Каковы методы производства астаксантина?

Астаксантин — это каротеноид с высокой экономической и практической ценностью. Она привлекла большое внимание благодаря своим различным физиологическим функциям. Астаксантин обладает более сильной антиоксидантной активностью, чем витамин е и гравитационный каротин [1], и может эффективно подавлять окислительные повреждения и раковые изменения в клетках [2]. Она также имеет много других эффектов, таких как антигипертония, профилактика сердечно-сосудистых заболеваний, укрепление иммунной системы и защита от ультрафиолетового излучения. Кроме того, астаксантин может также использоваться в качестве пищевой добавки из-за его антиоксидантных свойств и других физиологических и биохимических свойств [3]. Поэтому применение астаксантина в области медицины, продовольствия, кормов, изделий медицинского назначения и косметики растет с каждым днем.

Описаны структурные свойства, источники и методы производства астаксантина с уделением особого внимания биосинтезионному пути астаксантина, производимого фафией родозимой, условиям ферментационной культуры, а также методам извлечения и очистки астаксантина из сломанных клеток, что обеспечивает теоретическую основу для промышленного производства астаксантина.

1 свойства и структура астаксантина

Астаксантин-ненасыщенное терпеновое соединение с химическим названием 3,3'-dihydroxy-β,β'- каротин -4,4'- дион и молекулярная формула C40H52O4[4]. Он имеет температуру плавления 216 °C и температуру кипения 774 °C при 100 кпа [5]. Астаксантин является гидрофобным и легко растворимым в органических растворителях, таких как бензол, хлороформ, ацетон и диметилсульфоксид при комнатной температуре [6], и незначительно растворимым в органических растворителях с более высокой поляричностью, таких как метанол, этанол и нефтяной эфир. Астаксантин чувствителен к свету, кислороду, температуре и другим факторам и подвержен реакции разложения, тем самым теряя свою биологическую активность.

Природный астаксантин состоит из длинной углеродной цепи с четырьмя изопреновыми структурами и сдвоенной соединением, а также шестирасчлененного кольца с гравюрой-гидроксидной кетонной группой на обоих концах. Молекулярная структура похожа на структуру грава-каротина. Две гидроксильные группы на шести-расчлененных на hexamer образуют chiral центр, который формирует астаксантин в трех различных конфигурациях: леворотари (3S-3&)#39; с., dextrorotary (3R-3&)#39; р) и рацемические (3R-3&)#39; с.

Haematococcus pluvialis содержит 1,5% до 3,0% (3S-3&)#39; с. Астаксантин по сухому весу, в основном в виде астаксантин диестеров и астаксантин моноэфиров [7]. В 1972 году fhaff H J[8] обнаружил, что красные дрожжи fhaff могут синтезировать астаксантин и производить dextrorotatory (3R-3&)#39; р. Астаксантин. В настоящее время известно, что только красные фхафтовые дрожжи производят естественный астаксантин с (3R-3&)#39; р. Конфигурация, и эта естественная конфигурация астаксантина имеет более высокую биодоступность в организме человека [9].

2 природные источники и методы производства астаксантина

2.1 природные источники

Астаксантин широко встречается у животных (таких как водные животные и птицы), растений, грибов, водорослей и бактерий. Дикий лосось получает астаксантин из пищевой цепи, а разводимый лосось получает характерный цвет своей плоти из астаксантина, содержащего корм [10]. Блестящий цвет перьев фламинго также из-за наличия астаксантина. Содержание и состояние астаксантина у животных различны. Например, астаксантин в мышцах, внутренних органах и плазме лосося в основном находится в свободном состоянии, в то время как астаксантин в коже, весах и гру в основном находится в эстерифицированной форме. Ни одно животное не может синтезировать астаксантин с нуля, и он должен быть получен из водорослей, дрожжей и растений [11]. В настоящее время астаксантин широко используется, и потребительский спрос постоянно растет. Полагаться исключительно на астаксантин, присутствующим в пищевой цепи, недостаточно для удовлетворения потребностей различных отраслей. Существующие методы производства астаксантина в основном включают химический синтез, естественную экстракцию и биосинтез.

2.2 методы производства

2.2.1 химический синтез

Метод химического синтеза относится к производству астаксантина с использованием многоступенчатых химических и биокаталитических реакций. В зависимости от различий в методе синтеза химический метод синтеза подразделяется на метод полусинтеза и метод полного синтеза. Метод полусинтеза относится к методу подготовки астаксантина с использованием веществ-прекурсоров (таких, как лутейн и кантаксантин) в метаболическом пути астаксантина в качестве сырья; Метод полного синтеза относится к методу получения астаксантина полностью с использованием химического синтеза [12].

Химически синтезированный астаксантин имеет преимущества низкой себестоимости производства, высокой урожайности и чистоты астаксантина более 96% [13]. Однако химически синтезированный астаксантин представляет собой смесь различных форм конформации и содержит побочные продукты, а его абсорбция и утилизация в организме низкая [14]. Его стабильность, безопасность и антиоксидантная активность ниже, чем у природного астаксантина [15].

