Исследование по изменению и синтезу гиалуроновой кислоты

Гиалуроновая кислота (га) является одним из видов гликозаминогликанов, который относится к группе кислотных мукополисахаридов- да. Она широко распространена в различных частях человеческого тела, и кожа также содержит большое количество гиалуроновой кислоты. В 1934 году профессор майер из колумбийского университета в США стал первымИзолировать гиалуроновую кислотуОт животного юмора крупного рогатого скота [1]. В организме гиалуроновая кислота представляет собой многофункциональную матрицу, которая обладает целым рядом важных физиологических функций, таких как регулирование белков, содействие рассеиванию и транспортировке воды и электролитов, смазка суставов, регулирование проницаемости стенок кровеносных сосудов, содействие заживлению ран и т.д. Самое главное, гиалуроновая кислота оказывает особое водоудерживающее действие. В настоящее время это лучшее увлажняющее вещество, встречающееся в природе, и известно как идеальный природный увлажняющий фактор (NMF). (2% водный раствор чистой гиалуроновой кислоты может надежно удерживать 98% влаги.) Благодаря своим уникальным физическим и химическим свойствам и физиологическим функциям гиалуроновая кислота широко используется в медицине и биологических материалах.

В настоящее времяХимическая структура гиалуроновой кислотыБыло ли это разъяснено карлом майером#39;s лаборатория в 1950 - х годах [1]. Гиалуроновая кислота-полимер. Это высокомолекулярный мукополисахарид прямой цепи, состоящий из d-глюкуроновой кислоты и n-ацетилглюкозамина. D- глюкуроновая кислота и n-ацетилглюкозамин связаны узами β 1,3-glycosidic, а disaccharide - β 1,4-glycosidic. Два моносакхарида в молекуле состоят в соотношении 1:1 молярный. Может быть до 25 000 дисаксаридных единиц. Молекулярный вес гиалуроновой кислоты в организме человека варьируется от 5000 до 20 000 000 далтонов [2,3]. Структурная формула гиалуроновой кислоты показана на рис. 1.

Гиалуроновая кислота растворимаВ воде, но не растворимых в органических растворителях. Он имеет много свойств, общих с другими природными мукополисахаридами. Гиалуроновая кислота, извлеченная из живых организмов, является белой по цвету, без запаха и высокогигроскопической. Гиалуроновая кислота в растворе хлористого натрия диссоциируется из-за карбоксильной группы в глюкуроновой кислоте, производя H+ и делая ее кислотной полиионной анионной, давая гиалуроновой кислоте свойства кислой мукополисахариды [4,5]. Хотя гидроксильные группы на молекуле гиалуроновой кислоты расположены в постоянной ориентации, образуя гидрофобные области на молекулярной цепи, наличие водородных связей между моносакхаридами в цепочке молекул гиалуроновой кислоты приводит к созданию жесткой колоннарной спиральной структуры в пространстве [6]. Наличие большого количества гидроксильных групп внутри колонны делает гиалуроновую кислоту высокогидрофилической. Таким образом, гидрофилические и гидрофобные свойства гиалуроновой кислоты позволяют гиалуроновой кислоте с концентрацией менее 1‰ сформировать непрерывную трехмерную структуру сотовой сети [5].

Молекулы воды заперты внутриСеть гиалуроновой кислотыВ результате полярных и водородных связей с молекулами гиалуроновой кислоты, и не легко теряются. Исследования показали, что гиалуроновая кислота может адсорбировать в воде примерно в 1000 раз больше собственного веса, чем другие полисахаридные соединения. Таким образом, гиалуроновая кислота, как водоудерживающий агент, в настоящее время является лучшим природным веществом, найденным в природе для удержания воды.

Гиалуроновая кислота сочетается с белкамиДля формирования протеогликанских молекул с более высоким молекулярным весом, которые являются важными компонентами для поддержания влаги в сыпучих соединительных тканях. Эта гелеподобная структура гиалуронического кислотно-белково-водяного соединения связывает клетки вместе, позволяя им выполнять нормальные метаболические функции при сохранении влажности тканей. Он также защищает клетки от вирусов и бактерий, предотвращая инфекцию, и придает коже определенную степень сопротивляемости и эластичности [7, 8].

