Исследование по синтезу астаксантина методом микробной ферментации

Астакзантин — оранжево-красный каротеноид кетотипа с молекулярной формулой C40H52O4 и химическим названием 3,3'- дигидрокс -4,4'- дион-бета, бета'- каротин [1-2]- да- да- да- да. Астаксантин нерастворим в воде, жирорастворим, растворим в органических растворителях, таких как бензол, хлороформ, ацетон и углерод, и незначительно растворим в полярных органических растворителях, таких как метанол и этанол [3]. Астаксантин представляет собой тетратероид, состоящий из восьми изопреновых единиц, соединенных конфузированными двойными соединениями, с ненасыщенной гидроксиловой и кетонной группами в конце конфузированных двойными соединениями [4]. Таким образом, астаксантин существует в различных конформациях (рис. 1), в Том числе: левороторные (3- с,3&)#39; с., dextrorotary (3- р,3&)#39; р) и рацемические (3- с,3&)#39; р. [5]. Среди них (3- с,3&)#39; с) изомер является наиболее распространенным формацией астаксантина в природе, а также с самой высокой антиоксидантной активностью, за которой следуют (3- р,3&)#39; р; и (3с, 3&)#39;R) соответствие [6].

AstaxanthВ случае необходимостиhПо состоянию на 31 декабряvery - высокий уровеньapplicatiПо состоянию наvalue. Its long conjugated polyene chaВ случае необходимостиcА вот и нет.quench singlВ то же времяoxygen, scavenge free radicals, enhance 1. Ячейкаactivity, иprotect По правам человекаbody lipids, thus По улучшению положения женщинimmunity иanti-aging По адресу:A/данные отсутствуют.certaВ случае необходимостиextent. Some studies have shown thПо адресу:astaxanthin's антиоксидантная способность В настоящее время6,000 times thПо адресу:Соединенные Штаты америкиvitamВ случае необходимостиC, C,making it В настоящее времяstrongest Антиоксидант (антиоксидант)reported В случае необходимостиnature [7-9]. At В настоящее времяsame time, it cА вот и нет.prevent most Окислительное средствоstress иrelated inflammation, including hypertension, cancer, obesity, cardiovascular disease, inflammatory diseases, bone diseases, skВ случае необходимостиdiseases, etc., so it cА вот и нет.be used По состоянию на 31 декабряA/данные отсутствуют.multi-targВ то же времяdrug preparatiПо состоянию на[10]. F- либоexample, Lignell В то же время- эл. - привет.[11] showed that orally administered astaxanthin-containing drugs can significantly improve muscle strength иexercise endurance.

AstaxanthВ случае необходимостиis also A/данные отсутствуют.По окружающей средеcoloring agent that exists В случае необходимостиВ отличие от другихВидов животных и растенийВ случае необходимостиdifferent configurations, giving В настоящее времяbody A/данные отсутствуют.unique colИли... или...The red color Соединенные Штаты америки- лосось, лосось.meat is often A/данные отсутствуют.visual treat that makes it easy По адресу:judge В настоящее времяfreshness иflavor Соединенные Штаты америкиВ настоящее времяfood. In addition, - астаксантинcan also be used as an additive В случае необходимостиpoultry feed. Studies have shown that adding 10 mg/kg ofПриродный астаксантин По адресу:В настоящее времяfeed can effectively deposit it В случае необходимостиВ настоящее времяmeat Соединенные Штаты америкиducks, giving the beaks иfeВ то же времяСоединенные Штаты америкиlive ducks A/данные отсутствуют.healthy golden color. It can also improve the oxidative stability Соединенные Штаты америкиmuscle lipids иmake them more nutritious [12].

Астаксантин также играет защитную роль в растениях окружающей среды. Например, - астаксантинsprays может увеличить фотосинтез листьев винограда, повысить их стрессоустойчивость и изменить цвет. В результате астаксантин в настоящее время все чаще используется в медицине, косметике, пищевой промышленности, кормовых добавках, продукции здравоохранения, сельском хозяйстве и т.д. (рис. 2) [13-14]. Глобальный рынок каротеноидов оценивался в 1,5 МЛРД долларов США в 2017 году и, как ожидается, достигнет 2 МЛРД долларов США к 2022 году [15]. Ожидается, что к 2027 году мировая рыночная стоимость астаксантина, второго по величине каротеноида, вырастет почти до 3,4 МЛРД долларов США [16].

В настоящее время основные методыПроизводство и сбытastaxanthin include По окружающей средеextraction, chemical Ii. ОбобщениеиНа микробной основеfermentation. По окружающей среде1. Извлечениеinvolves extracting - астаксантинИз российской федерацииlobster, crab иother crustacean waste, but the yield is extremely low, the process is complex иcostly, иthe extraction process is susceptible to contamination, making it economically unviВ наличии:[17-18]. The chemical Ii. ОбобщениеМетод проведения испытанияhas a long Производство и продажаcycle иa complex process [19]. The product Соединенные Штаты америкиsynthesis is a mixture Соединенные Штаты америки- астаксантинВ случае необходимостиvarious configurations иthe B. накопление запасовСоединенные Штаты америкиvarious by-products [20]. The absorption иutilization rate В случае необходимостиliving organisms is lower than that Соединенные Штаты америкиnaturally extracted astaxanthin, so it is not approved дляПо правам человекаuse [19].

При непрерывном развитии технологии синтетической биологии использование микробной ферментации для производства натуральных продуктов продемонстрировало большой потенциал [21-23]. Астаксантин, получаемый с использованием микроорганизмов, имеет преимущества четкой конфигурации, является экологически чистым и имеет мало побочных продуктов [16]. Поэтому это очень перспективный метод астаксантинского производства [18, 24].

Microorganisms currently used для- ферментативный.Синтез астаксантина include algae, bacteria, yeast, etc. [25]. This paper discusses the latest progress В случае необходимостиthe Производство и продажаСоединенные Штаты америки- астаксантинПо запросу:- гематококкpluvialis, Организация < < эшерихия > >coli, ксантофилломисесdendrorhous, 3. ЯрровияОрганизация < < липолитика > >иother microorganisms, иsummarizes the Ii. Стратегиидляscreening и3. МетаболизмИнженерно-технические работыСоединенные Штаты америкиПроизводство астаксантинаstrains to increase Производство astaxanthinиreduce costs. 3. ЯрровияОрганизация < < липолитика > >иother microorganisms to Продукт astaxanthin, the latest developments are discussed, иstrategies дляthe selection и3. МетаболизмИнженерно-технические работыСоединенные Штаты америкиastaxanthin-producing strains to increase - астаксантинПроизводство и продажаиreduce costs are summarized.

1 путь биосинтеза астаксантина

Биосинтез астаксантина можно разделить на три этапа [10]:

Первым этапом является центральный углеродный метаболизм, в котором организмы используют глюкозу и другие источники углерода для получения пировата и ацил-коа через эмбден-мейерхоф-Парнас (эмп). Они используются в качестве прекурсоров для синтеза терпеновых веществ и транспортируются в мевалонатную (MVA) и метилеритритолофосфатную (MEP) пути в качестве прекурсоров для синтеза терпеновых веществ.

MVA/данные отсутствуют.и MEP. P.являются вторым этапом пути синтеза астаксантина (рис. 3). Путь MVA/данные отсутствуют.обеспечивает не только прекурсоры, необходимые для синтеза терпена, но и прекурсоры веществ, необходимых для роста клеток. Она начинается с ацетилкоэнзима а, изопенфенилпирофосфат (ипп) производится в шестиступенчатой ферментативной реакции, изомерит ипп до диметилаллилпирофосфата (дмапп) изомеризирует ипп до диметилаллилпирофосфата (дмапп) и, наконец, использует ипп и дмапп в качестве прекурсоров для синтеза прекурсоров терпеноидов. Путь С. О.EP. P.является еще одним маршрутом поставок для синтеза прекурсоров природных терпеноидов, и широко встречается в бактериях, грибах, растениях и водорослях. Этот путь начинается с пировата, и DMAPP производится в семи ферментативных реакциях. Затем идп изомеризирует дмапп в IP- п,и, наконец, для синтеза прекурсоров терпеноидов используются IPP и DMAPP.

The third stage is the - астаксантинsynthesis stage, В случае необходимостиwhich IPP иDMAPP are converted to geranylgeranyl pyrophosphate (GPP) По запросу:the action Соединенные Штаты америкиthe 1. Ферментfarnesyl diphosphate synthase (ispA). GP P continues to be Производство и продажаПо запросу:isp- A.Farnesyl pyrophosphate (FPP) is produced По запросу:farnesyl pyrophosphate synthase (CrtE), иgeranylgeranyl diphosphate (GGPP) is produced По запросу:geranylgeranyl diphosphate synthase (CrtE). ). GGPP is converted into lycopene По запросу:the action Соединенные Штаты америкиthe octahydro-lycopene synthase/cyclase (phytoene synthase, lycopene cyclase) CrtYB.иthe octahydro-lycopene desaturase (phytoene desaturase) CrtI. Lycopene is converted into - о, каротин По запросу:the action Соединенные Штаты америкиCrtYB.

Структурная разница между градом — структурная разница между нимиβ-caroteneА астаксантин находится в гидроксильных и карбониловых группах на кольцах на концах углеродных цепей. Таким образом, процесс преобразования грау-каротина в астаксантин представляет собой процесс добавления гидроксильных и карбониловых групп в концы кольца молекул грау-каротина. Однако синтетические пути в различных организмах могут различаться. Так, например, в пантоэе астаксантин синтезируется главным образом с помощью грац-каротеноидной кетолазы (CrtW) и грац-каротеноидной гидроксилазы (CrtZ); В Haematococcus 6. Плювиалис (pluvialis)- астаксантинсинтезируется главным образом путем гравюротеноидной кетолазы (BKT) и гравюротеноидной гидроксилазы (CrtR); В дрожжевой красной фракции астаксантин синтезируется в основном Cr tB. Р.и Crt- с.В некоторых других искусственных дрожжей астаксантин также синтезируется путем выражения грау-каротин кетолазы и грау-каротин гидроксилазы. Tagetes erecta в настоящее время единственный завод, который может производить астаксантин, который синтезируется путем выражения каротеноидных 4- гидроксидных -β

2 клетки шасси астаксантина синтеза

В настоящее время регулирование процесса ферментации и метаболической инженерии для изменения штамма все еще широко используются стратегии для улучшения микробного астаксантина синтеза. Например: улучшение производства микробных астаксантина путем оптимизации условий ферментации; Расширение предложения веществ-прекурсоров путем укрепления метаболических путей дсоп и мп; Проверка на предмет выражения ключевых генов из различных источников;

Модульная конструкция для соединения экспрессионных генов и увеличения их числа копий;

⑤ localize различные субклеточные органолы и т.д.