2.2.2 метод естественной экстракции

Природный астаксантин в основном встречается в морских организмах. Метод экстракции астаксантина путем дробления креветок, крабов и других переработанных побочных продуктов, богатых астаксантином, удаления излишевания и использования органических растворителей называется методом естественной экстракции. Этот метод подготовки может способствовать развитию аквакультуры при одновременном сокращении загрязнения окружающей среды, вызываемого побочными продуктами отходов водной продукции. Однако из-за высокого содержания золы и читина в выброшенных скорлупах креветок и крабов, а также из-за низкого содержания астаксантина процесс экстракции осложняется, возникают проблемы с высокими затратами на экстракцию [16].

2.2.3 метод микробной ферментации

Метод использования дрожжей, водорослей и бактерийПродукт - астаксантинназывается методом микробной ферментации- да. Основные штаммы включают одноклеточные зеленые водоросли Haematococcus pluvialis, Chlorella aeruginosa [11], Rhodotorula rubra, Rhodotorula glutinosa [18] и Paracoccus [19-20]. Производство астаксантина на основе ферментации имеет четкую структуру, мало побочных продуктов и является экологически чистым. Однако она сдерживается такими факторами, как низкая урожайность, жесткие культурные условия и высокая стоимость культуры. Использование дешевых культурных материалов, а также отбор и селекция высококачественных высокоурожайных штаммов для обеспечения промышленного производства являются ключевыми факторами в производстве астаксантина на основе микробного ферментации.

3 микроорганизмы, производящие астаксантин

3.1 водоросли, вызывающие астаксантин

Многие водоросли могут производить astaxanthin, такие как Haematococcus pluvialis, хламидомон, Acetabularia, Euglena и т.д. Haematococcus pluvialis — пресноводная одноклеточный зеленый водород, относящийся к роду хлорофитов, хлорофикеев, гематококков, и является основным водорослями, производящими астаксантин. Astaxanthin в клетках Haematococcus pluvialis в основном существует как дистерифицированный astaxanthin и моностерифицированный astaxanthin, с небольшим количеством в свободном состоянии. Тем не менее, гематококковой плувиалис имеет длительное время роста, строгие культурные условия, требует света, имеет ограниченные производственные площадки, и астаксантин находится в толстостенных спорах, которые имеют низкую скорость извлечения и слабую непрерывность [21-23]. В 2010 году министерство здравоохранения утвердило гематококковый плувиалис в качестве нового источника питания. С тех пор различные продукты для здоровья, богатые Haematococcus pluvialis astaxanthin были одобрены государственной продовольственной и лекарственной администрацией. Эти меры оказали положительное влияние на развитие исследований и разработок астаксантинской продукции и быстрое развитие отрасли [24].

Chlorella pyrenoidosa является еще одним зеленым водорослем, который производит природный астаксантин. Astaxanthin содержание хлореллы pyrenoidosa ниже, чем Haematococcus pluvialis, но эта водоросль имеет особые преимущества для выращивания. Chlorella pyrenoidosa — аэробный гетеротроф, который может использовать глюкозу в качестве единственного источника углерода. Он быстро растет, может достигать сверхвысокой плотности клеток, менее чувствителен к неблагоприятным экологическим условиям, и легко культивируется внутри и снаружи.

3.2 бактерии, производящие астаксантин

Astaxanthin встречается в различных бактериях, таких как Brevibacterium, Corynebacterium и Mycobacterium lacticola. Хотя содержание астаксантина у большинства бактерий значительно ниже, чем у водорослей и глютиниса родоторулы [25-27], проблема низкого производства астаксантина у бактерий может быть улучшена путем введения в бактерии генов, связанных с астаксантином синтеза. В частности, грам-негативные бактерии [28] имеют тонкие и легко разбитые клеточные стенки, что облегчает извлекание пигментов, и подходят для крупномасштабной высокоплотной ферментации культур [11]. Производство астаксантина путем бактериальной ферментации может значительно снизить себестоимость природного астаксантина и имеет большое значение для будущего промышленного производства астаксантина.

3.3 производство дрожжей астаксантина

Основные штаммы, используемые при производстве astaxanthin дрожжевой ферментацией, включают родоторула глютини, родоторула рубра [29], родоторула бентика [30-31] и родотрула глютини.

