4 методы испытания Haematococcus Pluvialis Astaxanthin

Астаксантин, химически назван 3,3 и#39;- дигидрокси-бета, бета'- каротин -4,4' дион принадлежит каротеноидам кето- да. Исследования показали, что астаксантин является сильнейшим природным антиоксидантом [1-2]. Астаксантин обладает антиоксидантными, антирадиационными, антистареющими, противоопухолевыми и сердечно-сосудистыми заболеваниями функциями профилактики и лечения [2-3] и поэтому имеет чрезвычайно высокую экономическую ценность. Используется в медицинских продуктах, лекарствах, кормовых добавках, косметике, функциональных продуктах питания, пищевых добавках и других областях [4].

The maВ случае необходимостиraw materials дляtheПроизводство астаксантинаПолучаются из креветок и ракушек крабов [3,5], гематококковой плювиалис [4] и родоторула глутини [6]. В их числе - гематококкpluvialis может аккумулировать астаксантин до 5% сухого веса в стрессовых условиях. Так как структура астаксантина содержит два атома chiral C, структура в - гематококкpluvialis составляет 3S, 3S' синтетическая форма представляет собой смесь киралов, в основном 3R, 3R'. Haematococcus pluvialis считается лучшим источником естественного астаксантина производства.

Haematococcus pluvialis образует гематококковую оболочку, похожую на гематологическую оболочку, наружную стену после стресса. Когда пигмент в клетках извлекается, традиционным растворителям трудно проникнуть внутрь клеток для извлечения пигмента. Как правило, необходимо комбинировать метод разрушения клеточных стен. Во-вторых, астаксантин в клетках Haematococcus pluvialis в основном существует в виде астаксантин эфиров, то есть астаксантин молекул моноэфира и астаксантин дистер молекул с различными цепочек acyl. Анализ HPLC трудно обеспечить базовое разделение всех молекул, и молекулярный вес отличается при расчете содержания.

In addition, - астаксантинis unstable иprone to degradat13. Ионunder conditions such as light иheat, so there are certaВ случае необходимостиproblems with В настоящее времяaccurate determination Соединенные Штаты америкиastaxanthin. This paper reviews В настоящее времяcurrent research status in terms Соединенные Штаты америкиthe extraction, hydrolysis иdetection - астаксантинаИз российской федерацииHaematococcus pluvialis, with a view to providing guidance on the selection Соединенные Штаты америкиappropriate В. методы работыfor the rapid determination of - астаксантинcontent in Haematococcus pluvialis for different purposes.

1 извлечение астаксантина из гематококковой плавиалисы

Извлечение астаксантина является основой для точного определения его содержания, а также одним из неясных аспектов измерения астаксантина. В стрессовых условиях клетки гематококка плювиалиса аккумулируют астаксантин, но рост и разделение клеток останавливаются, образуя немобильные споры, т.е. гематозные клетки. Зрелые гелатинные клетки имеют трехслойную толстую стенку из жестких клеток, наиболее удаленным слоем является водорослей, материал, который очень устойчив к гидролизу уксусной кислоты. Второй и третий слои состоят из равномерно и неравномерно распределенных манносовой и целлюлозы, соответственно [7].

Для гематококкового плувиалиса с гематоклеточной стенкой традиционные методы растворения и экстракции не могут войти внутрь клетки для извлечения пигмента.

At present, in the industry, supercritical CO2 1. Извлечениеtechnology [7], high pressure/ultra-high pressure homogenization extraction technology [8], иОтрицательный результат: 0pressure cavitation method [9] are used to Экстракт астаксантинаfrom Haematococcus pluvialis. The above methods can effectively 1. Выпискаastaxanthin, but they require a large amount of algal powder and are complicated to operate, so they are suitable for large-scale industrial production. The extraction methods used to detect - астаксантинin Haematococcus pluvialis include solvent extraction, mechanical grinding + solvent extraction, dimethyl sulfoxide (DMSO) extraction, and cellulase wall breaking + solvent extraction.