1 метод приготовления гиалуроновой кислоты

Традиционный метод определенияГотовит гиалуроновую кислотуЯвляется ли метод экстракции, который использует сырье, которое, как правило, свежие ткани животных, такие как пуповинные связки человека, стекловидные тела животных, петухи и#- 39; Расчески и хрящи китов. Это сырье трудно найти и дорого, а содержание гиалуроновой кислоты в этих материалах очень низкое, что непосредственно приводит к низкой урожайности. Кроме того, процесс извлечения является сложным, а операционные подразделения громоздкими. Используется большое количество ферментов и органических растворителей, а высокое содержание примесей затрудняет очистку, что в определенной степени повышает стоимость гиалуроновой кислоты. Поэтому гиалуроновая кислота, получаемая путем экстракции, не может удовлетворять постоянно расширяющиеся потребности в области исследований и применения. В целях поиска новых источников овд и снижения затрат научные исследователи начали использовать метод ферментации для производства гиалуроновой кислоты [7].

Метод ферментации для приготовления гиалуроновой кислоты можно проследить с 1970 - х годов, но он не был разработан в больших масштабах. Только в 1985 году сисайдо в японии впервые сообщил об использовании стрептококка для производства гиалуроновой кислоты, а затем метод ферментации для приготовления гиалуроновой кислоты добился большого прогресса. Согласно сообщениям, гиалуронические кислотные бактерии в основном Streptococcus групп A/данные отсутствуют.и C в Berger' руководство по s, такие как Streptococcus pyogenes (группа A), Streptococcus zooepidemicus (группа 200), Streptococcus equi (группа C), Streptococcus equi группа C, Streptococcus agalactiae группа C и Clostridium perfringens. Группа а в основном является пиогенным стрептококком, патогеном человека, и не подходит в качестве производственного штамма. В настоящее время он используется редко. Группа C стрептококк не является патогеном человека и относительно подходит для промышленного производства. В последние годыПромышленное производство гиалуроновой кислотыИспользование стрептококка pyogenes вышло на промышленную стадию за рубежом. В таблице 1 сопоставляются основные различия между методом экстракции и методом ферментации [7-9].

Для метода экстракции различается сырье, а также различается процесс экстракции и очистки [9]. Например, копскомб имеет низкое содержание жира иВысокое содержание гиалуроновой кислоты- да. После грунта, он может быть непосредственно извлечен с дистиллированной водой несколько раз или нагревается до 40-50 градусов для извлечения. Раствор гиалуроновой кислоты с выходом 0,47% может быть получен. Для пуповинных нитей человека содержание жира выше, чем у куриных комков. Они могут быть извлечены несколько раз с помощью разбавленного щелочного раствора (pH=8) при 60 градуировке или извлечены со смесью воды и хлороформа (20:1/ вт: вт) и промыты с равным объемом хлороформа для дальнейшей обезжиривания. Выход гиалуроновой кислоты составляет 0,2%. При экстракции гиалуроновой кислоты из стекловидного юмора в качестве экстракционного раствора обычно используется раствор NaCl (0,1 -1 м), а выход может достигать 0,64-2,4%. Пигскин содержит много жира и является жестким и не легко грунта, поэтому он, как правило, сжижен в растворе NaOH на 37°C в течение периода времени, а затем нейтрализован с 50% уксусной кислоты. Хотя выход гиалуроновой кислоты может достигать около 0,7%, процесс очистки является относительно сложным.

В настоящее времяКачество гиалуроновой кислотыПодготовка с использованием метода ферментации зависит главным образом от следующих четырех аспектов: выбор штамма, выравнивание среды, оптимизация процесса ферментации и процесс разделения и очистки. Преимущества метода биологической ферментации заключаются в Том, что продукт не ограничивается сырьевыми ресурсами, процесс прост и стоимость низкая. Поэтому метод ферментации в настоящее время является предпочтительным для приготовления гиалуроновой кислоты. Основными бактериями, используемыми в методе ферментации для производства гиалуроновой кислоты, являются Streptococcus zooepidemicus, Streptococcus equi и Streptococcus equiО (1)-like.