Красный филе дрожжи является единственным видом в королевстве грибов, phylum грибов, subphylum неидеальных грибов, семейство cryptococcus, род красных филе дрожжей. Он воспроизводит, двигаясь во время асексуальности, и метаболизируется как аэробным дыханием, так и анаэробным дыханием. В настоящее время широко используется грибок для микробной ферментации с целью производства астаксантина внутри страны и за рубежом [32 — 34]. Содержание астаксантина дикого штамма родоторула фава составляет 0,05% сухой клеточной массы, а некоторые штаммы мутантов могут достигать 1,0%, что составляет около 80% общего содержания каротеноидов. Красная дрожжевая ферментация имеет следующие преимущества в производстве астаксантина: она может использовать различные источники углерода и азота для производства астаксантина, а клетки растут и размножаются быстро, что позволяет высокой плотности обработки; Производственный цикл короткий, а стоимость низкая; Клеточные стенки легко ломаются, а выпускаемый астаксантин находится в конфигурации dextrorotatory (3R-3&)#39; р., и находится в свободном состоянии, которое легко поглощается человеческим телом. После экстракции тело дрожжевых элементов может быть непосредственно использовано в качестве кормовой добавки [4, 35].

4 биосинтез астаксантина дрожжами

Многие исследования показали, что мевалонат (мва), изопентанилпирофосфат (ипп), фарнезилпирофосфат (ФПП), диметилаллилпи-рофосфат, геранил-геранилпирофосфат (ГГПП), октагидроликопен, тетрагидроликопен, грау-каротин и т.д., являются важными промежуточными веществами в биосинтезе астаксантина. Биосинтетический путь астаксантина в дрожжевых составах разделен на два этапа: первый этап — синтез грау-каротина; Второй этап — производство астаксантина от грау-каротина до окисления и гидроксиляции [36].

Каротеноид в дрожжах получают из метионина, начиная с глюкозы, через гликолиз (эмбен-майерхоф) Путь, эмп) для производства пировата, а затем окисленного и декарбоксилированного для получения ацетилкоэнзима а (ацетил-коа) и трех трех молекул конденсата ацетилкоа для формирования мва, которая затем преобразуется путем фосфорации и декарбоксиляции в изопентанилпирофосфат (C5). Пис является синтетическим прекурсором всех изопентиловых соединений (таких, как астаксантин, каротин и эргостерин). IPP конденсируется, чтобы сформировать GGPP (C20), и две молекулы GGPP проходят димеризацию, чтобы сформировать бесцветный октагидротоматный красный пигмент, который считается первым конкретным шагом в каротеноидном синтезе. За этим следует многоступенчатая дегидрогенация и одноступенчатая циклизация для синтеза грау-каротина [37]. Наконец, астаксантин получается из грау-каротина через двухэтапную ферментическую реакцию, в которой кетолаза катализирует введение двух групп кетонов на 4 позиции, а гидроксилаза катализирует введение двух групп гидроксила на 3 позиции молекулы грау-каротина.

5 управление и оптимизация процесса ферментации дрожжей

В настоящее времяДрожжи для производства астаксантинаОбладает высокой метаболической способностью и может использовать моносакхариды [38], дисакхариды и полисакхариды, органические кислоты и спирты. Он также может быстро использовать простые источники азота, такие как аммоний, нитрат, мочевина или аминокислоты, а также сложные смеси, такие как дрожжевой экстракт, экстракт говядины, солодовый экстракт или пептон. Она может также использовать промышленные отходы, которые могут эффективно сократить производственные издержки, такие как отходы производства сахара, процесса мокрого измельчивания кукурузы [39] или ферментативные гидролиз древесины [40]. STOKLOSA R J et al. [41] использовали сладкий сорго bagasse (SSB) в 2 л ферментер с Pichia пасторисом для производства 65,4 мг/л астаксантина, что составило 2,49 мг/г общего астаксантина. Однако недорогие носители могут содержать неизвестные ингибиторы производства каротина, что делает их непригодными для производственного процесса [42].

Ферментация астаксантина в присутствии гидролизата SSB, произведенная на основе вышеупомянутых экспериментов, позволила сократить содержание астаксантина до 53,3 мг/л, что может быть вызвано ингибиторным действием фенолических соединений в SSB [27, 41]. В большинстве случаев культура должна дополняться необходимыми питательными веществами, и она может также включать в себя стимуляторы или прекурсоры производства каротина [43]. Добавление некоторых ингредиентов может увеличить производство астаксантина, таких как добавление свежего томатного сока [44] и морковного сока [45].

Питательные вещества (источники углерода, источники азота, ионы металлов, витамины и т.д.) и физические факторы (температура, pH, подача кислорода и т.д.) могут влиять на рост клеток и производство астаксантина. Различные штаммы, используемые в литературе, или высокопродуктивные штаммы мутантов астаксантина привели к различным составам культурной среды и условиям процесса ферментации (см. таблицу 1). В то же время штаммы мутантов содержат случайные генные фрагменты, а количество или местонахождение и точная функциональная природа включенных генов в большинстве случаев до сих пор неизвестны, что может повлиять на сопоставимость литературы. Влияние питательных веществ и методов культуры на рост клеток и производство астаксантина можно резюмировать следующим образом.