2.1 водоросли

Many algae В случае необходимостиnature can produce astaxanthin, such as Haematococcus pluvialis, Chlamydomonas, Acetabularia, Euglena, etc. [26]. Haematococcus 6. Плювиалис (pluvialis)is a freshwater single-celled - зеленый цветalga that can reach 5% - астаксантинcontent Соединенные Штаты америкиthe 1. Ячейкаdry weight. It is the maВ случае необходимостиalga для- астаксантинproduction, иthe - астаксантинproduced По запросу:Haematococcus pluvialis is the most antioxidant-rich levo (3- с,3'S) конфигурация [27]. Тем не менее, гематококковой плувиалис имеет длительный цикл роста, высокие требования к культивированию, нуждается в свету, и астаксантин встречается в толстостенных спорах, которые имеют низкую скорость извлечения, высокую стоимость и слабую непрерывность [19, 28].

Высокая стоимость производства Haematococcus pluvialis - астаксантинограничивает его масштабное применение. Поэтому существует настоятельная необходимость в разработке новых процессов для достижения коммерческого применения путем сокращения производственных издержек и увеличения содержания астакзантина в гематококковой плювиалисе. Рост гематококкового плювиалиса требует света, но из-за неравномерного распределения интенсивности света и смешивания внутри фотобиореактора водоросли будут затронуты светло-темным циклом, который повлияет на биомассу и производство вторичных метаболитов. Ranjbar В то же время- эл. - привет.[29]разработали фотобиореактор воздушного подъема, который, по сравнению с традиционным биореактором, имеет более регулярную структуру потока для жидкой циркуляции, что приводит к более стабильному светло-темному циклу, более равномерному смешиванию жидкостей, увеличению производства вторичных метаболитов и значительному увеличению производства астаксинтина в гематококковых плавиалиях.

В дополнение к вышеуказанным стратегиям, добавление некоторых экзогенных веществ также является возможным способом увеличения производства астаксантина. Ван и др. [30]пришли к выводу о Том, что добавление ракс-gr24 (синтетический аналог гормона растений) может эффективно увеличить биомассу, получаемую гематококковой плювиалией, и накопление астакзантина. Рас-gr24 может повысить фотосинтез растений и коэффициент использования CO2 в углеводном синтезе, тем самым увеличивая накопление биомассы. Это также способствует перепроизводству надph и пероксидазы, тем самым уменьшая ущерб, причиняемый реактивными кислородными видами. Кроме того, лечение рака-gr24 при гематококковой плювиализе также изменяет активность биосинтеза жирных кислот и астаксантиновой эстерификации, тем самым увеличивая накопление астаксантина.

Extracting - астаксантинИз российской федерацииalgae is the biggest challenge because the hard иthick 1. Ячейкаwalls И водорослейincrease the mechanical иchemical resistance Соединенные Штаты америкиthe cells. Traditional extraction methods are not suitable дляextracting - астаксантинИз российской федерацииalgae. Therefore, Huang Wencan В то же время- эл. - привет.[31]proposed a new Метод проведения испытаниядляextracting - астаксантинИз российской федерацииHaematococcus pluvialis Использование программного обеспеченияa switchable hydrophilic solvent. Dimethylamino cyclohexane (DMCHA) is a switchable hydrophilic solvent сlow volatility иsolubility. Using it, without the need дляdistillation, the extraction rate - астаксантинаИз российской федерацииHaematococcus pluvialis can reach 87.2% По запросу:simply adding water иCO2 at the same time.

Haematococcus pluvialis is rich in natural astaxanthin, unsaturated - толстый.acids, etc., иhas high research and utilization value [32]. At the same time, the demand дляnatural - астаксантинВ случае необходимостиdomestic and foreign markets is increasing, and В его рамкахdevelopment B. потенциальные возможностиis huge. However, there are still several problems that need to be explored and solved: ① The conversion Соединенные Штаты америкиthe intermediate metabolites and the Выражение на английском языкеregulation Соединенные Штаты америкиКлюч к разгадке1. Ферментыinvolved В случае необходимостиthe synthesis - астаксантинаПо запросу:Haematococcus pluvialis need to be further explored; ② Due to the complex cell wall structure Соединенные Штаты америкиHaematococcus pluvialis, the extraction yield is low, and new extraction processes still need to be developed В случае необходимостиthe future to reduce Производство и продажаcosts.

2.2 дрожжи

Основными видами дрожжей в природе, которые естественным образом производят астаксантин, являются родоторула рубра, родоторула глутинис, р. бентика и другие. С развитием синтетической биологии искусственные дрожжи, изготовленные на основе генной инженерии, могут также производить астаксантин, такие как 3. Ярровияlipolytica, - сачаромицисОбщее состояние здоровьяи - клайверомисесmarxianus. По сравнению с водорослями и другими микроорганизмами дрожжи имеют широкий спектр субstrate источников для производства астаксантина, быстрый рост, короткий цикл ферментации, и относительно зрелыми средствами генетической модификации. Таким образом, дрожжи в настоящее время являются одним из наиболее перспективных шасси клетки для промышленного производства астаксантина.

2.2.1 красные фифильные дрожжи

Красными дрожжами, наряду с гематококковым плювиалисом, считается наиболее подходящий микроорганизм в природе для промышленного производства астаксантина [33-34]. Он может фермировать и синтезировать астаксантин с использованием различных сахаров в качестве источников углерода [35], и его клетки быстро растут, с коротким циклом роста, что позволяет выращивать растения с высокой плотностью и значительно сократить производственные издержки [34, 36]. AstaxanthВ случае необходимостипроизводится в то же время в (3- р,3&)#39;R) configuration and is easily absorbed by the human body. Therefore, Rhodotorula became one Соединенные Штаты америкиthe ideal chassis 2. Камерыfor - астаксантинsynthesis- да. В таблице 1 показан последний прогресс в производстве астаксантина родоторулой.

Оптимизация условий ферментации — самый простой и прямой способ увеличения производства астаксантина. Среди этих условий pH/ч.оказывает влияние как на рост красных фракционных дрожжевых клеток, так и на накопление астаксантина. Некоторые исследования показали, что оптимальный первоначальный pH/ч.для роста дрожжевых элементов красных фракций равен 6,0, оптимальный pH/ч.для образования астакзантина — 4,0, а оптимальный pH для накопления астакзантина — 5,0 [37]. Таким образом, используя стратегию ph-модуляции, производство астаксантина глютиниса родоторулы было увеличено на 24,1% по сравнению с ферментацией при постоянной pH. путь синтеза астаксантина сложный и требует участия различных субстратов и прекурсоров. Поэтому добавление некоторых веществ в процессе ферментации может также способствовать биосинтезу астаксантина.

For example, Yang Haoyi В то же время- эл. - привет.[42]used red - дрожжи.as the chassis cell and found that the downregulation Соединенные Штаты америкиthe purine, pyrimidine, amino acid synthesis and glycolysis pathways all contributed to - астаксантинbiosynthesis, and the upregulation Соединенные Штаты америкиthe - липид.metabolism Путь к успехуhelped - астаксантинaccumulation. The addition Соединенные Штаты америкиsodium protoporphyrВ случае необходимостиcan inhibit the amino acid metabolic Путь к успехуand increase - астаксантинПроизводство и продажаby 19.2%; the addition Соединенные Штаты америкиmelatonВ случае необходимостиcan promote - липид.metabolism and increase - астаксантинproduction by 30.3%.

На основе анализа метаболических потоков Ru Yi В то же время- эл. - привет.[41]пришли к выводу, что этанол может увеличивать содержание пировата и ацетила коэнзима а в метаболизме родоффических дрожжей, что увеличивает приток в астаксантинский синтез в 2,3 раза, способствуя тем самым астаксантинскому синтезу. В то же время регулировались метаболические узлы градо-кетоглутаровой кислоты и 5- фосфорибозилпирофосфата в астаксантинском синтезе. Было установлено, что добавление 0,5 г/л гравитационной-кетоглутаровой кислоты в среду культуры может увеличить рост красных дрожжевых клеток на 0,4 г/л. Добавление 3 г/л глутамической кислоты в среду увеличило производство астакзантина до 67,9 мг/л, что в 1,7 раза превышает приток контрольной группы.

Хорошо известно, что дрожжи обладают высокой метаболической способностью и могут использовать не только небольшие молекулы, такие как моносакхариды, дисакхариды, полисахариды и органические кислоты, но и простые источники азота и сложные органические смеси. Использование недорогих субстратов из промышленных отходов может эффективно снизить стоимость производства астаксантина, таких как багассе и сладкий сорго багассе (ССБ). Чжуань юань и др. [38]провели исследования по штамму красных фифильных дрожжей при комнатной температуре и уф мутагенезе. Штамм мутантов, полученный после размножения, был ферментирован при температуре 22 °В. : с.C.и 220 r/mВ случае необходимостив течение 96 ч в гидролизате сахарного тростника, а концентрация каротеноидов достигла 88,57 мг/л. После дальнейшего разрушения клеточной стенки с помощью ультразвука и целлюлазы, выход астаксантина достиг 96,01%. Stoklosa В то же время- эл. - привет.[39]использовали сладкий сорго багассе в качестве источника углерода для выращивания дрожжей родоффа с целью получения астаксантина. Однако, поскольку фенолические соединения в дрожжевых ингибитах SSB.родоафф, таким образом, ингибирование SSB красными дрожжевыми рисами было смягчено путем обработки SSB активированным углем и лаксом, и сухой вес клеток бактерий был, наконец, увеличен с 15,6 г/л до 23,6 г/л, а производство астаксантина было увеличено с 9,55 мг/л до 48,9 мг/л.

В синтетической биологии наиболее распространенным способом увеличения содержания целевых продуктов по-прежнему является мутация и метаболическая инженерия. Газсель и др. [40]получили штамм красных дрожжей с высоким содержанием астаксантина путем случайного мутагенеза. На этой основе поток астаксантинового синтеза был дополнительно увеличен за счет выражения гена ликопенциклоза crtYB и генного синтеза астаксантина ASY. Наконец, в ходе эксперимента по усилению ферментации резервуаров максимальное содержание астаксантина достигло 9,7 мг/г DCW. Другое исследование показало, что путь синтеза эргостерола может быть обратным для ингибирования пути MVA. Таким образом, удаление генов, участвующих в синтезе эргостерола, является эффективной стратегией для улучшения производства terpene. Yomamoto В то же время- эл. - привет.[43]последовательно удаляли два гена CYP61, кодирующие C-22 стерол desaturase участвующие в ergosterol biosynthesis, а затем путем ферментации подтвердили, что - астаксантинпроизводство рекомбинатных красных дрожжевых родоторула glutinis было увеличено в 1,4 раза.