Методы ферментации дляПроизводство гиалуроновой кислотыПодразделяются на аэробную ферментацию и анаэробную ферментацию. Аэробная ферментация имеет высокую урожайность и производит гиалуроновую кислоту с высоким молекулярным весом. В процессе ферментации температура, как правило, составляет 37 градусов, и значение pH должно контролироваться в диапазоне 6,0-8,5. Среда с слишком большим количеством кислоты или щелочи повлияет на рост бактерий и снизить урожайность гиалуроновой кислоты. Для повышения урожайности гиалуроновой кислоты на различных этапах ферментации могут также использоваться различные уровни растворения кислорода. Кроме того, вязкость брота ферментации может напрямую отражать выход гиалуроновой кислоты. Псевдопластичность гиалуроновой кислоты приводит к снижению вязкости раствора при высокой скорости сгиба. Высокая скорость смешения может значительно увеличить молекулярный вес гиалуроновой кислоты, но слишком высокая скорость может уничтожить молекулы и уменьшить молекулярный вес гиалуроновой кислоты. Таким образом, скорость перемешивания обычно контролируется при 100-800 об/мин. Выход гиалуроновой кислоты может быть также увеличен за счет добавления небольшого количества уракильной, глутаминовой и апартиковой кислоты в брот ферментации или за счет добавления лизозима [10-13].

В настоящее время добыча га в китае все еще находится в стадии использования в качестве сырья человеческих пуповинных шнуров и куриных комбайнов. Шанхайский университет сообщил о методе извлечения гиалуроновой кислоты из свиной кожи, а такжеМолекулярный вес гиалуроновой кислотыПроизведено около 106. Некоторые люди используют микробную ферментацию для производства гиалуроновой кислоты, и, согласно сообщениям, урожайность составляет 4,6 г/л, но молекулярный вес составляет всего 500 000. Кроме того, некоторые люди также использовали гравитационные лучи в сочетании с мутагенезом магнитного поля для получения высокоурожайных штаммов гиалуроновой кислоты. Например, чэнь юнхао [14] использовал ультрафиолетовое и 60когравитационное облучение для мутации и получил штамм негемолитических бактерий NC1150, что увеличило урожайность и относительный молекулярный вес га.

2 улучшение свойств гиалуроновой кислоты как биоматериала

Чистая гиалуроновая кислотаИмеет недостатки в Том, что легко растворяется в воде, быстро поглощается, имея короткий срок пребывания в тканях, и плохие механические свойства, что ограничивает его использование в ситуациях, когда материалопрочность и механическая прочность необходимы. Для того чтобы гиалуроновая кислота более широко использовалась в области биоматериалов, необходимо химически модифицировать ее для оптимизации ее свойств и расширения сферы ее применения. Для улучшения механических свойств гиалуроновой кислоты и контроля скорости ее разложения гиалуроновая кислота может быть химически модифицирована или переплетаться. Гиалуроновая кислота имеет функциональные группы, такие как гидроксил, карбоксил и ацетамидо, и может быть модифицирована путем перекрестного соединения, эстерификации, гравирования, молекулярной модификации и комбинирования. Химически модифицированная гиалуроновая кислота явно обладает основными свойствами карбоксиловых кислот и/или спиртов. Карбоксиловые кислоты и спирты модифицируются путем эстерификации и сочетаются с гидразиновыми соединениями, дитиотреитолом или дисульфидами [3, 6]. После модификации гиалуроновая кислота обладает рядом хороших свойств, таких как механическая прочность, вязкость, реологические свойства и устойчивость к разложению гиалуронидазы, сохраняя при этом свою изначальную биосовместимость.