Красные дрожжи мезофильные дрожжи с температурой роста 0-27 градусов. В зависимости от используемого штамма (мутанта) оптимальная температура для производства астаксантина и роста дрожжевых элементов обычно составляет от 18 до 22 градусов. Оптимальный pH для астакзантинового синтеза и роста дрожжевых элементов обычно составляет от 5 до 6. Оптимальная температура или pH для роста дрожжевых элементов, как правило, отличается от оптимальной температуры или pH для синтеза и аккумуляции астакзантина. Таким образом, изменение pH или температуры в процессе ферментации может увеличить производство астаксантина в процессе ферментации. Мутанты и дикие штаммы, температура культуры и pH среды культуры оказывают сильное влияние на содержание астаксантина и каротеноидный состав клеток [52 — 53].

Кислород играет ключевую роль в биосинтезе астаксантина, и количество накопленного астаксантина связано со скоростью переноса кислорода. Недостаточное снабжение кислородом приводит к накоплению грационного каротина и снижает эффективность окисления грационного каротина до астаксантина. Таким образом, достаточное количество кислорода может помочь с накоплением астаксантина [54]. Существует критическая концентрация растворенного кислорода при 10-20% насыщенности воздуха, ниже которой концентрация растворенного кислорода препятствует росту клеток и образованию каротеноидов.

Однако избыточное содержание кислорода препятствует росту дрожжевых элементов. Таким образом, обеспечение необходимого количества кислорода в красных дрожжевых клетках fife может помочь улучшить астаксинтонный синтез. Таким образом, потребление кислорода бактериями должно определяться при выращивании различных штаммов, чтобы регулировать скорость ферментационного оборудования. Помимо регулирования скорости и изменения расхода воздуха для повышения кислотности, добавление биосовместимых органических растворителей с высокой растворимостью кислорода в среду культуры, таких как кислородная кислота, n- додекан, соевое масло, твен -80 и этилацетат, также может улучшить скорость передачи кислорода в клетках.

В период экспоненциального роста высокие концентрации сахара препятствуют двум процессам ликопенового синтеза — астаксантина и астаксантина. Поэтому не следует использовать высокие концентрации источников углерода [54]. Однако на более поздних стадиях роста клеток высокие концентрации источников углерода могут способствовать накоплению каротеноидов [55]. Таким образом, антагонистический эффект высоких концентраций сахара может быть устранен путем использования метода пакетного откорма при одновременном достижении высоких концентраций биомассы и внутриклеточного астаксантина.

В промышленности процесс ферментации глютиниса родоторулы подразделяется на две стадии: стадию роста клеток и стадию созревания. Обеспечивая низкое соотношение C/N (соотношение содержания углерода и азота), клетки первоначально демонстрируют быстрый рост, а темпы роста постепенно замедляются по мере приближения к высокой концентрации в клетках. В течение этой фазы скорость роста клеток выше, чем скорость образования астаксантина. Когда клетки близки к периоду стабильного роста, переключается на высокое соотношение углерода и азота, а скорость синтеза астаксантина превышает скорость роста клеток. В течение одного и того же времени ферментации, регулируя концентрацию источника углерода и соотношение углерода и азота на различных этапах бактериальной ферментации, можно одновременно достичь как высокой урожайности клеток, так и высокой урожайности астаксантина.

Используемый штамм (мутант) и среда определяют контроль питания для достижения максимальной производительности процесса и могут быть установлены несколькими способами. Примерами являются откорм, основанный на индексе моно, контроль pH-stat [40], контроль культуры DO-stat или импульсное откорм после определения концентрации источника углерода (см. таблицу 1). В качестве альтернативы пакетному процессу fed могут рассматриваться полунепрерывные и непрерывные процессы. Анализ данных, приведенных в таблице 1, показывает, что импульсное кормление и кормовое кормление в партии являются более эффективными методами кормления. Другим способом увеличения астаксантина на этапе созревания является добавление медленно метаболизированных источников углерода, таких как глицерол или уксусная кислота, после истощения первоначального метаболического источника углерода.

6 методы очистки астаксантина из различных источников

6.1 методы разрушения клеточной стенки астаксантина

Астаксантин является внутриклеточным продуктом, и, как правило, необходимо пройти через такие шаги, как разрушение стенок клеток, извлечение и очистка, прежде чем он может быть извлечен из дрожжевых элементов. Широко используемые методы разрушения клеточных стенок включают механические методы, химические методы [56], ферзиматические методы и термическую обработку [57].

Механические методы используют механическое оборудование для разрушения стенок камеры и высвобождения содержимого через осмотическое давление внутри камеры. Основными методами являются ультразвуковое дробление, фрезерование бусины, распыление при ударе и гомогенизация под высоким давлением. Механические методы широко используются, потому что они просты в эксплуатации, но они могут легко привести к повышению температуры раствора в некоторых местах, в результате чего astaxanthin потери.

