Каковы методы приготовления гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом?

Гиалуроновая кислота, также известный как стеклянная кислота, гликозаминогликан состоит из чередующихся глюкуроновой кислоты (GlcUA) и n-ацетилглюкозамина (GlcNAc) единиц. Гиалуроновая кислота-белый порошок, который не имеет запаха и вкуса. Она растворима в воде, но не растворима в органических растворителях. Его относительный молекулярный вес (Mr) варьируется от 1 до 7 градиентов. Имеет хорошую вязкость и псевдопластическую револогию, широко используется в офтальмологической микрохирургии, артрите, тканевой инженерии, хирургической профилактике адгезии и других областях [1]. Гиалуроновая кислота может быть получена путем экстракции тканей и микробной ферментации. Гиалуроновая кислота из различных источников не отличается по структуре, но гиалуроновая кислота с различными значениями Mr проявляет различную или даже противоположную биологическую активность, с очевидной зависимостью Mr.

Гиалуроновая кислота с молекулярным весом > 2 × 106 используется в офтальмологической хирургии и для лечения остеоартрита из-за его хороших вискоэластичных свойств; Гиалуроновая кислота с молекулярным весом (1-2) × 106 используется в глазных каплях и косметике благодаря своим хорошим увлажняющим свойствам; Г-н (1-8) × 104 гиалуроновая кислота с низким относительным молекулярным весом (гиалуроновая кислота с низким молекулярным весом, гиалуроновая кислота с низким молекулярным весом) и г-н < 1 × 104 гиалуроновая кислота олигосахариды занимаются биологическими видами деятельности, такими как содействие ангиогенезу и заживлению ран и борьбе с опухолями [2]. Автор анализирует последние исследования по методам приготовления и биологической деятельности гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом.

1 методы приготовления гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом

Молекулярный вес гиалуроновой кислоты, полученной путем экстракции и изоляции от животных тканей или микробной ферментации, как правило, составляет от 2 до 7 гравитационных 106. Тем не менее, в настоящее время не существует единого стандарта на молекулярный вес гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом, и, как правило, считается от 1 до 5 градиентов. Таким образом, низкий молекулярный вес гиалуроновой кислоты порошок может быть подготовлен сначала унизительной гиалуроновой кислоты в определенной степени, а затем очищать и рафинировать его. Существует множество методов деградации, которые можно подразделить на методы физической деградации, методы химической деградации и методы биологической деградации. Кроме того, гиалуроновая кислота с низким молекулярным весом может также производиться путем микробной ферментации. Различные методы деградации имеют свои преимущества и недостатки, и соответствующий метод деградации может быть выбран в соответствии с фактическими потребностями.

1. 1 метод физической деградации

Метод физического разложения использует физические факторы разложения гиалуроновой кислоты, такие как тепло, механический ножницы, ультрафиолетовое излучение, микроволны, ультразвук, гамма-излучения и т.д. В работе Choi et al. [3] сопоставляется разлагаемое воздействие облучения луча электронов (EB), гамма-излучения (GM), микроволнового облучения (MW) и термической обработки (TH) на разложение порошка гиалуроновой кислоты. Результаты показали, что все четыре метода могут разлагать Mr гиалуроновой кислоты с 1.04 × 106 до 2 × 105 до 3 × 105, но все они влияют на структуру гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом после разложения. Среди них метод обработки МВТ увеличивает уф-поглощение гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом на 265 нм, что вызывает двойные связи в молекулярной структуре и меняет цвет продукта на коричневый. Однако этот метод может повысить антиоксидантную активность гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом.

Методы EB и GM приводят к минимальным изменениям в ультрафиолетовом спектре гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом по сравнению с другими методами, что указывает на минимальные изменения молекулярной структуры во время деградации. Однако результирующие продукты имеют низкую полидисперсию (МВТ/мн 2,21 и 2,27, соответственно), методы эб и гм гиалуроновой кислотной деградации являются более случайными, чем метод МВТ. TH-это простой и легкий в управлении метод разложения гиалуроновой кислоты. Гиалуроновая кислота порошок помещается в духовку на 90 градусов в течение 52 часов для получения продукта с узким диапазоном распределения Mr. Метод физической деградации не требует химических реагентов, не загрязняет окружающую среду, имеет простую процедуру постобработки и получает продукт с узким молекулярным распределением веса и хорошей термоустойчивостью. Однако для деградации этого метода требуется много времени, что не способствует массовому производству. В целях сокращения производственных издержек в основном используется метод химической деградации.