2.1 ковалентная переплетение гиалуроновой кислоты с полиэтиленгликолем

Текущие исследования показывают, что механические свойства и скорость разложения гелей с перекрестной гиалуроновой кислотой могут контролироваться степенью перекрестной связи и молекулярным весом перекрестной молекулы. Гиалуроновая кислота может быть ковалентно переплетена с диаминами полиэтиленгликоля на различных уровнях переплета. Полиэтиленгликоль был выбран в качестве связующей молекулы, потому что он биосовместим и гидрофиличен. Пег растворима в водном растворе и коммерчески доступна в различных молекулярных весах. Эластичные свойства геля обеспечиваются деформируемыми цепями привязки, в то время как механические свойства обеспечиваются структурноСтабильные цепи гиалуроновой кислоты.

Изучено влияние степени перекрестной связи на механические свойства и поведение гиалуроновых кислотных гелей. Гели из гиалуроновой кислоты получают из ковалентно переплетенной гиалуроновой кислоты и двух различных молекулярных весов полиэтиленгликоля с различной степенью переплетения. Эксперименты показали, что в теоретической степени перекрестных связейГели из гиалуроновой кислотыУвеличивается с 0 до 20%, эластичный модуль постепенно увеличивается. Однако, когда теоретическая степень перекрестной связи увеличилась до более 20%, эластичный модуль снизился. Когда теоретическая степень перекрестной связи составляла 20%, эластичный модуль увеличивался, а молекулярный вес перекрестной связи уменьшался. При теоретической степени перекрестной связи 20% скорость разложения В случае необходимостиvitro гелей гиалуроновой кислоты снизилась с уменьшением молекулярного веса перекрестных молекул. По мере увеличения теоретической степени перекрестной связи с 0 до 20% скорость разложения перекрестной гиалуроновой кислоты снижается. Однако, если теоретическая степень перекрестной связи поднимается выше 30%, то нет существенной разницы в скорости разложения [15, 16]. Дальнейшее развитие гиалуроновых кислотных гелей на основе углубленных исследований их контролируемых механических свойств и темпов разложения обеспечит широкий спектр применения медицинских и биологических материалов.

Гиалуроновая кислотаМодифицируется путем совместной привязки его к диаминам полиэтиленгликоля различных молекулярных весов. Механические свойства и скорость разложения гелей с перекрестной гиалуроновой кислотой можно контролировать путем изменения молекулярного веса и степени перекрестной связи между перекрестными молекулами. Установлено, что взаимосвязанные гиалуроновые кислотные гели обладают управляемыми механическими свойствами и скоростью разложения, что может обеспечить более широкий спектр биомедицинских применений, таких как трансплантация клеток и доставка лекарств.

2.2 соединение гиалуроновой кислоты с полигидразидными соединениями

Гиалуроновая кислота может быть переплетенаС различными соединениями гидразида для получения гелей с различными физико-химическими свойствами в различных условиях перекрестной связи. Гиалуронидазы делают гель устойчивым к гиалуронидазе. Эксперименты показали, что разложение геля не зависит от концентрации связующего вещества, что указывает на то, что разложение происходит только на стыке геля. Стабильность гиалуроновых кислотных гелей в кислотных средах и их медленное растворение при pH > 7.0 указать их потенциальную роль в контроле за поставками наркотиков в щелочной среде [15-17].

Соединения гидразида могут использоваться в качестве связующих веществИзменить гиалуроновую кислотуГидрогели в более механически жесткие и хрупкие гели. Гиалуроновая кислота может стать стабильным ха-адипоилдигидразидом (га-адг) производным в присутствии большого количества адипинового дигидразида [18]. Пол булпитт [19] и другие показали, что химическая модификация гиалуроновой кислоты эфирными соединениями гидразидов, устойчивыми к гидролизу и не допускающими никакой рекомпоновочной активности, возможна. Были синтезированы новые гидрогели с хорошей биосовместимостью, такие как ха-гидразид и ха-амид, и в некоторой степени растворимость в воде была снижена для достижения эффекта медленно выпускаемых препаратов [20].