Химические методы включают главным образом метод диметилсульфоксида, метод кислотного базового нагрева и просачивание органических растворителей. Метод экстракции щелочи и метод гидролиза кислоты требуют использования больших объемов щелочных и органических кислот для разрушения стен, что увеличивает объем сбрасываемых сточных вод, приводя к загрязнению окружающей среды. Кроме того, сильные кислоты и основания могут повредить астаксантин. Использование 5,55 моль/л молочной кислоты концентрации и 30 градационной температуры дробления при разрушении и экстракции стенок может уменьшить повреждения астаксантина. Конечное извлеченное содержание астаксантина и общего содержания каротеноидов составило 1 294,7 гранул/г и 1 516,0 гранул/г, соответственно, и астаксантин составил 85,4% от общего объема извлечения [56].

Ферменты β-glucanase и улиток могут гидролизировать скелет клеточной стенки компонента β-glucan, который может сломать клеточную стенку более эффективно, чем другие методы и избежать потери астаксантина из-за утечки из клетки. Фермент обработки мягкие условия, низкие требования к оборудованию, и процесс обработки вызывает меньше загрязнения окружающей среды. Извлеченный астаксантин также более стабилен, чем полученный другими методами.

В настоящее время разработаны различные современные методы экстракции для извлечения активных ингредиентов, таких как импульсное электрическое поле (пэ) [58], микрофлюидизация высокого давления (ПМФ), ионные жидкости (ионные жидкости, ILs) [59] и другие новейшие технологии. Применение пф может привести к летальному исходу клеток или вызвать стресс подсознания в результате транзитной пропитываемости мембран клеток и электрофоретического перемещения заряженных веществ между камерами клеток. Некоторые ученые изучали использование пф для извлечения различных ценных соединений из микроводорослей.

HPMF представляет собой новейшую технологию для высокоскоростного удара, сильного измельчения, временного падения давления, высокочастотных вибраций, кавитации и сверхвысокого давления (до 200 мпа) в эмульсиях, макромолекулярной модификации и экстракции биоактивных ингредиентов. По сравнению с обычной однородностью высокого давления, HPMF имеет иную конструкцию клапана и камеры и более высокое рабочее давление. Апм состоит из катионов и анионов, которые свободно удерживаются вместе и характеризуются незначительным давлением паров, низкой температурой плавления, отличной термохимической стабильностью.

Кроме того, они обладают высокой способностью к растворению целлюлозы, а смеси ионных жидкостей оказывают незначительное влияние на липидную экстракцию хлореллы. Таким образом, ILs является новым методом разрушения клеток, который может быть использован для восстановления липидов и белков из хлореллы. Эффективность нарушения клеточной стенки при экстракции астаксинтина из плавиалиса гематококка была сопоставлена с использованием различных методов, таких как PEF, ультразвук (США), HPMF, HCl и ILs. Результаты показали, что методы лечения ILs, HCl и HPMF были наиболее эффективными при нарушении работы клеток, при этом уровень экстракции астакзантина превышал 80%, в то время как PEF и США были менее эффективными при нарушении работы стенки клеток [60]. По сравнению с традиционными методами нарушения работы клеток, новые методы нарушения работы клеток, такие как PEF, HPMF и ILs, оказывают меньшее воздействие на астаксантин. Они также используют меньше растворителей, экономят время, энергосберегают и экологичны.

6.2 методы экстракции астаксантина

Астаксантин-жирорастворимое вещество, которое растворимо в органических растворителях, но не в воде. Он может добываться с использованием органических растворителей полярных пород, таких как ацетон, этанол, метанол и нефтяной эфир. Результаты воздействия различных растворителей на коэффициент извлечения общего количества каротеноидов из антарктического криля показывают, что безводный этанол обладает наилучшим эффектом извлечения, при этом общий коэффициент извлечения каротеноидов составляет 73,3% [61]. Однако астаксантин растворим в органических растворителях, но имеет низкую растворимость, поэтому эффект однократной экстракции растворителей является ограниченным. Хуан кайчен и др. [62] использовали в качестве экстракционного раствора смесь этилацетата и этанола 2:1, а содержание астаксантина, извлеченного при кислотном нагревании, было значительно выше, чем содержание одного раствора.

6.3 методы очистки и обнаружения астаксантина

С точки зрения очистки астаксантина используются, главным образом, тонкослойная хроматография (ТЛК) и колоночная хроматография. Тонкослойная хроматография может использоваться только для определения состава сырых экстрактов. Однако этот метод имеет низкую разрешающую способность, низкую воспроизводимость, легко подвержен воздействию внешних факторов, предъявляет высокие требования к оператору и не способствует проведению экспериментальных операций после очистки. По сравнению с другими методами очистки, хроматография колонн является наиболее распространенным методом, поскольку она недорога и удобна для замены стационарной и подвижной фаз. Сочетание различных стационарных и мобильных фаз может обеспечить разделение и очистку относительно простых образцов и имеет широкий диапазон применения.