Несмотря на то, что красные дрожжи являются одним из шасионных клеток, которые естественным образом производят астаксантин, урожайность дикорастущих красных дрожжей низкая и подвержена деградации, поэтому все еще существуют некоторые проблемы для достижения крупномасштабного промышленного производства. Поэтому выбор высокоурожайных штаммов астаксантина стал основной целью проводимых исследований. В дальнейшем урожайность астаксантина может быть дополнительно увеличена мутагенезом для отбора высокопродуктивных штаммов, метаболической инженерии, в сочетании с оптимизацией формул культуры и условий ферментации.

2.2.2 Saccharomyces cerevisiae

Saccharomyces cerevisiae — первый эукариотический микроорганизм, который прошел секвенирование всего генома. Это легко генетически манипулировать, имеет четкий механизм регулирования экспрессии генов, и зрелые технологии высокой плотности ферментации. В частности, в последние годы разработка ряда инструментов, подходящих для сборки путей в Saccharomyces cerevisiae, сделала его идеальной шасси-клеткой для синтетических биологических исследований [44]. Однако, как и многие искусственные дрожжи, дикие сакчаромициевидные цеговицы не могут синтезировать астаксантин. Она должна быть генетически модифицирована путем введения ключевых генов для астаксантина синтеза для достижения астаксантина синтеза. И - астаксантинсинтезирован в основном в (3- с,3&)#39;- с.Конфигурация. В таблице 2 показан последний прогресс в производстве астаксантина по Saccharomyces cerevisiae.

Crt1. Zи crtпразличных видов оказывают значительное влияние на синтез астаксантина сахаромициевидными мозгами, поэтому совместимость экзогенных генов астаксантина синтеза с клетками шасси имеет особенно важное значение. Ван руижао и др. [45]выразили различные виды crt1. Zи crtпв комбинации Saccharomyces cerevisiae, а также отбирали crtW из Brevundimonas vesicularis и crt1. Zиз AlcaliГены и геныиз 30 комбинаций и crtZ из Alcaligenes, в результате чего производился инженерный штамм SyBE-Sc11807681,0 мг/л астаксантин- да. Скрининг мутантов ключевых генов также является эффективным способом увеличения производства астаксантина.

Например, построение термоядерного фермента может эффективно сократить накопление промежуточных метаболитов. На основе синтеза crtW и crtZ с использованием линкер, девять мутантов синтеза с увеличено - астаксантинпроизводства были получены путем прямой эволюции. Сочетание этих доминирующих мутантов привело к образованию высокопроизводительного штамма astaxanthin дрожжевых составов L95S+1206- L,который в 3,8 раза превышает содержание astaxanthin в контрольном штамме [49-50].

In order to improve the efficiency - о-каротинconversion to astaxanthin, Zhou Pingping В то же время- эл. - привет.[46]obtained superior yeast mutants Соединенные Штаты америкиcrtZ and crtW До конца годаdirected coevolution, and at the same time introduced a Gal4M9-based temperature-responsive regulatory В системе организации объединенных наций[51], decoupling Astaxanthin синтезИз российской федерацииcell growth coupling, i.e., the temperature was kept at 30 °C. C.in the first phase to allow rapid cell growth; when the cells entered the log phase, the culture temperature was changed to 24 °C to promote astaxanthin synthesis; finally, 235 mg/1. Оastaxanthin was synthesized through two-phase high-density fermentation.

Поскольку астаксантин жирорастворим, это противоречит ограниченной липидной емкости хранения таких модельных микроорганизмов, как Saccharomyces cerevisiae [52]. Таким образом, содержание астаксантина может быть увеличено путем содействия синтезу липидов для расширения липидных капелей и обеспечения большего пространства для хранения астаксантина синтеза. Поэтому ли мин и др. использовали трехфункциональную систему CRISPB. Р.для проверки библиотеки генов, связанных с липидным метаболизмом [47, 53], и умеренно усовершенствовали уровни выражения опиа3 и hrd1 для содействия синтезу липидов. После балансирования экспрессии crtZ и crtW содержание астаксантина было увеличено до 10,21 мг/г DCW. Наконец, благодаря сочетанию пространственного регулирования липидного синтеза и временного регулирования температурной реакции, в процессе ферментации fed- партии было синтезировано 446,4 мг/л астаксантина.

2.2.3 липолитные дрожжи

Липолитические дрожжи является одним из наиболее широко изученных и используемых нетрадиционные дрожжи. Astaxanthin производства липолитных дрожжей в основном в (3- с,3&.#39;- с.Конфигурация. По сравнению с обычными дрожжами Saccharomyces cerevisiae, липолитические дрожжи имеют множество уникальных биохимических и метаболических характеристик. Это типичный дрожжи типа I- я,который является аэробной бактерией, которая в основном не производит этанол, который токсичен для клеток [54]. Он также имеет эффективный ацетиловый коэнзим метаболический путь и высокий цикл потока трикарбоксиловой кислоты в клетках, а накопление липидов может достигать 77%. Это делает его идеальным для промышленного производства органических кислот, липидов и их производных [55-57]. Кроме того, Y. Организация < < липолитика > >может расти при более низком pH и более высоком осмотическом давлении и может использовать различные источники углерода, белки и гидрофобные субстраты, такие как сахар, углеводороды, спирты, липиды и т.д. Поэтому она не является строгой с точки зрения условий роста и может расти в различных экологических условиях, которые имеют хорошие перспективы промышленного применения [58]. В таблице 3 показан последний прогресс в производстве астаксантина по Y. lipolytica.

The astaxanthin bioСинтетические продукты (синтетические продукты)Гены и геныИз российской федерацииdifferent sources are still the key factors affecting the astaxanthin production in Y. lipolytica. Kildegaard В то же время- эл. - привет.[59]expressed the crtW from 1. Паракокусsp. N81106 and the crtZ from - п.ananatis in a Высокая урожайностьβ-carotene-producing Y. Организация < < липолитика > >strain, and optimized the copy number Соединенные Штаты америкиthe relevant genes copies were optimized, and 3.5 mg/g DCW (54.6 mg/L) astaxanthin was obtained. In another study, three pairs Соединенные Штаты америкиcrtW and crtZ from different sources were expressed, and it was pointed out that HpКВПТ - - категория специалистовand HpЦРТЗ (CrtZ)from Haematococcus pluvialis had the strongest activity in converting β-carotene to astaxanthin [65]. Through modular assembly Соединенные Штаты америкиthe relevant genes by the RIAD-RIDD. День рождения.Д.short peptide [62], and at the same time increasing the copy number to 20, the astaxanthin production Соединенные Штаты америкиrecombinant lipase yeast reached 3.3 g/L under batch culture conditions сa supplement, which is the highest level - астаксантинаsynthesis in a На микробной основеchassis to date.

Большинство метаболических методов регулирования производства химических веществ с высокой добавленной стоимостью в микроорганизмах используют цитоплазму в качестве реакционного сосуда [66]. Однако изоляция ферментов и субстратов, а также метаболических межштальков часто препятствует эффективному синтезу целевых соединений в цитоплазме. Регионализация органических соединений в эукариотических клетках позволяет решить эту проблему. Например, Ma Yongshuo В то же время- эл. - привет.[60]не только ускоряли преобразование грау-каротина в астаксантин, но и значительно сократили накопление каротеноидных промежуточных веществ путем локализации пути синтеза астаксантина в эндоплазматических ретикумах и пероксисомах, тем самым увеличивая производство астаксантина в 141 раз. В фед-пакетной ферментации 858 мг/л астаксантина можно синтезировать.

Астаксантин является жирорастворимым веществом terpene, и его сильная гидрофобия приводит к низкой биодоступности. Добавление внешней фазы масла может способствовать растворению астаксантина и предотвратить образование кристаллов, тем самым увеличивая выход астаксантина. Юзбашева и др. [61]использовали модульный инженерный подход и технологию синтеза, построили рекомбинированный липсодефицитный штамм Saccharomyces cerevisiae с производством астаксантина 587,3 мг/л, а производство астаксантина может быть увеличено до 973,4 мг/л с добавлением нефтяного покрытия.

Гликозиляция также может значительно увеличитьРастворимость астаксантина в воде, тем самым улучшая его биодоступность, стабильность света и биологическую активность [67 — 68]. Чэнь цзин и др. [63]создали производящий астаксантин штамм растений, выразив гены каротеноидов 4- гидроксид-грац-циклодегидрогеназа (ГБФД) и каротеноид-грац-циклодегидрогеназа (ГБФД) из летнего периода мариголда в пичиа пасторис, а урожайность астаксантина достигла 3,46 мг/л. На этой основе, выражая ген zeaxanthin glycosyltransferase (CrtX) Pantoea ananatis (P. ananatis ATCC 19321), был успешно построен гликозилированный путь синтеза астаксантина, и выход достиг 1,47 мг/л, что является самым высоким выходом гликозилированного астаксантина, произведенного микроорганизмами, о которых сообщалось до настоящего времени.

2.2.4 - клайверомисесmarxianus

В последние годы клюверомицис марксиан широко используется в синтезе натуральных продуктов. По сравнению с другими традиционными дрожжами, он имеет следующие преимущества: дрожжи Maxicruve могут увеличить производство клеток, обеспечивая избыток источников углерода [69]; Некоторые дрожжи Maxicruve устойчивы к высоким температурам и могут ферментировать при температурах от 25 до 52 °C [70]; Он обладает соответствующей гликозилацией и сильным сигналом пептидов, а также более высокой способностью к секреции, чем Saccharomyces cerevisiae [71].

В настоящее время, на основе метаболических методов инженерии, Maxicruve дрожи был использован в качестве шаровой клетки для синтеза астаксантин, и астаксантин синтезирован в основном в (3S, 3'S. Конфигурация. Например, лин юйжу и др. [72]построили астаксантин гетерологический синтез дрожжей Maxicruve для достижения астаксантина синтеза с использованием глюкозы. Они интегрировали гены Hpchyb и BKT от Haematococcus pluvialis в геном Saccharomyces cerevisiae и увеличили их номер копии, чтобы получить четыре модифицированных штаммов. Для дальнейшего повышения урожайности в гене Hpchyb были введены локальные мутации с целью повышения эффективности фермента и предотвращения вызываемой ubiquitina деградации гетерологических белков.