2.3 гиалуроновая кислота переплетается с дисульфидом

Гиалуроновая кислота может быть связана с дисульфидом. Например, определенное количество гидразинолиза 3,3'- дитиопропионовая кислота (DTP) может быть добавлена в водный раствор гиалуроновой кислоты, и pH раствора реакции может быть скорректирован от кислоты до основания с помощью HCl и NaO- эйч.В процессе добавляется твердый карбодимид (EDC), и, наконец, разделение, сушка и очистка могут быть использованы для получения меркаптоПроизводная гиалуроновой кислоты(HA-DTPH) [20].

Эксперименты показали, что дисульфид пересекаетсяПроизводная меркапто-гиалуроновой кислоты(HA-DTPH) гель разлагается медленно как in vivo, так и in vitro, и скорость разложения может контролироваться путем изменения степени дисульфидной взаимосвязи. В то же время гели гиалуроновой кислоты имеют потенциальное клиническое применение в лечении ран и восстановлении тканей [21].

2.4 эстерификация гиалуроновой кислоты

Карбоксильная эстерификация

В настоящее времяКарбоксиловая группа гиалуроновой кислотыМожет пройти эстерификацию жирными спиртами или ароматическими спиртами для формирования эстерифицированных производных [21]. После эстерификации реологические свойства раствора HA значительно улучшаются, образуя слабую коллоидную сетевую структуру. Растворимость эстерифицированных производных гиалуроновой кислоты снижается по мере повышения степени эстерификации, а высокоэстерифицированные производные являются нерастворимыми в воде. Кроме того, степень эстерификации оказывает значительное воздействие на темпы деградации. Это может объясняться тем, что гидрофобные фрагменты полностью эстерифицированного вещества делают сеть полимерных цепей более жесткой и стабильной, что делает ее менее восприимчивой к ферментативной деградации. Частично эстерифицированное вещество является более деформируемым и легче комбинируется с водой.

Производные гиалуроновой кислотыМожет быть изготовлен в пленку и волокна с использованием некоторых традиционных технологических методов, высушен в губки или приготовлен в микросферы путем распыления, сушки, экстракции и испарения, и может быть использован в качестве носителя материалов для контролируемого высвобождения наркотиков. Кроме того, данный вид гиалуроновой кислоты эстерифицированной производной может быть использован в развитии искусственной кожи и искусственного хряща, культуры мезенхимальных стволовых клеток, а также в антибиообрастающих и антикоррозионных целях [20].

- гидроксификация

При реакции бутирового ангидрида и триметилпиридиновой соли гиалуроновой кислоты с низким молекулярным весом диметилформатид (ДМФ), содержащий диметиламинопиримидин, может соединяться с бутировой кислотойГиалуроновая кислота- да. Поскольку бутироновая кислота может вызывать дифференциацию клеток и препятствовать росту опухолевых клеток, гиалуронановый бутират может использоваться в качестве нового материала целевой системы доставки лекарственных средств.

Внутренняя эстерификация

Внутренняя эстерификацияПроизводные гиалуроновой кислотыДостигается внутримолекулярным и межмолекулярным соединением гидроксильной и карбоксиловой групп гиалуроновой кислоты. Прессато [22] и белини [23] и др. предварительно обработали раствор диметилсульфоксида (дмсо) гиалуроновой кислоты триэтиламином, преобразовав гиалуроновую кислоту в [R4N] + га. Затем 2- хлоро -1- метилодиридин использовался в качестве связующего вещества для внутренней эстерификации гиалуроновой кислоты, что приводило к образованию производных гиалуронанов лактонов с внутримолекулярной и межмолекулярной эстерификацией. Этот метод может быть использован в хирургии, чтобы уменьшить спайки после брюшной хирургии и акушерской и гинекологической хирургии. Внутренняя эстерифицированная производная гиалуроновой кислоты может также использоваться в качестве леса для ремонта повреждений тканей и регенерации хряща и кости.

