Метод синтеза D тагатозного порошка?

Люди не могут обойтись без сахара в трехразовом питании. Правильное количество сахара не только удовлетворяет потребности кузова и#39;s функции, но и приносит чувство счастья. Однако с повышением уровня жизни люди потребляют слишком много сахара, что привело к росту распространенности таких заболеваний, как ожирение, диабет, кариес и болезни сердца [1]. В последние годы традиционные сахары с высокой абсорбцией и высоким содержанием калорий (такие, как сукроуз, белый сахар, глюкоза и т.д.) постепенно заменяются редкими сахарами с низкой калорией и низкой абсорбцией (такими, как ксилитол, эритритол, d-аллюлоза и т.д.). Международное общество редких сахара (ISRS) определяет редкие сахара как класс моносакхаридов и их производных, которые существуют в природе, но в очень небольших количествах [3]. Редкие сахара не только имеют сладкий вкус, но и имеют низкое содержание калорий. Еще важнее то, что они обладают физиологическими функциями, благотворными для здоровья человека и имеющими большие перспективы развития.

Редкий сахар d-тагатоза с молекулярной формулой C6H12O6 и молекулярным весом 180,16 имеет структурную формулу, показанную на рис.1. Это изомер d-галактозы, диастереоизомер d-сорбитола в позиции C-3 и диастереоизомер d-фруктозы в позиции C-4. Это белые кристаллические гранулы или белый порошок, легко растворимый в воде, слегка растворимый в этаноле. Это натуральный низкокалорийный функциональный подсластитель со сладостью 92% от сукроза [4]и калорийностью 1,5 ккал/г [5]. D- тагатозе был одобрен управлением по контролю за продуктами питания и лекарствами США (FDA) в качестве безопасных (общепризнанных безопасных, GRAS) ингредиентов [5-7]. В 2014году#39. Национальная комиссия по здравоохранению и планированию семьи утвердила д-тагатозе в качестве нового пищевого ингредиента [6]. Д-тагатоза не только способствует профилактике кариеса зубов и ожирения, снижению уровня сахара в крови, но и благотворно влияет на здоровье кишечника [8].

В этой статье кратко описываются физиологические функции и применение д-тагатозы, вводятся основные биологические ферменты, необходимые для биосинтеза д-тагатозы, резюмируется прогресс в исследованиях биосинтеза д-тагатозы в последние годы и дается прогноз биосинтеза д-тагатозы.

1 физиологические функции и применение д-тагатозы

1.1 низкокалорийный подсластитель, который может подвергаться реакции майяра и использоваться в пищевых продуктах

D- тагатозе малокалорийный подсластитель. Она на 92% слаще сукроза, но только на 37,5% выше калорий (4 ккал/г) [5]. Он может реагировать с белками в пище, чтобы сформировать реакцию майяра, который улучшает цвет и вкус пищи. Поэтому используется в хлебобулочных изделиях, напитках и кондитерских изделиях.

1.2 предотвращает ожирение, снижает уровень глюкозы в крови и помогает в лечении диабета 2 - го типа

D- тагатоза является низкокалорийным функциональным подсластителем, который может быть использован в пище для замены традиционных подсластителей, таких как sucrose. Это может облегчить ожирение и снизить уровень глюкозы в крови [9]. В области медицины и здравоохранения д-тагатозу можно использовать для подготовки лекарственных средств для лечения сахарного диабета и ожирения 2 - го типа [10-12].

1.3 превосходный пребиотический, благотворный для здоровья кишечника

D- тагатоза может ферментироваться кишечной флорой в толстой кишке, стимулируя рост полезных кишечных бактерий и препятствуя росту патогенных бактерий в кишечнике [13]. В дополнение к этому,Ферментация d-тагатозыМожет производить короткоцепные жирные кислоты, такие как масляная кислота, которые полезны для здоровья кишечника. Эти кислоты могут способствовать росту и воспроизводству эпителиальных клеток толстой кишки и препятствовать возникновению рака толстой кишки [14].

1.4 анти-кариес, полезно для защиты стоматологического здоровья

Поскольку d-тагатоза не может быть использована микроорганизмами во рту, она помогает сократить производство кислотных веществ во рту и уменьшить кариевое разложение, тем самым эффективно предотвращая возникновение стоматологических заболеваний, таких как гигивит, кариевое разложение и плохое дыхание [13].