Тонкослойная хроматография и колоночная хроматография подходят для предварительного очищения. Более поздняя очистка может осуществляться с использованием высокопроизводительной жидкостной хроматографии (HPLC), которая может достичь эффекта очистки более 98%, но затраты на подготовку высоки. HPLC может не только получить высокую чистоту astaxanthin, но и точно определить содержание astaxanthin, используя подходящую мобильную фазу и колонку высокопроизводительной жидкой хроматографии C18 или C30. В экспериментах метод ультрафиолетовой спектрофотометрии часто используется для быстрого определения количества произведенного астаксантина.

7. Выводы и перспективы

Астаксантин имеет большой потенциал развития и имеет большую ценность, а также возможности для развития в медицине, косметике, продуктах здравоохранения, кормовых добавках и других областях. Как естественный астаксантин, так и химически синтезированные процессы подготовки астаксантина имеют определенные недостатки. В будущем исследования микробного синтеза астакзантина будут направлены на разработку высокоурожайных штаммов со стабильными генетическими характеристиками, использование недорогих культурных материалов, изучение простых производственных процессов, использование передовых, быстрых и точных методов извлечения и очистки для снижения производственных затрат и повышения урожайности и чистоты астакзантина.

Ссылка:

[1] шах м м, лян и чэн дж., и др., и др. Astaxantin-производство зеленых микроводорослей Haematococcus pluvialis: от От одноклеточного до дорогостоящего коммерческого продукта [J]. Передний завод Sci, 2016, 7: 531.

[2] FARAONE I, SINISGALLI C, OSTUNI A, et al. Astaxanthin anticancer ef- fects медитируются через несколько молекулярных механизмов: систематический re- вид [J]. Аптека Res, 2020, 155: 104689.

[3] фахри с, аббасаде ф, даргахи л и др. Astaxanthin: mecha- nistic review on its biological activities иhealth benefits [J]. Аптека Res, 2018, 136: 1-20.

[4] цай чжун, ты, жиненг. Научно-исследовательский прогресс в производстве астаксантина путем ферментации [J]. Наука о еде, 2015, 36 (23): 358 — 366.

[5] чжан сяона, ху баоди, пей лингпенг и др. Обзор функционального фактора astaxanthin [J]. Пищевые добавки китая, 2017 (8): 208 — 214.

[6] чжоу пиньпин. Исследования по астаксантинскому биосинтезу и регулированию метаболизма в Saccharomyces cerevisiae [D]. Ханчжоу: чжэцзянский университет, 2018.

[7] LI X, WANG X Q, DUAN C L, et al. Биотехнологическое производство астакса-антина из микроалга Haematococcus pluvialis[J]. Биотехнол (биотехнол) Дв, 2020, 43: 107602.

[8] fhaff H J. сравнительное исследование дрожжевых флор, связанных с деревьями японских островов и на западном побережье северной америки [J]. Ferment Technol сегодня, 1972: 759-774.

[9] рамирез дж., нуньес м л., вальдивия р. увеличили производство остаксантина фафией родозимой мутантом, выращиваемой на основе финикового сока из юкка фильфера [J]. J Ind Microbiol Biot, 2000, 24(3): 187-190.

[10] EDWARDS JA, BELLION P, BEILSTEIN P и др. Обзор исследований генотоксичности и канцерогенности крыс с помощью астаксантина [J]. Regul Toxicol Pharm, 2016, 75: 5-19.

[11] фан н, ван с, лю х и др. Синтез De novo астаксантина: от организмов к генам [J]. Тенденции Food Sci Tech, 2019, 92: 162 — 171.

[12] сиань цзы, линь цзиндун, чжоу юнфан и др. Исследования по термоизомеризации астаксантина, преобразованного из натурального лютеина [J]. Пищевые добавки китая, 2019, 30(3): 87-93.

[13] ван дюрен. Прогресс в разработке и применении астаксантина [J]. Jiangxi Food Industry, 2011(3): 38-41.

[14] ERNST H. последние достижения в области промышленного каротеноидного синтеза [J]. Чистый Appl Chem, 2013, 74(11): 1369-1382.

[15] Cui H. биологические функции астаксантина и его применение в животноводстве [J]. Кормовые исследования, 2019, 42(9): 112-115.

[16] BON JA, LEATHERS T D, JAYASWAL R K. изоляция остаксантина — избыточных мутантов фафии родозимы [J]. Биотехнол летт, 1997, 19(2): 109-112.

[17] ZHUANG Y, JIANG G L, ZHU M J. мутагенез плазмы атмосферной и комнатной температуры и astaxanthin  Производство и продажа Из российской федерации Сахарный тростник Багассе гидролисат, фафия родозима мутант Y1[J]. Технологический биохим, 2020, 91: 330 — 338.