Это в конечном итоге привело к синтезу 9972 μg/g DCW astaxanthin в 5 л ферментер. В другом исследовании использование xylose- индуцируемого промоутера и системы регулирования температуры позволило отделить рост клеток от синтеза продуктов. Дальнейшая оптимизация метаболических путей и условий ферментации привела к образованию астаксантина 56,8 мг/л [73]. Несмотря на то, что сообщений об использовании дрожжей Maxicruvin в качестве шасси для производства астаксантина немного, его уникальные преимущества обеспечивают новую техническую опциюНа микробной основе3. Ферментацияand synthesis Соединенные Штаты америкиastaxanthin.

2.2.5 другие дрожжи

В дополнение к типичным искусственным дрожжам, упомянутым выше, есть также относительно мало сообщений о производстве астаксантина дрожжами, такими как родоторула мучилагиноса и морских красных дрожжей. Rhodotorula mucilaginosa является красный дрожжи, содержащие масло и в основном используется для производства грава-каротина. Команда получила штамм производимой astaxanthin Rhodotorula mucilaginosa wg -31 через мутагенез скрининга, и, наконец, оптимизировала условия ферментации для достижения astaxanthin содержание 7,41 μg/m- я.Морские красные дрожжи является тип одноклеточных дрожжей, которые естественно существуют в океане. Он обладает хорошей переносимостью соли и производит каротеноиды, главным образом астаксантин. Штамм морских глубоководных красных дрожжей S8 с высоким производством каротеноидов был получен ультрафиолетовым мутагенезом, чтобы получить штамм ST5, и за счет оптимизации условий ферментации, astaxanthin содержание может достигать 520 μg/g.

2.3 бактерии

Due to the low production - астаксантинаby bacteria, research on astaxanthin has mainly focused on algae and fungi at home and abroad, and relatively little research has been done on astaxanthin synthesis by bacteria. Although the astaxanthin content Соединенные Штаты америкиmost bacteria is much lower than that Соединенные Штаты америкиsome algae and fungi, the introduction Соединенные Штаты америкиgenes related to astaxanthin synthesis into bacteria [20]can greatly increase astaxanthin production. At the same time, compared сfungi and algae, the use Соединенные Штаты америкиbacterial fermentation makes it easier to extract astaxanthin, which can greatly simplify the subsequent extraction process. In particular, Gram-negative bacteria have thin and easily broken cell walls, which facilitates the extraction Соединенные Штаты америкиastaxanthin from the cells. Therefore, the production Соединенные Штаты америкиastaxanthin by bacterial fermentation can greatly reduce the production cost Соединенные Штаты америкиastaxanthin and is Соединенные Штаты америкиgreat significance дляfuture industrial production.

2.3.1 эшерихия коли

Организация < < эшерихия > >coli-это грам-отрицательная, возможно анаэробная бактерия. Это легко культивировать, просто в эксплуатации, недорого, и имеет зрелые инструменты молекулярной генетической модификации. Он стал одним из лучших носителей метаболической инженерии и синтетической биологии. В качестве штамма, не производящего каротеноид, он может синтезировать прекурсоры соединения терпеня IPP и DMAPP по пути MEP. В wild-type E. 1. Колисинтаза FPP может быть произведена в vivo, который может конденсировать IPP и DMAPP для производства GPP и FP- п,но не хватает ферментов, которые превращают FPP в окончательный астаксантин. Поэтому, вводя экзогенный модуль синтеза астаксантина в E. coli, относительно легко синтезировать астаксантин в E. coli, а синтезированный астаксантин в основном находится в левораторе (3S, 3&)#39;S. Конфигурация. В таблице 4 показан последний прогресс в производстве кишечной палочки astaxanthin.

Выявление ключевых генов в метаболическом синтезе астаксантина позволило создать искусственные бактерии с высоким уровнем производства астаксантина. Jeong В то же время- эл. - привет.[75]использовали метод MEP от Kocuria gwangallensis для совместного экспрессирования DXS, ispC, isp- д,isp- э,ispF, isp- г,ispH и idi, а гены, задействованные в преобразовании астакзантонного синтеза (crt- я,crt- э,crtY- B,crtЧ, ч, ч.crtZ), были совместно выражены в E. 1. Колидля увеличения производства астакзантина. Этот разработанный E. coli, содержащий гены немевалонатного пути, смог синтезировать 1100 μg/g DCW астакзантина. Гены lyt- B,ispA/данные отсутствуют.и idi изопреноидного пути необходимы для синтеза IP- п,DMAPP и FPP. Однако, поскольку кишечника сама по себе может синтезировать эти прекурсоры только для удовлетворения собственных потребностей роста и не может направлять их на путь астаксантинского синтеза, урожайность астаксантина является слишком низкой. Поэтому ли и др. [76]перегрузили литб, испа и idi в E. coli, неся гены astaxanthin synthesis (crtI, crtE, crtY- B,crtW, crtZ), и в конечном итоге создали E. 1. Колидля синтеза 1200 μg/g DCW astaxanthin. Скрининг на наличие crtW и crtZ из различных источников по-прежнему является одним из обычных методов улучшения производства астаксантина.

Например, Lu В то же время- эл. - привет.[78]сравнили crtW и crtZ из различных источников и пришли к выводу, что crtW из Brevundimonas sp. SD212 и crtZ из Pantoea agglomerans являются наилучшим сочетанием для производства astaxanthin. Балансируя экспрессионную активность crtW и crt- Z,был построен штамм кишечной палочки asta1, который не содержит ни плазмид, ни антибиотичный маркер. Без добавления индуктора, рекомбинантный штамм синтезировал 96,6% каротеноидов как астаксантин, достигнув содержания 7,4 мг/г DCW. У юаньцин и др. [79]проверили 9 crtZ и crtW из различных источников и ввели их в модифицированную кишечную палочку с высоким содержанием грационного каротина, а содержание astaxanthin достигло 0,49-8,07 мг/л. Впоследствии, crtZ и crtW были расплавлены с использованием оптимизированного пептида линкер, что еще больше увеличило производство astaxanthin на 127,6%.

Li Shun В то же время- эл. - привет.[80]expressed the HpCHу- генная инженерияfrom Haematococcus pluvialis and the CrBKT gene from Chlamydomonas reinhardtii in Организация < < эшерихия > >1. Колиby selecting the GadE promoter. The final Проектирование и ремонт- штаммwas able to synthesize 24.16 mg/L astaxanthin, which is 40 times higher than the original strain. This shows that selecting the appropriate gene elements дляastaxanthin synthesis can significantly affect the Выражение на английском языкеlevel of astaxanthin.

Увеличение количества копий ключевых генов является простым, прямым и эффективным способом увеличения производства астаксантина. Например, в E. 1. Колиузкие места недостаточного накопления астаксантина были устранены путем увеличения количества экземпляров crtY- B,а также путем регулирования выражения лица промоутера, в условиях ферментации fed- партии конечное производство астаксантина достигло 1,18 г/л [20].

Li Di В то же время- эл. - привет.[82]first performed random mutations on crtW to increase В его рамкахactivity in converting - о, каротинto astaxanthin, and then Увеличение объема ресурсовthe copy number of crtW and crtZ by the Cre-loxP Метод проведения испытанияto construct an E. 1. Колиstrain сhigh astaxanthin production. Finally, by fed-batch fermentation, the astaxanthin production reached 0.88 g/L [84]. Zhang Meng В то же время- эл. - привет.[83]found that co-expression of crtZ from 1. Паракокусsp. PC1 and crtZ from Pantoea agglomerans can increase the accumulation of astaxanthin and intermediates. Finally, an Проектирование и ремонтE. coli strain an Проектирование и ремонтE. coli strain сtwo copies of PAcrtZ and one copy of PCcrt- "з".After 70 h of fed-batch fermentation, astaxanthin production reached 1.82 g/L.

Кроме того, для достижения цели увеличения производства астаксантина могут также использоваться стратегии повышения метаболического пути астаксантина с помощью нетрадиционных технических средств. Например, путем совместного выражения генов-партнеров ApcpnA и ApcpnB в E. coli, выражающих astaxanthin синтез генов (crtI, crtE, crtY- B,crtW, crtZ), конечные инженерии могут производить 890 μg/g DCW astaxanthin [74]. Лемут и др. [77]создали первую без плазмиды E. coli и устойчиво интегрировали гены астаксантинского биосинтеза в хромосому E. coli с помощью технологии гравитационной рекомбинации, так что путь указывает только на астаксантинский синтез. Конечное содержание астаксантина достигло 1,4 мг/г DCW [85]. Технология на основе морфологии и окислительного стресса также является эффективной стратегией улучшения астаксантина синтеза в кишечной палочной палочке. Например, удаление генов, связанных с морфологией и мембранами, может привести к увеличению и увеличению клеток, что, в свою очередь, увеличивает накопление астаксантина.

Окислительный стресс означает дисбаланс между производством реактивных видов кислорода и антиоксидантов в клетках, который приводит к повреждению клеток. Таким образом, удаление генов, связанных с окислительным стрессом, может повысить уровень реактивного кислорода в клетках для защиты клеток [81]. В то же время, клеточная морфология все еще будет меняться после повышения температуры, и уровень реактивных видов кислорода также будет выше. Таким образом, благодаря созданию дополнительной системы экспрессии плазмидов, чувствительных к температуре, содержание астаксантина в этом штамме кишечной кишки может быть в конечном итоге увеличено до 11,92 мг/г DCW. Кроме того, стратегии локализации ферментов могут также использоваться для увеличения производства астаксантина в искусственной кишечной палочке. Например, е Lijun В то же время- эл. - привет.[86-88] использовали метку локализации E. coli для локализации диоксигеназы диоксигеназы грава-каротина PhCCD1 в различных камерах и обнаружили, что ее каталитическая эффективность является оптимальной на мембране. И наконец, после дозировки CrtW и CrtZ до мембраны клеток E. coli через белки GlpF, производство астаксинтина увеличилось на 215,4%.