1. 2 метод химической деградации

Some chemical reagents can be used to break hyaluronic acid chains, thereПо запросу:achieving В настоящее времяpurpose Соединенные Штаты америкиdegradation. Hydrochloric acid is commonly used for acid hydrolysis, sodium hydroxide for alkaline hydrolysis, иsodium hypochlorite and - водородПероксид (пероксид)for oxidative degradation. В настоящее времяmaВ случае необходимостиprinciple Соединенные Штаты америкиoxidative degradation is that В настоящее времяoxygen radicals produced by the oxidant break the glycosidic bonds Соединенные Штаты америкиthe hyaluronic acid chains. The higher the concentration Соединенные Штаты америкиH2 O2, the faster the degradation. The addition of CuCl2 can significantly increase the degradation rate [4]. In addition, it has been found that hyaluronic acid can be oxidatively degraded В случае необходимостиWeissberger' система s [ascorbate + Cu(II)], но добавление некоторых соединений меркапто, таких как d-пенициллиамин и уменьшенный глутатион может подавить гиалуроновую кислоту разложения [5].

В дополнение к традиционным методам химической деградации, в последние годы гу и др. [6] изучали электрохимическую деградацию гиалуроновой кислоты, то есть использование электродов Ti/TiO2-RuO2 для электролиза раствора гиалуроновой кислоты (0,1% вт/в), с равномерным колебанием во время процесса электролиза и температурой, регулируемой при 50 градусах. Результаты показали, что Mr гиалуроновой кислоты может быть уменьшен с 1,49 до 6,9 до 6,9 в течение 120 мин. фтер-ик спектроскопия и 1ч и 13с -NMR результаты показали, что химическая структура гиалуроновой кислоты не претерпела значительных изменений электрохимическим методом. Таким образом, электрохимический метод является простым и практически осуществимым с коротким периодом разложения и представляет собой новый метод с перспективами применения. С помощью метода химической деградации Mr продукта можно контролировать путем регулирования количества добавляемого химического реагента и времени реакции. Время разложения является коротким, что снижает производственные издержки. Однако недостаток заключается в Том, что условия реакции относительно суровы, что не только разрушает гликосидическую связь на сахарной цепи, но и может разрушить структуру остатков моносакварида. В продукте могут также присутствовать остатки окислителя, что снижает качество продукта.

1. 3 метод биодеградации

Гиалуроновая кислота деградирует в результате действия гиалуронидазы (гиалуронидазы, гиалуроновая кислота as), которая разрывает гликосидическую связь. В прошлом гиалуронидаз в основном производился из яичек животных. Annal- isA/данные отсутствуют.et al. [7] использовали гиалуронидазу (вт) для гидролиза гиалуроновой кислоты in 3. Пробиркаи обнаружили, что вт может значительно уменьшить Mr гиалуроновой кислоты. Чем выше концентрация фермента и чем дольше время, тем короче цепочка гиалуроновой кислоты. Экспериментальные результаты показывают, что Mr гиалуроновой кислоты может быть всего 1 × 104 после 24 часов ферзиматического гидролиза с вт 10 U·mL-1. 13. В работе Cui Xiangzhen et al. [8] определены оптимальные условия для гиалуронидационного гидролиза гиалуроновой кислоты, которые включают концентрацию под давлением 10 г · л -1, концентрацию фермента 150 000 г · л -1, pH 5,0 и температуру реакции 50 °C. Гиалуроновая кислота с различным Mr может быть получена путем регулирования времени реакции. Однако метод получения гиалуроновой кислоты от животных яичек ограничен сырьем и является относительно дорогим. Было обнаружено, что некоторые бактерии стрептококка могут производить гиалуроновую кислоту как.