2.5 модификация трансплантата

Гиалуроновая кислотаМогут быть вложены на натуральные или синтетические полимеры с использованием связующих веществ для формирования новых материалов с измененными биомеханическими и физико-химическими свойствами [20].

Этот процесс показан на рис. 2. HA также может быть выгравирован на поверхности липосом для обеспечения целеопределения и экранирования, как показано на рис. 3.

После этогоГиалуроновая кислота модифицированаС дигидразидом, образующим производную ха-адг, молекулы препарата могут быть прикреплены к ха-адг, чтобы сформировать ха-адг-связанные препараты. Гиалуроновая кислота может обеспечить применение новых лекарственных средств и контролируемое высвобождение. Общий процесс является следующим: после того как дигидразид связан с HA, оставшийся NH2 гидразида может быть восстановлен с другими карбоксильными группами в молекуле HA, и внутри-или межмолекулярное перекрестное соединение произойдет. В то же время, оставшийся NH2 может быть подключен к активной точке препарата, чтобы связать препарат с гиалуроновой кислотой, или препарат может быть сначала подключен к полигидразиду, а затем привит молекуле ха, чтобы получить гиалуроническую кислотную систему препарата. Структура показана на рис. 4.

2.6 составная модификация

Гиалуроновая кислота является неантигенной молекулойМожет использоваться в комбинации с другими материалами без воспаления или иммунной реакции. Например, гиалуроновая кислота может сочетаться с коллагеном [20], который является основным структурным белком во внеклеточной матрице. Сочетание гиалуроновой кислоты и коллагена дает ему хорошие механические свойства. Гиалуроновая кислота может также сочетаться с читосаном (CS) и гелятином [20], образуя композитный материал CS- gel-ha (chitosan- geltin-Hyaluronic acid). Этот композитный материал может эффективно улучшить сцепление клеток с поверхностью материала, повысить выживаемость клеток на поверхности материала и позволить клеткам как можно скорее войти в нормальный цикл роста и распространения. Гиалуроновая кислота может также сочетаться с синтетическими полимерами, такими как поли (лактид-ко-гликолид) (PLA/PLGA), который является нетоксичным, полностью биоразлагаемым синтетическим полимером, который легко поддается переработке, разложению и имеет контролируемую скорость разложения. Смешивание PLA или Организация < < женщины за мир > >с HA [24] может снизить скорость разложения га и продлить время нахождения га в тканях.

3 применение гиалуроновой кислоты в области биоматериалов

Производные гиалуроновой кислоты Полученные путем модификации могут улучшить специфические свойства по мере необходимости, что значительно расширяет применение гиалуроновой кислоты в области биоматериалов. В настоящее время гиалуроновая кислота или ее производные используются в различных областях, включая хирургическое антиадгезию, артрит, офтальмологическое лечение, местные носители лекарственных средств, тканевую инженерию и др. [25-29]. Применение различных модифицированных гиалуроновых кислот показано в таблице 2.

4. Выводы

В настоящем документе содержится обзорМетоды приготовления гиалуроновой кислотыИ модификация и соединение гиалуроновой кислоты. В настоящее время исследования по подготовке, модификации и компоновке гиалуроновой кислоты достигли отрадного прогресса, но еще предстоит пройти определенный путь, прежде чем ее можно будет использовать в клинических применениях. Кроме того, гиалуроновая кислота является своего рода биопоглощаемым материалом с высокой вязкостью, пластичностью, проницаемостью и уникальными реологическими свойствами, а также хорошей биосовместимостью. Благодаря своим сильным увлажняющим свойствам и хорошей биосовместимости, он также стал важным сырьем для биомедицинских применений. Широко используется в офтальмологии, ортопедии и даже в хирургии, педиатрии, неврологии и других областях. Кроме того, гиалуроновая кислота может эффективно предотвратить послеоперационное адгезию без побочных эффектов. Он также может быть использован в качестве носителя наркотиков и является популярным новым биомедицинским материалом. Однако гиалуроновая кислота также имеет недостатки, которые необходимо компенсировать различными химическими изменениями для повышения ее механической прочности, устойчивости к деградации гиалуронидазы и т.д. Общие методы модификации включают перекрестную увязку, эстерификацию, трансплантацию, молекулярную модификацию и компаундирование. Поэтому углубленные исследования гиалуроновой кислоты продолжаются. Текущие исследования направлены на улучшение свойств гелей гиалуроновой кислоты и повышение их эффективности в целях содействия более широкому использованию этих материалов в области биоматериалов.