2.3.2 паракокус

Паракокус (Paracoccus sp.) — аэробная, грам-отрицательная бактерия, содержащая астаксинтин и другие редкие каротеноиды в клетках. Вместе с тем имеется мало научных работ по астаксантинскому синтезу в паракокусах [89 — 90]. Естественные каротеноиды обычно существуют в конфигурации е, которая менее биодоступна для людей и животных. "Z- изомеризация" является эффективным средством повышения их биодоступности [91-93]. Например, Honda В то же время- эл. - привет.[94]использовали коколитопор в качестве шасси для изомерирования каротеноидов, таких как астаксантин, в условиях подкритического состояния воды (нагревание воды выше точки кипения ниже критической точки и контроль давления в системе для поддержания воды в жидком состоянии). Было установлено, что добавление этанола при нагревании и давлении значительно повысило эффективность "z-изомеризации". При сжатых условиях значительно повысилась эффективность "z-изомеризации". Наконец, после 30 минут подкритической обработки воды, замедляющей разложение каротеноидов, был получен астаксантин с коэффициентом "z-изомеризации" более 50%.

Соответствующее регулирование состава культуры и параметров при ферментации является эффективной стратегией увеличения производства астаксантина. Добавление в культуру трикарбоксиловой кислоты может способствовать увеличению предложения прекурсоров. Активность ключевых ферментов также может быть повышена путем добавления кофакторов для ключевых ферментов в астаксантинном синтезе (сульфат железа, аскорбиновая кислота, NADP- г,атф и 2- оксоглютарат), тем самым увеличивая накопление астаксантина. Например, при производстве astaxanthin в шасси Bacillus subtilis активность фермента Crt может быть увеличена путем добавления 5 ммоль/л малата и 1 ммоль/л сульфата черной металлургии, увеличив производство astaxanthin со 177 до 3750ммоль/л [95]. Хотя производство астаксантина самими бактериями ниже, чем производство водорослей и дрожжей, он обеспечивает альтернативные генные элементы для последующего строительства и модификации инженерных штаммов.

2.3.3 прочие бактерии

There are relatively few bacteria that can produce astaxanthin, and the yields are relatively low. The most studied is Организация < < эшерихия > >coli as a chassis cell. In addition, Mycobacterium lacticola and Bevibacterium can also produce astaxanthin. However, Mycobacterium lacticola only produces astaxanthin on hydrocarbon media and does not produce astaxanthin on nutrient media. Bevibacterium grows in oil, and at the end of the fermentation, the biomass is only 3 g/- L,and the astaxanthin content is even lower.

Подводя итог, е. коли в настоящее время является идеальным шасси клетки для астаксантин производства среди бактерий.

3 процесс экстракции астаксантина

Астаксантин является внутриклеточным продуктом, поэтому извлечение астаксантина из микроорганизмов подразделяется на два этапа: разрушение клеток и астаксантин сбор. По сравнению с бактериями клеточные стенки водорослей и дрожжей жесткие и толстые, и не легко сломать, что делает извлечение продукта очень трудно. Таким образом, основной упор при экстракции астаксантина делается на разрушение клеточной стенки [96].

Традиционные методы разрушения клеточных стенок в основном включают физические, химические и ферментативные методы [97]. Физические методы включают механическое дробление, ультразвуковое дробление и экстракцию сверхкритической жидкости. Механическое дробление является простым в эксплуатации, и клеточные стенки разрываются механическим возбуждением, тем самым высвобождая астаксантин внутри клеток. Однако механическое дробление может вызывать высокие температуры в некоторых местах, что в определенной степени может повредить астаксантин. Хотя ультразвуковое дробление может эффективно сломать клеточные стенки в растворе, по мере увеличения интенсивности и продолжительности ультразвукового действия увеличивается производство высокоокисляющих свободных радикалов, что приводит к снижению коэффициента экстракции астаксантина. Сверхкритическая экстракция жидкости является наиболее эффективным методом экстракции различных видов водорослей в последние годы. По сравнению с традиционными жидкими растворителями он обладает некоторыми уникальными физическими и химическими свойствами, такими как высокая диффузивность, высокая сжимаемость, низкое поверхностное натяжение, низкая вязкость и легкое проникновение клеточных стенок, что повышает эффективность извлечения продукта.

По химическому оружиюmethods mainly include Органический пероксид (органический пероксид)solvent extraction, acid-base treatment, and dimethyl sulfoxide (DMSO) methods. Astaxanthin is a fat-soluble natural product, so the choice of organic solvent must take into account whether astaxanthin is soluble and the polarity of the solvent. For example, Xing Tao В то же время- эл. - привет.[99]used ethyl acetate as an organic solvent to extract astaxanthin from Haematococcus pluvialis, and the final yield was 98.51%. Although the use of organic 3. Растворителиto extract astaxanthin has a high yield, the downside is that many solvents are toxic and may have a damaging effect on astaxanthin. Acid-base treatment involves the use of С большим размеромquantities of acid and alkali reagents, which may not only damage astaxanthin but also cause В случае необходимостиenvironmental pollution. Dimethyl sulfoxide is a polar solvent that is soluble in both water and organic solvents. It is a commonly used solvent дляbreaking cell walls in the laboratory, as it can quickly and efficiently break the cell walls of bacteria without significantly affecting astaxanthin [100]. When mixed сacetone in the right proportions, it can also extract astaxanthin relatively completely [101].

Ферзиматическая экстракция астаксантина имеет преимущества мягких условий, низкого энергопотребления и короткого времени переработки. Он может не только быстро и эффективно разрушать клеточные стенки и выпускать астакзантин из клеток, но и подавлять клеточную активность для предотвращения денатурации внутриклеточных веществ [102]. Таким образом, астаксантин, извлекаемый ферзиматическим методом, является более стабильным, чем тот, который получают другие методы. Например, грау-глюканаза может гидролизировать грау-глюкан в клеточной стенке, что может предотвратить выброс астаксантина из бактерий и уменьшить потери [100]. Тем не менее, ферментативный метод требует большого количества фермента, что, несомненно, увеличивает производственные затраты. В то же время, поскольку ферменты являются белками по природе, они подвержены денатурации и поэтому не подходят для крупномасштабной астаксантинной экстракции.

Поскольку astaxanthin является сильным антиоксидантом, если он подвергается воздействию воздуха в течение длительного времени, кислород в воздухе будет реагировать с astaxanthin и привести к потере его антиоксидантной способности. Поэтому одним из этапов, который в настоящее время не применяется в промышленном производстве, является также процесс добычи без кислорода (наполненный азотом). Этот метод предполагает наполнение инертным газом или азотом для обеспечения свободной от кислорода среды для извлечения органических растворителей, что защищает его деятельность и значительно улучшает антиоксидантную активность астаксантина.

4 резюме и перспективы

В связи с широким применением астаксантина в области продовольствия, медицины и косметики ожидается рост рыночного спроса на астаксантин. В настоящее время химический синтез по-прежнему является основным методом производства астаксантина, но из-за ограничений химически синтезированного астаксантина страны во всем мире становятся все более строгими в управлении химическим синтезом астаксантина. Однако астаксантин, добываемый непосредственно из природных ресурсов, вряд ли может удовлетворить потребительский спрос.

Therefore, the industrial production of astaxanthin through На микробной основеfermentation provides a promising option. Yeast is the most promising chassis cell due to its advantages such as a broad substrate spectrum, easy growth and culture, short fermentation cycle, and relatively mature genetic modification tools. Among them, Rhodopseudomonas palustris is capable of naturally producing astaxanthin, grows fast, and can utilize a variety of carbon sources; 3. Ярровияlipolytica has high acetyl co1. ФерментA flux and tricarboxylic acid cycle metabolic pathway, and can grow at lower pH and high osmotic pressure; Saccharomyces cerevisiae is easy to genetically manipulate, has a clear mechanism дляregulating gene expression, and mature high-density fermentation technology; and Pichia pastoris can withstand high temperatures, has appropriate glycosylation, and strong signal peptides.

With the rapid development of synthetic biology, Содержание белка в кровиengineering, metabolic Инженерно-технические работыand fermentation engineering, many microorganisms have been used as chassis cells to produce astaxanthin. However, despite the significant breakthroughs in astaxanthin biosynthesis, проблемы сохраняются:

Во-первых, микроорганизмы, которые могут естественным образом производить астаксентин, такие как родоторула глутини и гематококковой плувиалис, по-прежнему имеют проблемы с низкой урожайностью, строгими культурными условиями и высокой стоимостью. Для решения этой проблемы будущие исследования должны быть направлены на выращивание и скрининг высокоурожайных штаммов и оптимизацию культурных условий для повышения урожайности и снижения затрат.

Во-вторых, из-за сложного анаболического пути астакзантинового синтеза сохраняются такие проблемы, как низкая урожайность метаболической инженерии модельных организмов, как Организация < < эшерихия > >coli, Lipomyces starkeyi, Saccharomyces cerevisiae и др. В этой связи для повышения эффективности синтеза астаксантина в клетках шасси (рис. 4) могут использоваться следующие стратегии: (1) оптимизация и модификация метаболического пути два. Например, усеченные ТМГ (усеченные 500 аминокислотами в n-терминале), как было показано, являются ключевым геном в пути два. Она может эффективно предотвращать собственную деградацию, тем самым увеличивая производство каротеноидов.

(2) Замена промоутеров различных сильных сторон улучшает каталитическое согласование метаболических путей. Например, в гене для биосинтеза β-carotene сильный промоутер PTEF. F.заменил других слабых промоутеров, значительно увеличив ихПроизводство грау-каротинаВ ярровии липолитика [103].

Увеличение числа копий ключевых генов для улучшения метаболического потока шагов ограничения скорости. Например, при увеличении количества экземпляров crtYB с 1 до 4 производство грава-каротина увеличилось на 76% [104].

Модульная сборка ключевых генов с использованием различных линкеров или коротких пептидов для улучшения метаболического потока углерода, тем самым повышая потенцию астаксантина.

⑤Locate in different 3. Подклеточные устройства1. Организация Объединенных Нацийto increase the storage space дляastaxanthin. - каротеноидыare generally stored in the cell membrane, which can reduce the fluidity of the cell - на мембранеand cause cell death. Localizing the metabolic pathway of - каротеноидыin subcellular organelles can reduce metabolic disorders metabolism disorder. At the same time, it can also expand the storage space of carotenoids in the cell, reducing its toxicity to the cell. For example, the endoplasmic reticulum, mitochondria, and peroxisomes in eukaryotic cells have unique physical environments that provide favorable conditions дляthe synthesis of carotenoids.

Оптимизация состояния протезирования является наиболее распространенным и эффективным способом увеличения производства астаксантина. Например, оптимизация среды с использованием различных источников углерода и азота, различных коэффициентов углерода и азота, значений pH и регулирования температуры.