1.1 метод экстракции растворителей

Метод экстракции растворителей прост в эксплуатации, недорогостоящий и имеет низкие требования к оборудованию. Необходимо только оптимизировать экстракционный растворитель, соотношение жидкости к растворителю, температуру экстракции и время экстракции. Широко используемые растворители включают ацетон [10], этилацетат, дихлорметан, этанол и т.д. Однако из-за наружной стенки гематококковой оболочки свеклы обычные растворители не могут проникать в клетки, а скорость экстракции астакзантина является низкой. Мендеш-пито и др. сообщили, что ацетон используется в качестве экстракционного растворителя для астаксантина из плавиалиса гематококка и что коэффициент экстракции составляет лишь 4 мг · г -1 (извлечение астаксантина по массе на грамм порошка водорослей), в то время как механическое дробление + экстракция ацетона составляет 19 мг · г -1, что указывает на то, что растворитель не может войти в клетки для экстракции астаксантина [10].

Ruen-ngam compared solvent extraction methods assisted by ultrasound (Ultrasound Assisted Extraction), microwave (Microwave Assisted Extraction), and Soxhlet (Soxhlet Extraction). The extraction rate - астаксантинаreached 74% Использование программного обеспеченияmicrowave assisted extraction at 75 °C for 5 min [11]. In addition, to enhance the extraction efficiency of the solvent, chemical cell wall Нарушение нормального функционированияinvolves treating Haematococcus pluvialis cells with acids or alkalis. Sarada et al. reported that treating the cells with 2 mol·L-1 hydrochloric acid solution at 70 °C for 2 min, followed by extraction with a solvent, can achieve an astaxanthin extraction rate of 86%–94% [12]. However, it is worth noting that placing astaxanthin in a high concentration of acid or alkali solution can easily cause degradation of astaxanthin. The above results show that due to the special cell wall composition of Haematococcus pluvialis, direct solvent extraction cannot enter the cells, while auxiliary ultrasound, microwave and acid-base treatments are all prone to cause degradation of astaxanthin and are not suitable for astaxanthin extraction.

1.2 механическое разрушение стенок элементов + экстракция растворителей

Механические нарушения клеточных стенок является наиболее часто используемым методом в лаборатории, которая использует внешние силы, чтобы сломать клеточные стенки Haematococcus pluvialis. В национальном стандарте по обнаружению астакзантина в Haematococcus pluvialis GB/T 31520-2015 [13], Haematococcus pluvialis тщательно грунтовый с использованием стеклогомулятора, а его пигменты извлекаются с использованием дихлорметана-метанола в качестве растворителя. Метод механического дробления + экстракции растворителя чаще используется при обнаружении астаксантина [10, 14-16]. Механическое дробление может повредить клеточные стенки, а пигмент может быть полностью извлечен. Этот метод прост в использовании, но он требует, чтобы каждый образец был заземлен с помощью однородника клеток, что требует много времени и труда.

1.3 разрушение стенок целлюлазы + экстракция растворителей

Since the cell wall of Haematococcus pluvialis is mainly composed of substances such as cellulose, pectin and lipopolysaccharides, cellulase, pectinase and polysaccharidase are used to break the cell wall of Haematococcus pluvialis [8]. Zhou Jinke et al. explored a new enzymatic method for extracting astaxanthin from Haematococcus pluvialis [17]. Cellulase: enzymatic hydrolysis of algal powder, ethanol extraction. The optimal process conditions for enzymatic extraction are: initial pH of the enzymatic solution 4.5, enzymatic hydrolysis temperature 45 °C, enzyme dosage 1.5%, and enzymatic hydrolysis time 15 h. Under these conditions, the astaxanthin extraction rate was 94.6%, which is 61.5% higher than the traditional direct ethanol extraction method. It has the advantages of low operating temperature, less pollution, low cost, and high extraction rate. It is easy to achieve - зеленый цветindustrial production, but this method is time-consuming, and high temperatures can also cause degradation of astaxanthin.

1.4 метод извлечения дмсо

Дмсо обладает хорошей растворителями и хорошей проницаемостью к клеткам. Часто используется в качестве усилителя просачивания для лекарств или пестицидов, а также в качестве защитного средства при криоконсервации клеток. Seely впервые сообщила, что DMSO может использоваться для извлечения микроводорослей хлорофилла и каротеноидов [18]. Буссиба и др. использовали DMSO для извлечения пигментов из Haematococcus pluvialis. Экстракция была проведена в 70 - грационной водяной ванне в течение 10 мин, а остатки водорослей можно сделать бесцветными, повторив экстракцию 2-3 раза в 70 - грационной водяной ванне [19], что показывает, что DMSO имеет хорошая проницаемость и может проникать в клетки Haematococcus pluvialis, чтобы полностью извлечь астаксантин. DMSO экстракция не требует обработки клеточных стенок свеклы гематококка, значительно упрощая процесс экстракции астаксантина, и была использована при astaxanthin detection [20-21]. Кроме того, мир 's ведущие компании по производству микроводорослей, такие как Cyanotech, Fuji в японии и China's Green A Bioengineering Company [8], все применили метод DMSO для извлечения астаксантина от Haematococcus pluvialis до astaxanthin обнаружения.