8. В работе eii -safory et al. [9] приводится краткое описание типов бактерий, которые могут производить гиалуроны, включая стрептококки agalactiae, стрептококки pyogenes, стрептококки пневмонии, стрептококка intermedium, стрептококка consellatus, стрептококка dysgalactiae, стрептококка uberis, стрептококка zooepidemicus. Эти стрептококковые бактерии производят гиалуронидазу, которая разлагает гиалуроновую кислоту, схлопывая n-ацетилглукозамин и образуя Грааль -4,5- алдоническую кислоту остатков на недеградировавшей поверхности. Помимо гиалуронидазы, глюкуронидаза и гексаамидаза также оказывают воздействие на деградацию гиалуроновой кислоты [10].

Энзиматический гидролиз является самым мягким методом разложения, который оказывает наименьшее воздействие на структуру гиалуроновой кислоты и, следовательно, на ее активность. Используется для приготовления гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом, а гиалуроновая кислота олигосахариды также могут быть получены после разделения хроматографии геля. Однако источник гиалуроновой кислоты как является ограниченным и дорогим, что в значительной степени ограничивает ее применение.

1. 4 микробная ферментация

The above methods for preparing low-molecular-weight hyaluronic acid all use finished hyaluronic acid for further degradation, which is complicated and time-consuming, and Некоторые из нихhyaluronic acid is also lost В течение годаthe degradation process. In recent years, studies have shown that low-molecular-weight hyaluronic acid can be directly produced through fermentation culture, mainly by changing the strain, the composition of the Культура и искусствоmedium, or adding a certain substance during the fermentation process. UС. Spatent [11] reports that recombinant Bacillus subtilis can produce 2 × 104 to 8 × 104 Низкий уровень дохода10. Молекулярная структураweight hyaluronic acid under culture conditions with a changed temperature. This method involves culturing at a temperature suitable for the growth of the strain for a period of time, and then increasing the temperature to achieve the purpose of producing low 10. Молекулярная структураweight hyaluronic acid.

Пиреш и др. [12] модифицировали среду для ферментации зоэпидемиков стрептококка с целью получения гиалуроновой кислоты. Они использовали производные сельскохозяйственной продукции, такие как гидролизат соевого белка, концентрированный белок сыворотки и жидкость для орехов кешью в качестве среды, а также синтетическую среду с глюкозой в качестве источника углерода и дрожжевой экстракт в качестве источника азота в качестве средства ограничения выбросов. Средняя концентрация гиалуроновой кислоты, производимой всеми сельскохозяйственными продуктами в качестве культурной среды, составляла от 103 до 104, среди которых концентрация гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом, производимой жидкой средой кешью, составляла около 2 ° 104.

Liu et al. [13] добавляют пероксид водорода (1,0 ммоль · гиалуроновая кислота g-1) и аскорбат (0,5 ммоль · гиалуроновая кислота g-1) в брод ферментации Стрептококк. Чтоzooepidemicus при 8 и 12 ч ферментации и используют окислительную деградацию для получения конечного продукта гиалуроновой кислоты с Mr 8 × 104. Кислота) в 8 и 12 ч. Конечный продукт гиалуроновой кислоты имеет Mr 8 × 104, и добавляемые вещества не влияют на рост Streptococcus zooepidemicus. При разложении добавленного вещества было получено определенное количество гиалуроновой кислоты, которая была добавлена в процессе ферментации, и та же гиалуроновая кислота лм-вт. Liu et al. [14] добавляют гиалуроновую кислоту в брот ферментации при различных концентрациях в течение 8 часов ферментации. При массовых концентрациях 0,15, 0,20 и 0,25 г · л -1 Mr гиалуроновой кислоты был снижен до 4,5 ° 104, 3,2 ° 104 и 2,1 ° 104, соответственно.

Microbial fermentation is a common method for producing Порошок гиалуроновой кислоты, а непосредственное производство гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом путем изменения условий ферментации может устранить необходимость последующих процессов деградации. При дальнейшей оптимизации условий ферментации, условия ферментации могут быть скорректированы в соответствии с фактическими потребностями для непосредственного производства гиалуроновой кислоты с различным Mr, снижая производственные затраты и имея высокую ценность применения для крупномасштабного производства гиалуроновой кислоты лм-вт.