Ссылка на сайт

[1] вайсманн B, мейер, В то же время Ii. Структура Соединенные Штаты америки Гиалоби-уроническая  - кислота;  и  Соединенные Штаты америки  - гиалуроническая болезнь  - кислота;  Из российской федерации  Пуповина [J]. - J. Новости компании Am По химии и химии Soc,1954,76(7):1753-1757.

[2] саари H.  Дифференциальный диагноз: Последствия для окружающей среды Соединенные Штаты америки Реакция на изменение Кислород в воздухе Сюл - - В чем дело? По состоянию на Москва (Россия) Ii. Общая информация - жидкость и - очищенные, очищенные По правам человека Э-э... - с чернилами Спинной мозг, Воспаление,1993,17(4): 403-415.

[3] Джон  О. механическая обработка Недвижимость в болгарии  и  Деградация окружающей среды Будь-гавьер Соединенные Штаты америки - гиалурони. - кислота; Гидрогели (гидрогели) B. перекрестные связи На различных форумах B. перекрестная увязка Плотность [J]. Углеводы (углеводы) Poly — РВК,2007,10:1-7.

[4] Пан хонгмей. Обзор текущего состояния исследований гиалуроновой кислоты [J]. Питание и ферментация сычуана, 2003, 39(1): 1-5.

[5] J E Scott, C Cummings, A Brass, et al. Вторичные и третичные структуры гиалуронана в водном растворе, исследованные вращающейся теневой электронной микроскопии и компьютерным моделированием [J]. Bochemial Journal, 1991, 274(3): 699-705.

[6] Evered D, wilan J. The biology Соединенные Штаты америкиhyaluronan, ciba foundation symposium [J]. Джон уайли и Сыновья, 1989, 143: 6 — 15.

[7] Лу руймин. Текущее состояние исследований гиалуроновой кислоты (га) в стране и за рубежом [J]. Журнал Ningxia Agricultural College, 2002, 22 (1): 62-64.

[8] Weigel P H, Hascall V C, Tammi M. Hyaluronan synthases [J]. Biol Chem 1997, 272: 13997-14000.

[9] Qi Yanrong. Подготовка и применение гиалуроновой кислоты [J]. Образовательный и педагогический форум, 2010, 20: 222 — 223.

[10] лян тяньцзуо. Исследования по производству гиалуроновой кислоты путем микробной ферментации [м]. Хэбэй сельскохозяйственный университет, 2010: 16-18.

[11] го сюэпин, ван чунси, цуй дапенг. Подготовка гиалуроновой кислоты путем ферментации [J]. Ежедневная химическая промышленность, 1994 (2): 47-48.

[12] го сюэпин, ван чуньси, линг пейшу и др. Обзор производства гиалуроновой кислоты и ее ферментации [J]. Китайский журнал биохимических препаратов, 1998, 19 (4): 209.

[13] рао у М, сурешкумар G. Г. - к. - импровизаторы. in  Био-реактор 3. Производительность Соединенные Штаты америки - бесплатно; Радикалы: hociin-утенец Избыточное производство Соединенные Штаты америки < < шантан > > - жвачка? - да. Из российской федерации Ксан - -

Томомаскампестрис (tomomascampestris) и В его рамках   Механизм [J]. Био-технол Bioeng,2001,72(1):62-68.

[14] чэнь юнхао, ван цян. Мутагенное размножение бактерий, производящих гиалуроновую кислоту [J]. Microbiology Bulletin, 2009, 36(2): 205 — 210.

[15] манускиатти. Гиалуроновая кислота и кожа: заживление ран и старение [J].  Int J Dermatol, 1996, 35(8): 539-544.