Использование DMSO в качестве опухающего агента может повысить проницаемость клеточной стенки, и может использоваться в качестве экстрагента для астаксинтина от Haematococcus pluvialis, упрощая процесс разрушения клеточной стенки, необходимой для обнаружения Haematococcus pluvialis.

2 гидролиза астаксантинских эфиров

Astaxanthin накопленный в Haematococcus pluvialis является все -trans 3S, 3S 'configuration, with one hydroxyl group in each endocyclic structure. It is usually esterified with C16, C18 or C20 fatty acids to form Астаксантин эстерс to stabilize its structure [22]. Most of them are astaxanthin monoesters, accounting for about 75%, astaxanthin diВ европе и европеaccounting for about 20%, and free astaxanthin only accounting for 5% [12, 23]. There are as many as 30 different types of astaxanthin monoesters and diesters in Haematococcus pluvialis [24]. The complexity of astaxanthin esters makes purification and direct and accurate B. количественная оценкаproblematic. Therefore, the extracted astaxanthin esters need to be hydrolyzed into free astaxanthin to achieve purification of a single substance and accurate quantification by HPLC. There are generally two methods for hydrolyzing astaxanthin esters: saponification and enzymatic hydrolysis.

2.1 сапонификация

Сапонификация, как правило, осуществляется в метаноловом растворе NaOH или KOH для гидролиза астаксантиновых эфиров в свободный астаксантин. Юань и др. показали, что высокая концентрация щелочи или температура реакции во время сапонификации способствует гидролизу астаксантиновых эфиров, но также ускоряет деградацию астаксантина [14]. Чэнь синцай и др. также показали, что концентрация свободного астаксантина снижается линейно с увеличением концентрации щелочи [25]. Юань и др. изучали кинетику гидролиза астаксантина при эстерсапонификации и деградации астаксантина при различных концентрациях щелочи. Результаты показали, что в 22 - грационной реакционной системе с концентрацией NaOH 0,0175 ~ 0,020 моль · л -1 астаксантонный эфир был полностью гидролизирован и не произошло деградации астаксантина. Однако более высокая концентрация ноо-метанола или более высокая температура реакции вызвали значительное разложение астаксантина [26]. Условия применения метода сапонификации астаксантинских эфиров суровы. Концентрация щелочного раствора, температура и время сапонификации в процессе сапонификации влияют на эффективность сапонификации и стабильность астаксантина, что является еще одним аспектом, влияющим на точное определение астаксантина.

2.2 метод гидролиза фермента

Zhao reported that a water-soluble alkaline esterase from Penicilium cyclopium can convert astaxanthin esters into astaxanthin. The reaction conditions were incubation at 28 °C with stirring for 7 h, and the Восстановление после операцииof astaxanthin reached 63.2% [27]. However, this enzyme has low hydrolysis efficiency and has not been widely used in the determination of astaxanthin content. Jacobs first reported that the lipid-soluble cholesterol esterase can rapidly hydrolyze carotenoid esters [28]. Although there are currently few reports in the literature on this enzymatic method, it is used by domestic and foreign companies producing astaxanthin as a gentle method of hydrolysis. The cholesterol esterase used not only completely hydrolyzes the astaxanthin ester, but also does not easily cause oxidation of astaxanthin, which can more accurately determine the astaxanthin content.

Применение холестерина эстеразы на экстракте Haematococcus pluvialis, содержащий астакзантин в течение короткого периода времени значительно повышает эффективность обнаружения астакзантина в Haematococcus pluvialis.

3 количественное обнаружение астаксантина в гематококковой плювиалисе

Основными методами обнаружения астаксантина являются спектрофотометрия, гидролиз-ГПЛК и ГПЛК-мс.