[18] лейтон а, флорес л, маки-арвела п и др. Источник питательных веществ Для целей производства По каротеноидам A морские дрожжи Rhodotorulamucilaginosa[J]. J Appl Microbiol, 2019, 127(4): 1069-1079.

[19] аскер д, авад т с, беппу т и др. Очистка и идентификация астаксантина и - его роман. Производная, производимая радиоустойчивостью  Sphin- gomonas astaxanthinifaciens[J]. Метод Mol Biol, 2018, 1852: 171 — 192.

[20] HENKE N A, HEIDER S A E, PETERS W P, et al. Производство ma- rine каротеноида astaxanthin путем метаболической инженерии коринебактерий глутамикума [J]. Март препарат, 2016, 14(7): 124.

[21] IP P F, WONG K H, FENG C. увеличение производства астаксантина зеленым микроальга Chlorelazofingiensis в миксотрофической культуре [J]. Технологический биохим, 2003, 39(11): 1761 — 1766.

[22] KATSUDA T, SHIRAISHI H, ISHIZU N, et al. Влияние силы света и частоты проблескового света от синих светоизлучающих диодов на астаксан-тонкое производство Haematococcus pluvialis[J]. J Biosci Bioeng, 2008, 105(3): 216 — 220.

[23] KIM Z H, KIM S H, LEE H S и др. Увеличение производства астакзантина путем мигания светом с использованием свечей Haematococcus [J]. Фермент Microb Tech, 2006, 39(3): 414-419.

[24] Peng Y, Ren X, Chen L, et al. Научно-исследовательский прогресс по технологии астаксантинских препаратов и ее воздействию на стабильность астаксантина [J]. Китайская нефть и жир, 2019, 44(4): 115-121.

[25] JEEVANANTHAM G, VINOTH M, HUSSAIN J M, et al. Биохимические характеристики пяти морских цианобактерий для их биотехнологического применения [J]. Ж фармакогнозия фитохем, 2019, 8(2): 635 — 640.

[26] ху к с, ли и, оои с W и др. Последние достижения в биопереработке астаксинтина от Haematococcus pluvialis[J]. Биоресурс технол, 2019, 288: 121606.

[27] STOKLOSA R J, JOHNSTON D B, NGHIEM N P. Phafia rhodozyma культивация на структурных и неструктурных сахарах из сладкого сорго для astaxanthin поколения [J]. Технологический биохим, 2019, 83: 9 — 17.

[28] чжу ю. исследование процесса астаксантина ферментации родоторулой глутинисом [д]. Ухань: Huazhong University of Science иTechnology, 2007.

[29] Luo X Z, Lin Y Y, Chen Y J, et al. Оптимизация условий ферментации для производства астаксинтина по методу родоторула глутинис рг -31 [J]. Фуцзянская сельскохозяйственная наука и техника, 2019 (9): 16-21.

[30] ван фуцян, чжан айцин, лю сифэн и др. Прогресс в исследовании процесса активации морских красных дрожжей для выращивания астаксантина [J]. Современная пища, 2018 (20): 149 — 150, 162.

[31] чжао ди. Исследования по оптимизации условий морской культуры красных дрожжей и повышению урожайности астаксантина. Далянь: далянский политехнический университет, 2015.

[32] ANARJAN N, TAN C P. разработка трехкомпонентной стабилизационной системы для производства астаксантиновых нанодисперсий [J]. Питание гидроколлоидное, 2013, 30(1): 437-447.

[33] ван дж., хан д., соммерфельд м р и др. Влияние первоначальной плотности биомассы на рост и астакзантин производства гематококковой плювиалис в наружном фотобиореакторе [J]. J Appl Phycol, 2013, 25(1): 253-260.

[34] юань, цзинь зи, сюй х м и др. Комплекс включения астакзантина с гидроксипропилом-грау-циклодекстерином: уф, FTIR, 1H NMR и исследования молекулярной модели ing [J]. Карбогид полим, 2012, 89(2): 492-496.

[35] пэн сяолан. Исследования физиологической функции, производства и применения астаксантина [J]. Современное животноводство, 2005 (11): 50-52.

[36] сюй кэронг. Исследование мер по увеличению производства астаксантина [D]. Тайвань и Франция#39; ан: шаньдунский сельскохозяйственный университет, 2013.

[37] ци с. стратегии улучшения синтеза астаксантина пичией пасторис и анализ характеристик регулирования метаболизма [D]. Пекин: китайский сельскохозяйственный университет, 2016.

[38] сяо а, ю г, цай х и др. Стратегии регулирования pH в пичиа пасториз ферментация и их влияние на астаксантин синтез [J]. Китайский журнал пищевой науки, 2015, 15(1): 66-72.

[39] чжу сяоли, лян шизхон, Дэн маоченг и др. Исследования и разработки в области продовольствия, 2011, 32(4): 160 — 164.

[40] васкес м., Мартин а. Оптимизация фафии родозикониновой культуры методом поверхностной реакции [J]. Biotechnol Bioeng, 2015, 57(3): 314-320.