2 биологическая активность гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом

Исследования показали, что биологическая активность гиалуроновой кислоты в значительной степени зависит от молекулярного веса. Статья посвящена противоопухолевой, провоспалительной реакции и иммунной регуляции биологической деятельности гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом.

2. 1 противоопухолевый эффект

Alaniz et al. [15] показали, что гиалуроновая кислота с низким молекулярным весом снижает рост колоректальных карциномы (КПР) клеток in vivo и in vitro. Результаты экспериментов in vitro показали, что низкая доза гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом (20 μg·mL-1) была единственным условием, которое значительно сократило распространение опухолевых клеток CT26. Этот эффект был достигнут при помощи рецептора CD44, а использование гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом (1-3) × 105 групп значительно увеличило апоптоз клеток CT26 (около 50%) по сравнению с использованием гиалуроновой кислоты с высоким содержанием Mr (1.5-1.8) × 106 групп; Эксперименты in vivo показали, что гиалуроновая кислота с низким молекулярным весом может снизить рост опухолевых клеток РЦР и повысить выживаемость опухолевых мышей. Авторы предполагают, что механизм должен оказывать противоопухолевый эффект путем увеличения представления антигена дендритными клетками (рс). Teng et al. [16] полагают, что гиалуроновая кислота может регулировать рост и дифференциацию клеток КРС путем ингибирования механизма apoptosis в сочетании с гиалуроновой синтазой 3 (гиалуроновая синтаза 3, гиалуроновая кислота 3). Механизм действия гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом в противоопухолевой антиопухолевой среде до сих пор не является достаточным, что может быть связано с ее Mr, концентрацией и реакцией с другими матричными компонентами в микросреде опухоли.

2.2 поощрение воспалительной реакции

Есть много результатов исследований о взаимосвязи между гиалуроновой кислотой с низким молекулярным весом и воспалением. Еще в 1996 году Mckee et al. [17] обнаружили, что гиалуроновая кислота с низким молекулярным весом может вызывать макрофаги к образованию мононуклеарных клеток, химически привлекающих белков -1 (MCP-1), воспалительных гиалуроновых кислот макроп Протеин -1α (mpi -1α), макро гиалуроническая кислота in- фламаторный протеин -1β (mpi -1β) и другие химиомины, тем самым вызывая воспаление. Voel mp -1α, и macrophage воспалительный белок 1β (macrophage воспалительный белок -1β, mp -1β) и т.д., которые вызывают воспаление. Voelcker et al. [18] полагают, что фрагменты гиалуроновой кислоты могут рассматриваться как платные рецепторы (TLR) и вызывать воспалительную реакцию.

Farwick et al. [19] использовали реинсталлированную модель эпидермиса человека и обнаружили, что 2 × 104 гиалуроновая кислота может значительно упрегулировать выражение фактора некроза опухоли (TNF-α) в этой модели, что указывает на воспалительную реакцию. Однако 5 × 104 гиалуроновая кислота существенно не изменила выражения TNF-α и не продемонстрировала воспалительной реакции. Лайл и др. [20] исследовали влияние гиалуроновой кислоты с различным Mr на выработку оксида азота в клетках мышей RAW264. 7 при воспалительных или невоспалительных условиях (оксид азота является прямым индикатором воспалительной реакции с помощью макрофага). При самых высоких воспалительных условиях, гиалуроновая кислота с низким молекулярным весом незначительно увеличила свое производство, что указывает на то, что если эндотоксин снижается до крайне низкого уровня, то гиалуроновая кислота с низким молекулярным весом не вызывает непосредственно воспалительные реакции через макрофаг в нормальных тканях.

2.3 иммунное регулирование

Domestic and foreign studies have confirmed that hyaluronic acid is involved in the regulation of the human immune system. Low concentrations of hyaluronic acid have a slight stimulating effect on phagocytes and natural killer cells, but inhibit the transformation of lymphocytes and the formation of rosettes of red blood cells. At the same time, high concentrations of hyaluronic acid have a significant inhibitory effect on lymphocytes, phagocytes, natural killer cells, etc. [21]. Alaniz et al. [22] found that low 10. Молекулярная структураweight hyaluronic acid can promote the maturation of DCs, increase the Производство и продажаof IL-12, and reduce the production of IL-10, while also producing a specific cytotoxic T lymphocyte response and immune protection response. and dendritic cells/T lymphocytes (DC/TL) pretreated with low-molecular-weight hyaluronic acid have improved migratory capacity towards Хемокин (химия)ligand-19 (CCL-19) and chemokine ligand-21 (CCL-21), and these migratory capacities enhance the aggregation of DC/TL cells in lymph nodes.