3.1 спектрофотометрия

Boussiba reported that chlorophyll in Haematococcus pluvialis was destroyed by heating with 5% KOH-30% methanol solution for about 10 minutes, and then the astaxanthin was extracted with DMSO. The absorbance was measured at a wavelength of 475 nm to calculate the astaxanthin concentration. This method can quickly estimate the astaxanthin content and is widely used in cultivation and production [12, 29]. However, some reports have shown that the treatment of the alkali solution to destroy the chlorophyll in this method causes 25% to 40% degradation of astaxanthin [16].

Поэтому ли и др#39 метод s путем непосредственного извлечения из дмсо без щелочной обработки и обнаружения на видимой длине волны 530 нм во избежание воздействия других каротеноидов и хлорофилла. Этот метод был использован для быстрого обнаружения астакзантина в гематококковой плювиалисе [16]. Geng Jinfeng' исследования s показывают, что содержание каротеноидов и astaxanthin в Haematococcus pluvialis в процессе выращивания находится в стабильном линейном соотношении. С помощью метода, который непосредственно и легко измеряет каротеноиды и косвенно получает astaxanthin содержание, каротеноидов можно быстро определить, а затем на основе соотношения полученных каротеноидов и astaxanthin, astaxanthin содержание в Haematococcus pluvialis можно быстро рассчитать. Данные из этой лаборатории также показывают, что существует хорошая линейная зависимость между содержанием каротеноидов, измеренным с помощью спектрофотометрии, и содержанием астаксантина, измеренным с помощью ферзиматических гидролиза-ГПЛК (рис. 1). Поэтому метод экстракции дмсо может непосредственно использоваться для определения содержания астаксантина с помощью спектрофотометрического метода при 475 нм, и отношением, показанным на рис. 1.

3.2 метод гидролиза-ГПЛК

After the Haematococcus pluvialis pigment is pretreated by saponification or enzymatic hydrolysis, HPLC can be used to accurately determine the free astaxanthin. At present, the national standard for astaxanthin determination GB/T 31520-2015 uses the method of HPLC after saponification for determination [13]. The separation column is a reverse-phase C30 column, and the detection of all-trans-free astaxanthin, 9-cis- astaxanthin, and 13-cis-astaxanthin can be detected in 20 min. Yuan used a C18 column to analyze astaxanthin esterified with saponin. Methanol/dichloromethane/acetonitrile/water was used as the mobile phase for gradient elution, and a single sample was detected in 16 min [30]. Cyanotech' метод определения содержания гематококковой плювиалисы заключается в извлечение пигмента, а затем в его гидролизе для определения HPLC. Эта предварительная обработка с помощью гидролиза преобразует астаксантин эфиры в астаксантин, который преобразует смешанный компонент, содержащий астаксантин соединения, в обнаружение одного компонента астаксантин, что упрощает анализ HPLC, позволяет проводить точную количественную оценку и обеспечивает высокую повторяемость. Более подробная информация об условиях хроматографии обратного этапа астаксантина приводится в таблице 1.

3.3 метод HPLC-MS

Из-за разнообразия и сложности извлечения астакзантина и его эфирных производных обычные методы спектрофотометрии и HPLC не могут выявить различия между различными молекулами астакзантина. Масс-спектрометрия позволяет лучше различать различные молекулы, используя различия в информации о массе и фрагментах между молекулами астаксантина-эфира, а затем проводить качественный и количественный анализ. Метод непосредственного измерения взятого образца пигмента с помощью HPLC/MS без обработки позволяет избежать деградации астаксантина в процессе сапонификации и может одновременно измерять астаксантин, астаксантин эфиры, другие каротеноиды и хлорофилл.

Имеет определенное применение при определении состава астаксантина и изучении метаболических механизмов астаксантина. Holtin et al. использовали LC-(APCI)MS для качественного анализа свободных астаксантиновых изомеров, астаксантиновых моноэфиров, астаксантиновых диетологов и лютейна в Haematococcus pluvialis [24]. Weesepoel et al. использовали эзиат и мадиль-тоф/тоф для проведения более детального анализа астакзантиновых эфиров в гематококковой плювиалисе, включая определение астакзантиновой эфирной цепи acyl и различия между СНГ и транс-изомерами [32]. Более подробная информация о хроматографической разбивке астаксантина и его эфирных производных приводится в таблице 1. Следует отметить, что низкая полярность каротеноидов и астаксантиновых эфиров затрудняет их ионизацию с использованием широко используемого источника ионизации ESI. Ионный источник ипки чаще используется для анализа астаксантиновых эфиров.