Следует также отметить, что, хотя астаксантин, получаемый с помощью биосинтеза, имеет гораздо большую практическую ценность, чем химический синтез, его применение по-прежнему ограничивается законами и правилами многих стран. Например, улх США запрещает использование астаксантина в качестве пищевой добавки, поскольку длительное нагревание астаксантина может привести к образованию канцерогенов. Франция четко оговаривает, что астаксантин может использоваться только в конкретных медицинских продуктах и косметике. Поэтому предстоит пройти еще долгий путь, прежде чем астаксантин может быть получен путем микробной ферментации.

Ссылка:

[1]   - рицзарди. - н, - пеццузли. - L,  На острове самоа C,  В то же время - эл. - привет. Природный астаксантин is  a  green  Антиоксидант (антиоксидант) able  to   Противодействие со стороны Окисление липидов и ферроптотическая смерть клеток [J]. Международный журнал молекулярных наук, 2022, 23(23): 15137.

[2]   TURUJMAN С. SA.,WAMEB. Р.W G, Вэй (WEI)B. Р.R, В то же время- эл. - привет.Быстрая жидкая хроматография Метод проведения испытания to   Отличить одно от другого - дикая природа  - лосось, лосось.  На основе аквакультуры - лосось, лосось. Федеральный резервный фонд synthetic  Astaxanthin [J]. Журнал по теме Из AOAC INTERNATIONA- L,1997, 80(3): 622-632.

[3]  CAI. Я- джей,YOU Z N. современное состояние ферментативного производства астаксантина [J]. Наука о еде, 2015, 36(23): 358 — 366.

[4]   JIANG. Г.S, TONG. Г.С. SM. достижения в astaxanthin 2. Биосинтезв Haematococcus pluvialis[J]. Китайский журнал (english) Биотехнология, 2019, 35(6): 988-997.

[5]   Юань (Китай)  - J.  - п,  Чэнь (Китай)  - ф.  Хроматография (хроматография)  Прекращение службы  И очистки воды   of    Транс-астаксантин   from    the    Выдержки из статьи   Haematococcus Плювиалис [J].Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии, 1998, 46(8): 3371-3375.

[6]  Ван дж., чжан к., ли х., и др. Прогресс в исследованиях метаболизма  Инженерно-технические работы  3. Разведение животных  of  Высокая урожайность  astaxanthinproduction Xanthophyllomyces  Dendrorhous [J]. 1. Химия * * * * Биоинженерия, 2022, 39(10): 1-5.

[7]   Кохандель з, фархонде т, ашнер м и др. Противовоспалительное действие астаксантина и его применение при лечении различных заболеваний [J]. Биомедицина и Фармакотерапия, 2022, 145: 112179.

[8]   Цзин и у, ван и икс, чжоу Д W, и др. Достижения в синтезе трех типичных тетратероидов, включая грау-каротин, ликопен and  Astaxanthin [J]. B. биотехнология - авансы, 2022, 61:108033.

[9]   Шмидт I, шеве х, гассел с и др. Биотехнологическое производство    of     astaxanthin     with     - фаффия.    Rhodozyma/Xanthophyllomyces dendrorhous[J]. Прикладная микробиология и биотехнология, 2011, 89(3): 555 — 571.

[10]   MIAO L - Q,- mX X X XX X XX X X- г,1. ЛиС. SZ и др. Биосинтез и промышленное применение Из астаксантина [J]. Журнал по теме В области сельского хозяйства Наука и техника, 2023 г.,25(3): 21-29.

[11]   - лигнелл. A.  Лекарственные средства для Повышение эффективности работы of  Продолжительность поездки Функции мышц или лечение мышечных расстройств или заболеваний: US6245818[P].2001-06-12.

[12]   1. ЛиX - джей,ZHU W, JIАнг (англ.)W, В то же время- эл. - привет.Влияние природного астаксантина на качество мяса уток и окислительную устойчивость липидов [J]. Зерновые и зерновые Кормовая промышленность, 2012(6): 43-45.

[13]   - мусаги.  C  - с, Г-н перейра - J.  F  - B, Дуфосс (DUFOSSE) - L, В то же время Al. Достижения и тенденции в биотехнологическом производстве натуральных астакзантина фаффией родозимой дрожжей [J]. Критические обзоры в области науки о продовольствии и питания, 2023, 63(13): 1862-1876.

[14]   В. хусейн G,  Санкава у, - иди сюда. - г,и др. Астаксантин, каротеноид with  potential  in  human  В области здравоохранения and  Питание [J]. Журнал натуральных продуктов, 2006, 69(3): 443-449.

[15]   13 ч. 00 м.   - джей,   Хржановский (Россия)  - джи. - привет.  - микроводоросли   as    A/источник информации of  valuable - фенолическая болезнь По соединениям и соединениям and  Каротеноиды [J]. Молекулы, 2022, 27(24): 8852.

[16]   - в парке  С. S - Y, - бинкли. B. Р. - м, Ким ким ким W  - джей,  В то же время - эл. - привет. Метаболическая инженерия  of  Организация < < эшерихия > >  coli   для На высоком уровне  astaxanthin production  with  high  Производительность [J]. 3. Метаболизм Инжиниринг, 2018 год,49: 105 — 115.

[17]   Китай т. Carotenoids  in  the  Регион тихого океана salmon  Во время морской перевозки Период [J]. Сравнительные данные Биохимия (биохимия) and  Часть B: сравнительная биохимия, 1984 год, 78(4): 859-862.

[18]   Чжан СИ кью,   Чэнь X (Чэнь (Китай)X) И X тоже.   H    P.    Биосинтез: последние достижения, проблемы и коммерциализация   Перспективы [J].  Применение на практике   1. Микробиология   and  Биотехнология, 2020 год,104(13): 5725-5737.

[19]   1. Ли - джей, Чжу д. - L,NIU - J.F, и др. Экономическая оценка астаксантина   production    by     large    По шкале взносов   Выращивание сельскохозяйственных культур    Haematococcus pluvialis[J]. B. биотехнология - авансы, 2011, 29(6): 568 — 574.

[20]    - гонг! Z  - к, 13. Ван H  - L, Г-н тан - J. - L, et  al.  Скоординированное выражение мнений of  astaxanthin  2. Биосинтез genes  для Улучшен астаксантин  production   in   Escherichia   Coli [J].  Журнал по теме  Химия сельского хозяйства и пищевой промышленности, 2020, 68(50): 14917-14927.

[21]   Рани а, сайни к, баст ф и др. Микроорганизмы: потенциальный источник Из биоактивных молекул для antioxidant  Применение [J]. Молекулы, 2021, 26(4): 1142.

[22]   3. < < сайни > > B. Р. - к, В чем дело? у S.  Ii. Прогресс in  microbial  Производство каротиноидов [J]. По индийскому языку Журнал по теме of  - микробиология, 2017 год, 57(1):129-130.

[23]   С вами V. Категория V - м, Организация < < бхатия > > S  - к. Путь к успеху engineering  strategies  Для производства of  В целях развития  carotenoids  in  microbial  Ведущий [J]. Биотехнологические письма, 2012 год,34(8): 1405-1414.

[24]   Чжу X - Y,Мэн C - X,SUN F - джей,et al. Устойчивое производство астаксантина в микроорганизмах: прошлое, настоящее и будущее [J]. В важнейших проблемных областях Отзывы о компании in  - продукты питания Наука и техника and  - питание, 2022 год:

1-17.

[25]   Чжоу д W, ян х - Y,ван х х, И др. Биосинтез астаксантина с использованием промышленных дрожжей [J]. Биотопливо, биопродукты и т.д Биорефинг, 2023, 17(3): 602-615.

[26]   Чжан с, сюй х, чжу к ф и др. Научно-исследовательский прогресс в производстве  of  astaxanthin   by   microbial   Метод [J].  Китай пивоварение, 2021, 40(10): 29-35.

[27]   Герин м, хантли м е, олайзола м. гематококк астаксантин: Применение программного обеспечения for  human  В области здравоохранения and  Питание [J]. Тенденции в области биотехнологии, 2003 год, 21(5): 210-216.

[28]   Чэн (Китай) - X, - риордон. - джей, Нгуен (Китай) - B, et  Al. Гидротермальные нарушения of algae  cells  for  astaxanthin  Извлечение [J]. Зеленая химия, 2017, 19(1): 106 — 111.

[29]    Ранджбар р, инуэ р, кацуда т и др. Высокоэффективное производство  of  astaxanthin   in   an   Воздушные перевозки  Фотобиореактор [J]. Журнал по теме  of  3. Бионаучные науки  and   Биоинженерия,  2008 год,  106(2):

204-207.

[30]    13. Ван - X,MOU - J.- г,QIN Z H и др. Добавки с cr-gr24 облегчает Накопление биомассы и астаксантина В два последовательных этапа Культивирование гематококка плювиалиса [J]. Журнал по теме  of  Химия сельского хозяйства и пищевой промышленности, 2022, 70(15): 4677-4689.

[31]    Хуан у, лю у, сан у у и др. Эффективное извлечение астаксантина из мокрого гематококкового плувиалиса с использованием переключаемой гидрофилистии  Растворители [J].  Организация < < акг > >  По устойчивому развитию  1. Химия   * * * * Инжиниринг, 2018, 6(2): 1560 — 1563.

[32]   Рен и й, Дэн джей кью, хуан джей C, и др. С помощью зеленого алга гематококка  pluvialis    for    astaxanthin    and    - липид.   Совместное производство: достижения и перспективы [J]. Технология биоресурсов, 2021, 340: 125736.

[33]   - гассел?  S,  - брайтенбах.  - джей, - сандман. - джи. - привет. Генная инженерия  of  the   Полный комплект документов  - каротеноид  pathway   На пути к укреплению    astaxanthin     1. Формирование вооруженных сил    in    Ксантофиллипс дендрор Начинаются с s from  a  high-yield  Мутант [J]. Прикладная микробиология и биотехнология, 2014, 98(1): 345— 350.

[34]   Чи с, он у, рен джей и др. Перегрузка бифункционального фермента, Дус, Улучшает качество astaxanthin  synthesis  through  2. Два пути - в фаффии Родозима [J]. На микробной основе 1. Ячейка Заводы, 2015, 14: 90.

[35]   Производство герваси т, сантини а, далиу п, и др - рост производства; on  A низкая стоимость субстрата [J]. Агролесомелиорационные системы, 2020, 94(4): 1229 — 1234.