1.5 используется в качестве субстрата для производства других редких сахарных спиртов

Согласно стратегии биотрансформации для производства гексозы, то есть стратегии изумления [15], начиная с d-тагатозы, редкие сахарные спирты с важными физиологическими функциями, такими как d-сорбитол, d-тагатоза и гальактитол, могут быть получены с помощью соответствующего ферзиматического катализатора (рис. 2).

2 метод производства d-тагатозы

2.1 метод естественной экстракции

D- тагатоза в природе в основном встречается в деснах тропических вечнозеленых деревьев, мхах, лишайниках, горячем какао, сыре и йогурте, и ее содержание очень мало [13, 16, 17]. Прямое извлечение d-тагатозы из этих веществ требует большого количества сырья, что делает его очень дорогим и затрудняет промышленное производство d-тагатозы.

2.2 метод химического синтеза

D- тагатозу можно получить из d-галактозы путем химического синтеза. Используемый химический катализатор-щелочная металлическая соль, которая катализирует реакцию d-галактозы с гидроксидом металла, образуя комплекс гидроксид-д-тагатозы металла. После кислотной нейтрализации комплекс выпускает д-тагатозу [13, 14, 18]. Однако метод химического синтеза для производства d-тагатозы является относительно сложным, и легко производить побочные продукты, что снижает чистоту целевого продукта d-тагатозы и делает его неудобным для разделения и очистки позже. Кроме того, использование химических реагентов создаст экологическую нагрузку и не соответствует концепции «зеленого» производства [19].

2.3 биосинтетический метод

Есть два основных способаСинтезированный д-тагатозБиологически: одна заключается в использовании одной энзиматической реакции на синтез д-тагатозы, а другая-в использовании мульти-энзиматической реакции на синтез д-тагатозы. В соответствии со стратегией изумления (рис. 2) для катализации преобразования d-галоктозы, d-сорбитола и гальактитола в d-тагатозу могут быть выбраны соответствующие однодозовые изомеры, d-тагатозы, d-тагатозы и d-тагатозы, соответственно. Однако относительно высокие цены на д-галактозу, д-сорбитол и гальактитол затрудняют их применение в промышленном производстве, ограничивая промышленное производство д-тагатозы. В настоящее время некоторые исследователи выбрали в качестве исходного материала низкозатратные субстраты, такие как лактоза, мальтодекстроин и порошок молочной сыры, и использовали мультиферментную каталитическую реакцию для синтеза д-тагатозы, при этом были достигнуты некоторые результаты исследований. Биосинтетический метод производства d-тагатозы имеет преимущества высокой эффективности производства, высокой чистоты продукта, мягкой реакции и низкой стоимости, что делает его предпочтительным методом промышленного производства d-тагатозы [20].

3 синтез d-тагатозы однократной ферментативной реакции

3.1 l-арабиноз изомеров катализирует синтез d-галактозы до d-тагатозы

Одноферментный метод биосинтезирования редких сахаров позволяет в полной мере использовать физико-химические свойства фермента и применяется при производстве редких сахаров. Его преимущества заключаются в простоте и эффективности, высокой степени использования ферментного катализатора и высокой эффективности производства. Г-н арабинозеизомеры (L-AI) в настоящее время является наиболее изученным ферментом для биосинтеза d-тагатозы, и может катализировать d-галактозы в d-тагатозы.

Фермент имеет широкий спектр микробных источников, в Том числе ацидотермус целлюлолитики ATCC43068[21], Бациллы (Bacillus)subtilis STR. 168[22], Lactobacillus sake i 23K[23], Lactobacillus fermentum CGMCC2921[24], Bacillus термоглюкосидаций Цтик (KCTC) 1828[25], алициклобацилл Hesperidum URH17-3-68[26], Бациллы (Bacillus)coagulans NL01[27], Pseudoalteromonas haloplanktis Кцуо консультативный комитет по административным и бюджетным вопросам14393[28], Geobacillus Stearothermophilus [4], - клостридиум  - гилемоне.  ДСМ (DSM)  1505 3[29], Lactobacillus brevis MF 465792[30], Enterococcus faecium DBFIQ E36[31], Bifidobacterium adolescentis CICC 6178[32], Klebsiella pneumoniae DSM 681[33] и др.