This paper reviews and evaluates the current methods for the extraction, hydrolysis and detection of astaxanthin in Haematococcus pluvialis- да. Содержание астаксантина измеряется непосредственно с помощью спектрофотометрии на длине волны 475 нм после экстракции с помощью дмсо. Содержание астаксантина быстро рассчитывается на основе линейного соотношения между содержанием каротеноидов, измеренным с помощью спектрофотометрии, и содержанием астаксантина, измеренным с помощью HPLC. Этот метод в большей степени способствует быстрому получению важных параметров в ходе исследований. После экстракции дмсо холестерин эстеразе используется для гидролиза, а HPLC используется для определения содержания свободного астаксантина, который может быть использован в качестве метода точного определения содержания астаксантина. Для различных целей обнаружения могут использоваться различные методы анализа, и сопоставление данных между различными лабораториями или методами должно корректироваться с учетом результатов после гидролиза извлеченной пробы и анализа ГПЛК.

Ссылка:

[1] кобаяши м., сакамото ю. синглет кислородной податливости астаксантиновых эфиров от зеленой алги Haematococcus pluvialis[J]. Биотехнологические письма,1999 год,21(4):265-269.

[2] нагиб у С. О. А. антиоксидант Мероприятия в области развития of astaxanthin  and  По теме: Каротеноиды [J]. Журнал по теме В области сельского хозяйства and  Пищевая химия,2000,48(4):1150-1154.

[3]Higuera-Ciapara I, Felix-Valenzuela L,Goycoolea F M. Astaxanthin: обзор ее химии и применения [J]. Критические обзоры в Food Science and Nutrition,2006,46(2):185-196.

[4] cuelar-бермудес S P, агилар-эрнандес I, карденас-чавес D L, и др. экстракция и очистка высокоценных метаболитов

Из микроводорослей: основные липиды, астаксантин и фитобилибелки [J]. Микробная биотехнология,2015,8(2):190-209.

[5]Lin W C,Chien J T,Chen B h.определение каротеноидов в копытных креветочных скорлупах (Parapenaeopsis hardwickii) жидкостной хроматографией [J]. Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии,2005,53(13):5144-5149.

[6] Ни хуэй, хон цинлин, сяо анфэн и др. Производительность высокопродуктивного штамма астаксантина из Pichia pastis [J]. Китайский журнал биоинженерии, 2011, 27(7): 1065-1075.

[7] ким - да, виджаян Д, "правенкумар" R,et и Эл. Клеточная стенка disruption  И липид/астаксантин Экстракция из микроводорослей: хлорелла и гематококк [J]. Технология биоресурсов,2016,199:300-310.

[8] ю шаолей, ду вейчун, яо цяо и др. Технологические исследования по ферзиматическому гидролизу в сочетании с физическим методом обломки стенки свеклы гематококка [J]. Пищевая инженерия, 2016 (4): 38-40.

[9] цу юанган, лю лина, сюэ яньхуа и др. Экстракция астаксантина методом кавитации отрицательного давления [J]. Журнал северо-восточного лесного университета, 2007, 35(2): 59-60.

[10]Mendes-Pinto M M,Raposo M F J,Bowen Jet al. Оценка различных процессов разрушения клеток на encysted клетках Haematococcus pluvialis: влияние на восстановление astaxanthin и последствия для биодоступности [J]. Журнал прикладной филологии,2001,13(1):19-24.

[11] руен-нгам Ди, шотипрук A, "павсант" P. сравнение of  extraction  methods  for  recovery  of  astaxanthin  От Haematococcus pluvialis[J]. Наука и техника,2011,46(1):64 — 70.

[12] сарада р, видьявати р, уша д, и др. эффективный метод извлечения астаксантина из зеленой алги Haematococcus pluvialis[J]. Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии,2006,54(20):7585-7588.

[13] GB/T 31520-2015. Определение астакзантина в гематококковой плювиалисе-жидкостный метод хроматографии [п]. Китай, 2015 год.

[14] Юань й. п., чэнь ф. хроматографическое отделение и очистка трансастаксентина от экстрактов гематококковой плутовиалис [J]. Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии,1998,46(8):3371-3375.

[15] Сунь вэйхонг, сяо ронхуй, ленг кайлян и др. C30- обратная фаза высокопроизводительная жидкостная хроматография метод определения астаксантина в Haematococcus pluvialis [J]. Журнал аналитического тестирования, 2010, 29 (8): 841-845.