[36]   - стоклоса.R - джей,- джонстон.D. Д.Б, нгием нP. использование сладкого сока сорго для производства астаксантина в качестве биозавода Побочный продукт компании - фаффия.rhodozyma[J].   Акг устойчивая химия и Инжиниринг, 2018, 6(3): 3124 — 3134.

[37]   HU Z C, ZHENG уG, 13. Ван- Z,и др  fermentation   1. Биопроцесс  by  Xanthophyllomyces dendrorhous[J]. Фермент и микробные технологии, 2006, 39

(4): 586-590.

[38]    Жуан и, JIANG G - L,ZHU M - джей. - привет.атмосферная и комнатная температура Плазма и плазма 1. Мутагенез and  astaxanthin  Производство из нержавеющей стали Сахарный тростник 3. Багассе Гидролиз (гидролиз) by  - фаффия. Родозима мутант Y1[J]. Биохимия процессов, 2020, 91:330 — 338.

[39]    STOKLOSA  R  - джей, JOHNSTON  D. Д. B, NGHIEM N  Выращивание фафии родозимы продолжается Структурные и неструктурные Сахар из сахара - с удовольствием. 1. Сорго for  astaxanthin  Поколение [J]. Биохимия процессов, 2019, 83: 9 — 17.

[40]    - гассел?  S,   Шве (SCHEWE)  - г,  - шмидт  I,   et   al.   Многочисленные улучшения of astaxanthin  2. Биосинтез В ксантофилломисес дендрор by  a  Комбинация из двух частей of  В области обычных вооружений Мутагенез и метаболический путь инженерии [J]. Биотехнологические письма, 2013, 35(4): 565-569.

[41]  Ру и, шэнь н - Y, Ни (ни) - г, et  al.  По поддержанию мира of  Этанол, способствующий синтезу astaxanthin   and   its   Регулирование обмена веществ  by   - фаффия.  Родозима [J].  Журнал по теме  of   Китайский научно-технический институт продовольствия, 2019, 19(8): 41 — 48.

[42]    Париж (Франция)  H  - Y, Париж (Франция)  - L, На английском языке X  - п, et  al.  5. Метаболизм of astaxanthin     2. Биосинтез    and     corresponding     Стратегии регулирования  in   - фаффия.   Родозима [J].  - дрожжи,   2023,    40(7): 254-264.

[43]    Ямамото к, хара к и, морита т и др. Расширение производства астаксантина В ксантофилломицисе - дендрор би В целях повышения эффективности method  for  the  Полный комплект документов Исключение из текста of  Гены [J]. Микробные клеточные заводы, 2016, 15(1): 155.

[44]   Гонконг (США)   К. К.   - к,   Нильсен (NIELSEN)   - джей. - привет.   3. Метаболизм   engineering    - из сакчаромицин Общее описание: a  key  cell  Строительство и ремонт Ii. Платформа Для будущих биореакторов [J]. С помощью сотовой связи and  Молекулярная жизнь Наука, 2012, 69(16): 2671 — 2690.

[45]    13. Ван R  Z,  Гу (гу) X  L,  Яо (фр.) M  - д, et  al.  Инженерно-технические работы Грау-каротин гидроксилазы и кетолазы для перепроизводства астаксантина in  Saccharomyces  Cerevisiae [J]. 1. Границы Химической науки и техники, 2017, 11(1): 89 — 99.

[46]    Париж (Франция) P  - п, 1. Ли - м, Организация < < шен > > B,  et  al.  Главная страница 3. Коэволюция of β-carotene  1. Кетолазе  and  Гидроксилаза (гидроксилаза)  and  its  3. Применение В условиях регулирования температуры 2. Биосинтез of  Astaxanthin [J]. Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии, 2019, 67(4): 1072-1080.

[47]   Ли м, чжоу п п, чэнь м к и др. Пространственно-временное регулирование astaxanthin  synthesis  in  S.  Cerevisiae [J]. Организация < < акг > >  Синтетическая биология, 2022, 11(8): 2636-2649.

[48] Париж (Франция) Z  - м, ван Чжан и п. et  Al. Рекомбинатные сахаромики cerevisiae  for  producing  astaxanthin  and  Применение: CN113699052B[P]. 2023-08-11.

[49]   Дин уW, Лу СИ зи, чжэн и др. Направляемая эволюция системы B. термоядерный синтез enzyme  for  improving  Astaxanthin биосинтез В сакчаромициях     Cerevisiae [J].     Синтетические продукты (синтетические продукты)     and      Системная биотехнология, 2023, 8(1): 46 — 53.

[50]   Чэнь (Китай) X Y, заро - J.L, SHEN W. C. белковые линкеры Fusion: свойства, дизайн и функциональность [J]. Углубленные обзоры освоения наркотиков, 2013 год, 65(10): 1357-1369.

[51]   Париж (Франция)  P  P,  Xii. Се W   P,  Яо (фр.) Z,  et  al.  В целях развития of  Чувствительный к температуре yeast   cell   Строительство и ремонт Использование программного обеспечения  Галь4 как протеиновый переключатель [J]. Биотехнология и биоинженерия, 2018, 115(5): 1321 — 1330.

[52]   Чэнь г кью, Ван б B,  Хан ди икс и al.  Молекулярные механизмы координации биосинтеза астакзантина и жирной кислоты в гематококковой плювиалисе (хлорофикеях) [J]. Журнал растений: для клеточной и молекулярной биологии, 2015, 81(1): 95-107.

[53]   - лиан? - да. - J. Z, хамедирад м, ху С м, и др. Комбинаторные метаболические процессы  engineering    Использование программного обеспечения  an    В ортогональном состоянии  Трехфункциональная система CRISPR [J]. Природа коммуникации, 2017, 8: 1688.

[54]   Родригес окасио E,  3. Халид (халид) A., А вот и трука. C  J,  et  Al. Обследование О запрещении или ограничении Дрожжи для дрожжей for  lipid  and  Углеводородная биотехнология [J].  Журнал по теме  of   По промышленному развитию  1. Микробиология   И биотехнологии, 2022, 49(4): kuac010.

[55]   Фридландер J, цакраклидес V, каминени а и др. Проектирование высоколипидного штамма Yarrowialipolytica [J]. Биотехнология для биотоплива, 2016, 9(1): 77.

[56]   - в парке у - к, - дулермо - т, Ледесма-амаро R,  et  Al. Оптимизация нечетной цепи fatty  Производство кислот на основе Yarrowia Lipolytica [J].Биотехнология для биотоплива, 2018, 11:158.

[57]   Ван джей п, ледесма-амаро р, вей и й джей и др. Метаболическая инженерия  for   Увеличение объема ресурсов  lipid   accumulation   in   Ярровия липолица-а Обзор [J]. 1. Биоресурсы - технологии, 2020,   313:123707.

[58]   Чжао й, лю с к, ли джей и др. Достижения в области применения системы "ярровия"  lipolytica   as    a   microbial   cell    Фабрика [J].  Пищевая наука, 2021, 42(19): 388 — 400.

[59]    - килдегард.  К. К.  R,   Адиэго-перес  B,   Доменеч бельда - д,  et   al.  Инженерно-технические работы  of  Yarrowia   lipolytica   Для производства    of    Astaxanthin [J].    Синтетические продукты (синтетические продукты)    and     Системные биотехнологии, 2017, 2(4): 287 — 294.

[60]    MA  у S,  1. Ли - J. B,  Хуанг (HUANG) S  W,  et  al.  Целевые показатели Выражение пути движения  to   subcellular   organelles   Улучшается состояние здоровья  astaxanthin synthesis  in   Yarrowia   Lipolytica [J]. 3. Метаболизм Машиностроение, 2021, 68: 152 — 161.

[61]    Юзбашева и и, таратынова м о, федяева и м, и  al.  В крупных масштабах 1. Биопроизводство  of  natural   astaxanthin   В Yarrowia lipolytica[J]. Отчеты по биоресурсной технологии, 2023,21:101289.

[62]   Кан у, ма т, лю м и др. Модульный фермент сборка для повышения 13. Каскад - биокатализ and  metabolic  Поток [J]. Связь с природой, 2019, 10: 4248.

[63]    Чэнь (Китай) J,  Чжан (Китай) R  L,  Чжан (Китай) G  L,  et  al.  Неоднородность выражения мнений  of   the   Производная от растений  astaxanthin   Путь биосинтеза in  Yarrowia  lipolytica  for  - гликозилирован Astaxanthin production[J]. Журнал по теме of  В сельском хозяйстве and  - продукты питания  Химия, 2023, 71(6): 2943 — 2951.

[64] А как же хуа? - Q, 13. Ван  D  - н, WEI   L  J,   et   al.  A  method   Для строительства штамм генной инженерии липолиса "ерсиния" для производства астаксантина: CN116497052A[P]. 2023-07-28.

[65]   Чжу х з, цзян с, у джей джей и др. Производство высокого уровня 3S, 3h -astaxanthin in Ярровия липолика через итеративный метаболизм Машиностроение [J]. Журнал по теме of  В сельском хозяйстве and  Пищевая химия, 2022, 70(8): 2673-2683.

[66]   HAMMER S - к,AVALOS J. L. использование дрожжевых органол для метаболической инженеры [J]. Химическая биология природы, 2017 13

(8): 823-832.

[67]   Йокояма а, В чем дело? - к, - сизури. Y. новые сведения Каротеноидные глюкозиды, астаксантин глюкозид и адоникантин глюкозид, изолированные  from  the   astaxanthin-producing  Морская пехота Бактерия, агорактерий Aurantiacum [J]. Журнал по теме of  Natural  Продукты, 1995, 58(12): 1929-1933.

[68]   Ким джей х, ким С х, ким к х и др. Sphingomonas lacus sp. nov. an  Производство астаксантина-дидезоксигликоцидов species  Изолирован от почвы около пруда [J]. Международный журнал систематической и эволюционной микробиологии, 2015, 65(Pt_9): 2824-2830.

[69]   Чан джей джей, хо C Y, MAO C T и др. Термотоксин-устойчивые дрожжи кефира Для биохимических целей И производства биотоплива [J]. Прикладная энергия, 2014, 132: 465 — 474.

[70]   < < банат > >  I   - м,  - нигам!  P,   - марчант.  - р.  1. Изоляция  of thermotolerant,  fermentative   Дрожжи для дрожжей  - рост производства;  at   52. (подпись)  И производства 1. Этанол at  45  В настоящее время and  50  [J]. В мире Журнал по теме Микробиология и биотехнология, 1992, 8(3): 259-263.