2. 4. Прочие расходы

Гиалуроновая кислота с низким молекулярным весом имеет множество других биологических видов деятельности. Пиллони и др. [23] обнаружили, что эксперименты in vitro показали, что гиалуроновая кислота с низким молекулярным весом может способствовать миграции и дифференциации мезенхимальных клеток, тем самым способствуя образованию костей. Gariboldi et al. [24] обнаружили, что в случае повреждения кожи гиалуроновая кислота с низким молекулярным весом может стимулировать кератиноциты для увеличения производства β-defensin 2, что увеличивает функцию лечения кожи. Что может быть связано с повышенной антибактериальной активностью кожи, вызванной увеличением производства бета-защицина 2.

3. Перспективы на будущее

The preparation of low-molecular-weight hyaluronic acid powderЯвляется предварительным условием для исследований и применения. В настоящее время для крупномасштабного производства используются главным образом методы химической деградации, которые оказывают значительное влияние на структуру получаемого продукта. В отличие от этого, метод биоразложения имеет мягкие условия реакции и простой процесс, и является методом разложения, который производит лучшую структуру гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом. В то же время метод микробной ферментации для производства гиалуроновой кислоты лм-вт является новым методом, имеющим ценность с точки зрения промышленного развития, но этот метод все еще далек от крупномасштабного производства. Поэтому по каждому методу все еще необходимы дальнейшие изыскания и исследования.

Гиалуроновая кислота с низким молекулярным весом порошок имеет различные биологические виды деятельности, и биологические агенты могут быть разработаны и подготовлены на основе этих видов деятельности. Например, ожидается, что антиопухолевый эффект будет развит в адъювант для лечения опухоли. Кроме того, его иммуномодуляторный эффект может также играть роль в подготовке иммунных адъювантов. Существует много других биологических видов деятельности с низким молекулярным весом гиалуроновой кислоты, но до сих пор нет систематических фармакологических исследований или клинических испытаний. Все это нерешенные вопросы для гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом, и необходимы более углубленные исследования.

1. Рекомендация суда

[1] цуй Y, дуан Q, ли Y H. Исследования в области гиалуроника Кислота [J]. J Changchun Univ Sci Technol, 2011,34(3) : 101 — 106.

[2] ян г л, го х п, луан и г. Применение натрия хья-луронат с В отличие от других Относительный показатель Молекулярная масса [J], питание and  Наркотик,2005,7 (12) : 1-3.

Чхве джей, ким Джей кей, ким джей х и др. разрушение гиалуроника Кислотный порошок при облучении электрическим лучом, облучении гамма-лучом, микроволновом облучении и термической обработке: сравнительное исследование [J]. Карбогидр полим,2010,79(4) : 1080-1085.

[4] ладислав - с, власта B, Моника, С, и, и Al. Деградация окружающей среды С высоким молекулярным весом - гиалуронан  by  hydrogen  peroxide  in  the  Наличие ионов cupric [J]. Карбогидр Res,2006,341 (5) : 639- 644.

[5]HRABROV E,VALACHOV K,RYCHLY J, и др#39; система s: Pro- и антиоксидативная Последствия для окружающей среды of  some  Соединения тиола [J]. 1. Полим. Degra Stab,2009,94(10) : 1867 — 1875.

[6] гу з м, цай Q Y, он Y, и др. разложение гиалуронана ан 1. Электрохимический состав Процесс [J]. - карбогид. Полим,2010,82:521 — 523.

[7]ANNALISA L G,MARIO D R,IOLANDA M, и др Гиалуронан гидродинамик 3. Определение характеристик Использование программного обеспечения a  Исключение по размеру Хроматографический-тройной детектор 1. Массив В системе организации объединенных наций during  in  vitro  Ферзиматическое разложение [J]. Анал биохем,2010,404(1) : 21 — 29.