[41] STOKLOSA R J, JOHNSTON D B, NGHIEM N P. использование сладкого сорго сока для производства астаксантина в качестве побочного продукта биопереработки фафией родозимой [J]. М. : наука, 2018, 6(3): 3124 — 3134.

[42] OKAGBUE R N, LEWIS M. Appl Microbiol Biot, 1984, 20(1): 33-39.

[43] CALO P, MIGUEL T, VELAZQUEZ J B, et al. Мевалоновая кислота увеличивает трансастаксантин and  - каротеноид Биосинтез в Phafia rhodozyma [J]. Biotech Lett, 1995, 17(6): 575-578.

[44] чжу сяоли, лян шизхон. Исследование по выращиванию красных дрожжей для производства астаксантина в 50 л и 500 л реакторах [J]. Современные продукты питания, 2016 (13): 106 — 110.

[45] ху сяндун, Пан лингян, е мао и др. Выбор высокопроизводительных штаммов родоторулы астаксантина и оптимизация параметров ферментации [J]. Наука и технологии пищевой промышленности, 2016, 37 (5): 142 — 147.

[46] сон чао. Применение метаболической сети в астаксантинском биосинтезе [D]. Далянь: далянский политехнический университет, 2010.

[47] чжу сяоли и др. Исследования и разработки в области продовольствия, 2011, 32(4): 160 — 164.

[48] джин джин. Однобазовая эволюция мутации и геном рекомпорации астакзантина Saccharomyces cerevisiae [D]. Тяньцзинь: тяньцзинский университет, 2018.

[49] Jiang Xinglong, Hong Qinglin, Cai Huinong и др. Влияние процесса откорма на производство астаксантина двумя штаммами пичи пасторис [J]. Китайский журнал микробиологии, 2013, 40(11): 1996-2004.

[50] фу шуанг, шэнь ниньян, ни хуэй и др. Воздействие подачи этанола на развитие производства астаксантина в пичиа пасторальд-ферментация [J]. Журнал джимейского университета (издание естественных наук), 2017, 22(4): 20-27.

[51] лю з к, чжан ж ф, чжэн и г и др. Улучшение производства астаксантина новым изолированным фафией родозима мутантом с низкоэнергетическим ионным лучом имплантации [J]. J Appl Microbiol, 2008, 104(3): 861-872.

[52] рамирез дж., гутьеррес х, гшадлер а. оптимизация остаксана-тонкого производства фафия родозима через факторный дизайн и методика реагирования поверхности [J]. J биотехнол, 2001, 88(3): 259-268.

[53] францова г и, бешкова д м. каротеноиды из родоторулы и фафии: дрожжи биотехнологического значения [J]. J Ind Microbiol Biot, 2009, 36(2): 163 — 180.

[54] миао л, чи с, у м и др. Дерегулирование фитоэна-грау-каротин син-тазы приводит к деподавлению астаксантинового синтеза при высокой концентрации глюкозы кон-центрации в фафии родозимаастантина-избыточного штамма MK19[J]. BMC Microbiol, 2019, 19(1): 133.

[55] мейер п с., през дж. Мир J Microb Biot, 1994, 10(2): 178-183.

[56] NI H, CHEN Q H, HE G Q, et al. Оптимизация кислотной экстракции as- таксанина из фафии родозимы [J]. J Zhejiang U Sci B, 2008, 9(1): 51-59.

[57] тенг чанджинг, чжан ли, цинь сон. Физиологические функции, биобезопасность и потенциал применения астаксантина [J]. Хубэй сельскохозяйственные науки, 2006 (6): 827-829.

[58] мартинес дж., шоттрофф ф., хаас к., и др. Оценка технологии импульсных электрических полей для улучшения последующего каротеноида ex- traction из сушеных дрожжей родоторула глутини [J]. - продукты питания Химия, 2020, 323: 126824.

[59] GAO J, FANG C L, LIN Y Z и др. Усиленная экстракция астаксантина us- ing Водный бифазик Системы организации объединенных наций В состав входит: По науке и технике Жидкости для жидкостей and  Фосфат калия [J]. Химия пищевых продуктов, 2020, 309: 125672.

[60] LIU Z W, ZENG X A, CHENG J H и др. Эффективность и сравнение новых методов разрушения клеточной стенки при экстракции астаксинтина из гематококковой плавиалии [J]. Int J Food Sci Technol, 2018, 53(9): 2212 — 2219.

[61] сон, сумей. Извлечение, изоляция и очистка астаксантина от антарктических крильных снарядов [D]. Вуси: цзяньнаньский университет, 2013.

[62] хуан кайшен, ляо чжиинг, сюй чуньху и др. Оптимизация извлечения, разделения и очистки астаксантина от дрожжевой шизохитрия sp. J. естественные исследования и разработки продукта, 2018, 30 (11): 1858-1862, 1877.