[16] [16] ли и, мяо F, генг. Тем не менее Al. Точная информация quantification  of astaxanthin  from  Haematococcus  В общем и целом extract  Спектрофотометрически [J]. Китайский журнал океанологии и лимнологии,2012,30(4):627-637.

[17] Чжоу цзиньке, ли цзиньхуа, джи фахуан и др. Исследование нового ферзиматического метода извлечения астакзантина из плавиалиса Haematococcus [J]. Китайская материя медика, 2008, 31(9): 1423-1425.

[18] Seely G R,Vidaver W E,Duncan M j. подготовительное и аналитическое извлечение пигментов из коричневых водорослей с диметилсульфоксидом [J]. Морская биология,1972,12(2):184 — 188.

[19] буссиба - с, воншак А. астаксантин B. накопление запасов in  the  green  Организация < < алга > > Haematococcus  Плювиалис [J]. На территории предприятия and   Клеточная физиология,1991,32(7):1077-1082.

[20]Orosa M,Franqueira D,Cid A, и др. анализ и усиление накопления астаксантина в Haematococcus pluvialis [J]. Биоресурсная технология,2005,96(3):373-378.

[21]Boussiba S,Bing W,Yuan J P,et al. Изменения в профиле пигментов в зеленой алге Haeamtococcus pluvialis подвержены воздействию экологических нагрузок [J]. Биотехнологические письма,1999,21(7):601-604.

[22]Breithaupt D e. идентификация и количественная оценка астаксантиновых эфиров в креветках (Pandalus borealis) и микроводорослях (Haematococcus) Плавиалис на подходе В жидком состоянии 3. Хроматография масса 1. Спектрометрия using  negative  ion  В атмосфере Химическая ионизация под давлением [J]. Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии,2004,52(12):3870-3875.

[23]Miao F P,Lu D Y,Li Y G, и др

Химическое ионизирующее масс-спектрометрия атмосферного давления [J]. Аналитическая биохимия,2006,352(2):176 — 181.

[24] холтин - кей, кюнле - м, ребейн J,et и  Al. Определение фактов of  astaxanthin  and  astaxanthin  esters  in  the   Микроводоросли Haematococcus pluvialis с LC-(APCI)MS и характеристики преобладающих изомеров каротеноидов с помощью спектроскопии NMR [J]. Аналитическая и биоаналитическая химия,2009,395(6):1613 — 1622.

[25] Чэнь синкай, хуан вейгуан, оуян цинь. Сапонификация астаксантиновых эфиров и очистка и отделение свободного астаксантина от Haematococcus pluvialis [J]. Журнал фучжоу университета (издание естественных наук), 2005, 33 (2): 264-268.

[26] Юань й. п., чэнь ф. гидролиз кинетиксофастаксантинестеры и стабильность астаксантина гематококковой плавиалиса во время сапонификации [J]. Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии,1999,47(1):31-35.

[27] жао и, гуан ф, ван г и др. Журнал Food Science,2011,76(4):C643-C650.

[28]Jacobs P B,Leboeuf R D McCommas S A, и др. Сравнительная биохимия и физиология b-биохимия & Молекулярная биология,1982,72(1):157 — 160.

[29] Чжан хюимин, ян цзяньцян и др. Быстрый метод определения содержания астаксинтина в Haematococcus pluvialis [J]. Исследования и разработки в пищевой промышленности, 2016, 37(12): 125 — 128.

[30] Юань й. п., чэнь ф.н. Идентификация астаксинтиновых изомеров в гематококке лакустрис с помощью обнаружения HPLC- фотодиодов [J]. Методы биотехнологии,1997,11(7):455-459.

[31]Peng J,Xiang W,Tang Q,et al.Comparative analysis of astaxanthin and its esters in the mutant E1 of Haematococcus pluvialis and other green водоросли by HPLC with a C30 column[J]. Наука в китае серия C-Life Sciences,2008,51(12):1108-1115.

[32]Weesepoel Y,Vincken J- p,Pop R M, и al.Sodiation как инструмент для повышения диагностической ценности MALDI-TOF/TOF-MS спектров сложных astaxanthin эфирных смесей Haematococcus pluvialis[J]. Журнал масс-спектрометрии,2013, 48(7):862-874.