[8] цуй X Z, лю а H,WANG F S,et al. Чин дж. Биохим фарм,2007,28 (3) : 161 — 163.

[9] eisafory N S,LEE G C,LEE C. C.K. Характеристика hya- luronate lyase из Steptococcus pyogenes bacteriophage H4489A. [J]. Карбогидр полим,2011,84(3) : 1182 — 1191.

[10]FRASER J RE,LAURENT T C,LAURENT U B.Hyaluronan: Его характер, распределение, функции и оборот [J]. Стажер мед, 1997,242(1) : 27-33.

[11] запасы S  М, коричневый - с. Производство и продажа of  low  molecular  Вес гиалуроновой кислоты: US,WO /2007 /093179[P].2007-8-23.

[12] пиреш A M B, маседо AC, эгути S Y, и др. микробное производство гиалуроновой кислоты из производных сельскохозяйственных ресурсов [J]. Biores Technol,2010,101 (16) : 6506-6509.

[13]LIU L,DU G C,CHEN J,et al.Microbial производство гиалуроновой кислоты с низким моо-лечным весом путем добавления пероксида водорода и аскорбата Партия (в упаковке) culture  of  Streptococcus  Zooepidemicus [J]. Biores Technol,2009,100(1) : 362 — 367.

[14]LIU L,DU G C,CHEN J,et al.Influence of hyaluronidase ad- dition on the  production  of  Гиалуроновая кислота готова Пакетная культура Streptococcus zooepidemicus[J]. - продукты питания Химия,2008,110 (4) : 923-926.

[15] аланис - я, риццо - м, мальвичини М, и al.Low molecular  Гиалуронанный вес подавляет рост колоректального рака путем декорирования — поют распространение опухолевых клеток и стимулируют иммунную реакцию [J]. Рак летт,2009,278 (1) : 9-16.

[16]TENG B P,HEFFLER M D,LAI E C,et al.hyalu-ronan synthase-3 Уменьшение объема ресурсов Подкожная ткань (подкожная) Рост рака толстой кишки Увеличение апоптоза [J]. Антираковый агент медхим,2011,11 (7) 620-628.

[17] макки C  - м, пенно М-р б, ковман м, и др. гиалуронан (ха) 2. Фрагменты: В случае необходимости chemokine  - генная инженерия Выражение в альвеоларе - макрофаги. Роль размера га и CD44[J]. J Clin Invest, 1996,98 (10) : 2403-2413.

[18] фрагменты фолькера V, гебхарда C, авербека M и др. гиалу-ронана вызывают упрегуляцию цитокина и металлопротеазы В клетках меланомы человека частично путем сигнализации через TLR4[J]. Бывшая югославская республика македония Дерматол,2008,17 (2) : 100 — 107.

[19] фарвик м,GAUGLITZ G,PAVICIC T, и др Выражение TNF-alpha в восстановленном эпидермисе [J]. Кожа Phar- macol Physiol,2011,24(4) : 210-217.

[20]LYLE D B,BREGER J C,BAEVA L F,et al. J биомед матер Res A,2010,94(3) : 893-904.

[21]KE C L,ZENG X X. Прогресс в исследованиях биоактивности hy- алуроновой кислоты [J]. Чин мед биотчнол, 2009,4(2) : 148-151.

[22] аланис - я, риццо М, гарсия м., и др molecular  Гиалуронан-прекондиционирование дендритных клеток, импульсируемых опухолями Повышает их миграционную способность и обеспечивает иммунитет против мурин В прямой кишки  Рак [J]. - Рак;  Иммунизация и иммунизация Иммунизация, 2011,60(10) : 1383 — 1395.

[23] пиллони а, бербард джи у. Гиалуроновая кислота с низким молекулярным весом увеличивает остеогенез In vitro[J]. J Dent Res,1992,71:574.

[24]GARIBOLDI S,PALAZZO M,ZANOBBIO L,et al.Low molec- кулярная гиалуроновая кислота повышает самозащиту кожи epi- телия путем индукции β-defensin 2 via TLR2 и TLR4[J]. J иммунол,2008,181 (3) : 2103-2110.