[16] лоран т. гиалуронан [дж]. FASEB J, 1992, 6: 2397-2403.

[17] Koen P Vercruysse, Dale С. О.Marecak, James F Marecek, et al. Синтез и экстракорпоральное разложение нового поливалентного гидразида, переплетенного Hy- дрогелей гиалуроновой кислоты [J]. Bioconjugate Chem, 1997, 8, 686-694.

[18] линг пейшу, чжан тяньминь. Кислота гиалуроновая [м]. Пекин: China Light Industry Press, 2000, 25: 188-194.

[19] Павел Булпитт, дэниел - эшлиман. Новая версия сайта Ii. Стратегия Для химической промышленности 3. Изменение  Соединенные Штаты америки - гиалуроническая болезнь  - кислота; Подготовка к конференции Соединенные Штаты америки Функциональное обеспечение Производные финансовые инструменты и С их стороны - использование В области прав человека 1. Формирование вооруженных сил Соединенные Штаты америки Роман о любви Биосовместимость с системой Гидрогели [J]. - J. Биомед (биомед) - добрый день. Res,1999,47(2):152- 169.

[20] ю сюэли, ван чуаньдун, ли баолу и др. Модификация гиалуроновой кислоты и ее применение [J]. Биомедицинские инженерные исследования, 2005 (1): 61 — 66.

[21] борзакьелло А, амброзио Сеть < < л нетуорк > > 1. Формирование вооруженных сил С низким уровнем дохода  10. Молекулярная структура  Вес (кг)  - гиалуроническая болезнь - кислота;  Производные финансовые инструменты [J]. - J. Биоматер (биоматер) Sci-i (Sci) - полимер (полимер) Эдн,2001,12(3) : 307 — 316.

[22]Pressat o  - ди, павезио - A. B. биоматериалы  для Предотвращение торговли людьми После хирургического вмешательства 3.2 сцепления с дорогой Включает: Соединенные Штаты америки     Хьял-урунический - кислота; Общий объем поступлений Ives [P]. WO :9707833,1997.

[23] белини D, папаре11a A,O, c - реган? - да. - м, каллегаро L. автомобильная промышленность Взаимосвязь между ними - гиалуроническая болезнь - кислота; и   По теме: Пхар-мачестик  Статьи и предложения  для  В настоящее время  Лечение и уход  of   Ar-тропаты [P]. WO :9749412,1997.

[24] Юлия Пели ли вы Ё н, чжон! Хван (Hwan) О, чжэ э. Чхан (Китай) Ким и др. al.In - привет, виво. 13. Конъюнктиваль По реконструкции и восстановлению Использование программного обеспечения Мо - - В соответствии с законом  PLGA   1. Трансплантация  для  Уменьшение объема ресурсов  - шрам. - шрам.    1. Формирование вооруженных сил и Схватки [J]. Биоматериалы,2003,24: 5049- 5059.

[25] лутолф M  - п, рейбер G. Г. - п, зиш A  H,et и Al.cell-реагирующий синтетик  Гидрогели [J]. 1 2 3 4  Mater,2003, 15:888-892.

[26] хуан цзянь, бао лей, мао сюань и др. Сополимер agaros -hyaluronic acid в качестве инсулина [J]. Журнал материаловедения и инжиниринга, 2009, 27(1): 43 — 46.

[27] Lee H, Lee K, Park TG. Гиалуроническая кислота -paclitaxel conjugate micelles: синтез, характеристика и антиопухолевая активность [J]. Bioconjug Chem, 2008, 19(6): 1319-1325.

[28] Kumar A, Sahoo B, Montpetit A и др. Разработка гибридных магнитных наночастиц hyaluronic acid-Fe2O3 для целевой доставки пептидов. Наномедицина, 2007, 3(2): 132 — 137.

[29] ван чао, чжан минчунь. Прогресс в подготовке и применении гиалуроновой кислоты в качестве лекарственного материала. Китайская фармацевтическая биотехнология, 2009, 4(6): 452-454.