[71]   «Раймонди» (RAIMONDI)  S,  Ни в коем случае E,  - амаретти. A.,  et  al.  термоадаптируемость  of   Kluyveromyces   Марксиан (marxianus)  in   Производство рекомбинантного белка [J]. Фабрики микробных клеток, 2013, 12: 34.

[72]    Лин и джей, чан джей джей, лин и др. Метаболическая инженерия дрожжи для производства astaxanthin[J]. Биоресурсная технология, 2017

245: 899-905.

[73]   Париж (Франция) X  X,  WANG  D  М, Гонконг J.  Производство каротеноидов из   Не детоксифицирован   13. Ксилоза   - мать   В жидком состоянии    or    Корнкобный гидролиз  with   engineered   Kluyveromyces   Marxianus [J]. Технология биоресурсов, 2022, 364: 128080.

[74]   Со и б, ли джей к, чон т х и др. Увеличение производства астакзантина архаей чаперонин в Escherichia Coli [J/OL].Журнал наук о жизни, 2015, 25(12): 1339 — 1346[2023 — 09 — 01]. http://koreascience.or.kr/article/JAKO201509651118178.page.

[75]    Чон т х, чхо и с, чой и др. Увеличение объема производства astaxanthin   by   3. Метаболические свойства  engineered   Путь без мевалоната    in     Escherichia     coli[J/OL].     1. Микробиология    И биотехнологические письма, 2018, 46(2): 114 — 119[2023 — 09 — 01]. http://www.mbl.or.kr /journal/view.html? Doi =10.4014/mbl.1801.01007.

[76]   В чем дело? - J. - г,  Со со со Y  B,  Ким ким ким Y  - ти. - привет.  Усиленная система управления production   of astaxanthin   by   metabolic    engineered   - изопреноидная болезнь   Путь к успеху  Escherichia    Coli [J].  Журнал по теме  of   Жизнь и здоровье   - наука,   2008, 18(12):   1764 — 1770[2023 — 09 — 01].  http://koreascience. or.  Kr/статья/jako200805441024822.страница.

[77]    Лемут к, штёр к, альберман с. инжиниринг а

Без плазмы Escherichia  coli   strain   for  Повышение качества услуг  in  Vivo biosynthesis of astaxanthin[J]. Микробные клеточные заводы, 2011, 10: 29.

[78]    Лу (LU)- Q,BU Y F, Лю (LIU)- J.Z. метаболическая инженерия Escherichia coli Для производства пищевых продуктов astaxanthin  В качестве преобладающего каротеноида [J]. Морские лекарства, 2017, 15(10): 296.

[79]    WU Y Q, YAN P P, LIU X W и др. Комбинаторное выражение лица  different    β-carotene    D. гидроксилазы   and    1. Кетоласы   В эшерихии  coli    for   increased    astaxanthin   Производство [J]. Журнал промышленной микробиологии и Биотехнология, 2019, 46

(11): 1505-1516.

[80]    1. Ли S,  Хуанг (HUANG) - J. C.  Оценка состояния окружающей среды of  expression  Кассеты с записями И культурные средства массовой информации для различных эшерихия коли штаммов для производства астаксантин [J]. По окружающей среде Товары для дома and  : : биоразведка, 2018,  8

(5) 397-403.

[81]   LU    Q,   LIU    J   Z.    Усиленная система управления  astaxanthin   production    В эшерихии   coli    По адресу: via   1. Морфология   and    oxidative    Стресс-инжиниринг [J]. Журнал по теме В области сельского хозяйства and  - продукты питания Химия, 2019, 67(42): 11703 — 11709.

[82]    LI  D,  LI  Y,  Сюй (XU) J  Y,  et  al.  Инженерно-технические работы CrtW  and  CrtZ  По улучшению положения женщин biosynthesis  of astaxanthin  В эшерихии Coli [J]. Китайский журнал натуральных лекарственных средств, 2020, 18(9): 666-676.

[83]    Чжан (Китай)  - м,  - гонг!  Z  - к, Г-н тан J  L,   et   al.  Улучшение производства astaxanthin в Escherichia coli путем совместного использования ферментов CrtZ с различными предпочтениями субстратов [J]. Микробные клеточные заводы, 2022, 21(1): 71.

[84]   По адресу: LV Y  K,  - эдвардс. H,  Париж (Франция) J W, et  al.  Комбинирование функций и функций 26S rDNA и the  - кри-йокп system  for  - итеративный метод gene  Интеграции и интеграции В целях повышения эффективности 3. Маркеры 3. Кураторское дело in  3. Ярровия lipolytica[J].  Оао синтетическая биология, 2019, 8(3): 568-576.

[85]   - даценко К. К. A., - кто хочет? B  L.  Один шаг вперед Отсутствие активации - из хромосомы  genes   in  Escherichia   coli  К -12 using  Изделия ПЦР [J]. Труды национальной академии наук США, 2000, 97(12): 6640-6645.

[86]   Е л дж., чжу х н., у т., и др. Оптимизация локализации астаксантина     enzymes       for      Повышение качества услуг      Производительность [J]. Биотехнология для биотоплива, 2018, 11:278.

[87]   13 ч. 00 м. - D X, LIBSON A, MIERCKE L J W, et al. Структура глицеропроводящего канала и основа его селективности [J]. Наука, 2000, 290(5491): 481 — 486.

[88]   - неофиту   I,   В чем дело?   R,    1. Лоренс  J,    et    Эл. Эукариотик Интегрированная система управления membrane  protein  expression  Использование природных ресурсов - "эшерихия" coli  Глицерол-дирижёр Белки в канале (GlpF) [J]. Прикладная микробиология и биотехнология, 2007, 77(2): 375-381.

[89]   Кацумата (KATSUMATA) - т,  Ишибаши (ISHIBASHI) - т, - кайл? - да. D.  A   Субхроническая токсичность Iii. Оценка of  a  natural  Богатый астаксантин Экстракт каротеноидов of  Paracoccus  - каротинифейенс in  Крысы [J]. Токсикологические отчеты, 2014, 1:582 — 588.

[90]   Хонда м, кагеяма х, хибино т, И др. Эффективные и экологически чистые  - добрый вечер.  method   for   - каротеноид  Извлечение из:     Paracoccus      - каротинифейенс     Использование природных ресурсов     Встречающиеся в природе  Z- изомеризация ускоряется  Катализаторы [J].  Биохимия процессов, 2020, 89: 146 — 154.

[91]   - хонда. - м, Кагеяма (KAGEYAMA) H,  - хибино. - т, et  al.  Улучшенный каротеноид  Обработка данных  with    По устойчивому развитию  solvents   Использование z-изомеризации     1. Перестройка помещений     in      Физико-химические свойства: обзор и будущие направления [J]. Молекулы, 2019, 24(11): 2149.

[92]   Париж (Франция) S,  Париж (Франция) В (1) X,  Париж (Франция) L,  et  al.  Воздействие на окружающую среду of  1. Термическая обработка on  astaxanthin  and  astaxanthin  В европе и европе in  Белый цвет тихого океана  - креветки?  - литопеней  Ванамей [дж].  Журнал по теме  of   Олео наука, 2015, 64(3): 243-253.

[93]   Юань J P, CHEN F. Isomerization of trans-astaxanthinto cis- isomers in  organic  Растворители [J]. Журнал по теме  В области сельского хозяйства И пищевая химия, 1999, 47(9): 3656-3660.

[94]    Хонда м, кагеяма х, мураками к и др. Изомеризация паракокуса Получают на основе каротинифицинов Каротеноиды (астаксантин, адонирубин, И адонисантин под ними Подкритические условия воды [J]. Акг продовольственная наука и Технологии, 2021, 1

(10): 1861-1868 годы.

[95]   Ну и дела. J  A,  1. Сингал R  S.  3. Метаболизм По прекурсорам И факторы производства  В целях стимулирования  astaxanthin   production   in   - паракокус мбик 01143[J]. - продукты питания Наука и техника and  Биотехнология, 2012,  21

(6): 1695-1700.

[96]   Цзянь х л., чжу м., у з к., и др. Извлечение астаксантина из фафии 1. Родозима with  На английском языке enzyme  produced  by  "Циркуляры бациллы" A   1.383[J]. Журнал по теме of  Chemical   Инженерно-технические работы Из китайских университетов, 2006, 20(1): 147-151.

[97] с H,  CHEN  В (1) H,  - он... G  Q,  et  al.  3. Оптимизация of  Кислотная экстракция   of    astaxanthin     from    Phaffia     Родозима [J]. Журнал по теме of  Организация < < чжэцзян > > Университет в нью-йорке  Наука и техника B   (биомедицина) * * * * Биотехнология, 2008, 9(1): 51 — 59.

[98]   OUYANG Q, CHEN X C, HUANG Y Z. исследование по извлечению астаксантина   from    Haematococcus    pluvialis    by    Различные механические методы [J]. Journal of Fuzhou University (Natural Sciences Edtion), 2005, 33(1): 111-115.

[99]  XING T, ZHANG H, QI L L, et al. Исследование по извлечению астаксантина  from   - гематкокк  pluvialis[J].   Китай (Китай)  Пищевые добавки, 2018(11): 169-174.

[100]  Гао (GAO)Y, XING L H, Солнце в час и др. Исследования по добыче, очистке and  Количественные показатели Методы обнаружения Из различных источников [J]. Журнал пищевой безопасности и Качество, 2020, 11(5): 1414-1423.

[101]   ANG  F S, KHAW S Y, несколько л л, и др. Изоляция стабильного астаксантина-гиперпроизводства   Мутант ксантофилломициса дендрорхуса через случайный мутагенез [J]. Прикладная биохимия и микробиология, 2019, 55(3): 255 — 263.

[102] ZHOU J K, LI J H, GE F H и др. Исследование по новой технологии ферзиматики extraction  of  astaxanthin  from  Haematococcus pluvialis[J]. Журнал китайских медицинских материалов, 2008, 31 (9): 1423-1425.

[103]   - ларруда. M, CELINSKA E, BACK A, et al. Синтетический биологический подход к ransform Yarrowia lipolytica в конкурентоспособного биотехнологического производителя От ву-каротина [J]. Биотехнология и биоинженерия, 2018, 115(2): 464 — 472.

[104]   GAO  S  Л, тонг Y Y, чжу л и др. Итеративная интеграция нескольких копий  pathway    Гены в организме Yarrowia   lipolytica    Для гетерологического производства гравия-каротина [J]. Метаболическая инженерия, 2017, 41:192 — 201.