стабильность хранения и структуру D-psicose 3-epimerase[J].Biotechnol Lett,2018,40(1) : 173-179.

[38] TSENG W C, CHEN C N, HSU C T и др. Характеристика рекомбината D ⁃allulose 3 ⁃epimerase from Agrobacterium sp.ATCC 31749 и идентификация важного межлицевого остатка [J]. Int J Biol Macromol,2018, 112 :767⁃774.

[39]  Ромеро с, санчес с, манджон с и др. Оптимизация пектинестеразе /endo⁃D ⁃polygalacturonase co⁃ imмобилизационный процесс [J].Enzyme Microb Technol, 1989, 11(12) :837⁃843.

[40]  Мужчины Y, ZHU Y, ZENG Y, и др. Совместное выражение D- изомеров глюкозы и D-psicose 3-epimerase: разработка эффективного одноступенчатого производства D ⁃psicose [J]. Фермент Microb Technol,2014, 64/65:1 1. 5.

[41] Чжан у, ли х, цзян б и др. Производство D- аллюлозы из D- глюкозы с помощью преобразующих клеток Escherichia coli с кодами D- изомеров глюкозы и D ⁃psicose 3 ⁃epimerase genes [J]. J Sci Food Agric,2017,97(10) : 3420⁃3426.

[42] цай юйцзе, дин яньжуй, чжан дабинг и др. Моделирование хроматографии подвижного слоя и ее применение [J]. Хроматография, 2004, 22(2): 111 — 115.

[43]  Нгуен V D, LE T H, KIM J I, et al. Отделение D-psicose и D-fructose с помощью симуляции хроматографии подвижного слоя [J].J Sep Sci,2009, 32(11) : 1987⁃ 1995.

[44]  Вагнер н, бошарт а, файлмезгер дж., и др. Раздельная параметрическая каскадная реакция для преодоления термоциклических ограничений в редких параметрических синтезах сахара [J].Angew Chem Int Ed,2015,54(14) :4182⁃4186.

[45]   LI C, ZHANG C, LIN J, et al.Enzymatic fructose removal from D ⁃ psicose bioproduction model solution and the system modeling and simulation[J].J Chem Technol Biotechnol,2018,93:1249⁃ 1260.