Ферментативные свойства изомера l-арабинозы из вышеперечисленных микроорганизмов показаны в таблице 1. Оптимальная температура реакции - 40-75 градусов, оптимальная реакция pH - 5,0-8,0, и различные ионы металла являются активаторами фермента, такими как Mn2+, Co2+, и Mg2+. Большинство L-AIs обладают субстратной спецификой для Г-н арабинозеи D-galactose, в то время как небольшое их число обладает субстратной спецификой только для Г-н арабинозеи не обладает субстратной спецификой для D-galactose, например L-AIs от Bacillus subtilis STR. 168[22] и псевдоальтеромонас галопланктис ATCC 14393[28]. Особенности, такие как L-AI от Bacillus subtilis ул. 168[22] и псевдоалтеромонас галопланктис ATCC 14393[28]. Кроме того, ферменты L-AI из 1. Ацидотермус- целлюлолитаATCC43068[21], Lactobacillus sakei 23K[23], Lactobacillus fermentum CGMCC2921[24], Bifidobacterium adolescentis CICC 6178[32] и др. демонстрируют высокую субстровую специфичность для d-галактозы.

L-AI от Bacillus coagulans NL01 был гетерологически выражен в системе экспрессии кишечной палочки и катализирован целыми клетками на 60 градусов и pH 7,5. Когда концентрация d-галактозы в субstrate составляла 150 г/л и 250 г/л, коэффициенты преобразования d-тагатозы составляли соответственно 32% и 27%, а время преобразования — 32 и 48 ч [27]. Коэффициент преобразования d-тагатозы составил 56,7%, когда 100 ммоль/л d-галактозы (содержащий 6 ммоль/л Mn2+) были катализированы очищенным L- ai ферментом из бифидобактерий подростка CICC 6178 при 55 °C и pH 6,5 для 10 h [32]. L-AI от Klebsiella pneumoniae DSM 681 был гетерогенно выражен в системе выражения E. coli. Субстрат составил 100 г/л d-галактозы (содержит 1 ммоль/л мn2 +). Цельноклеточная каталитическая реакция была проведена при 50 градусах и pH 8,0 в течение 30 мин, а скорость преобразования d-тагатозы составила 33,5% [33].

Технология дисплея поверхности споре — это метод, который опирается на крепительный эффект белка куртки споре, чтобы показать целевой фермент на поверхности споре путем смешивания целевого фермента с белком пальто споре, тем самым иммобилизуя фермент. Иммобилизованные ферменты могут поддерживать каталитическую активность в экстремальных условиях и преодолевать барьер проникновения субстратов и продуктов через мембрану [10]. Это выгодная попытка иммобилизации фермента. В 2014 году лю В В то же время- эл. - привет.[16] технология поверхностного дисплея spore использовалась для отображения фермента L-AI от Lactobacillus fermentum CGMCC2921 на поверхности Bacillus subtilis 168 спор. Полученные рекомбинантные споры L-AI продемонстрировали относительно высокую каталитическую активность и высокую термоустойчивость. После хранения в 80 °C в течение 30 мин, они по-прежнему сохранили 87% своей ферментной активности.

Используя этот рекомбинат L- ai spore в качестве биокаталыста, 100 г/л d-галактозы был использован в качестве субстрата, и реакция была проведена на 70 градусов в течение 24 часов, с коэффициентом преобразования d-тагатозы около 75%. В 2018 году GUO В то же время- эл. - привет.[10] также использовали технологию дисплея поверхности споре для отображения фермента L-AI, полученного из Lactobacillus brevis PC16, на поверхности Bacillus subtilis DB403 спор. Рекомбинантные споры L-AI использовались в качестве биокаталита. Используя 125 г/л d-галатозы (содержащие 1 ммоль/л Mn2+) в качестве субструата, реакция была проведена при 6 7 гранулах и pH 6,5 в течение 28 ч. Скорость преобразования d-тагатозы составила 79,7%, а споры рекомбинатов L- ai имели хорошую возможность повторного использования. После 5 циклов удельная активность по-прежнему составляла 87%, а коэффициент преобразования d-тагатозы - 40,7%. Технология поверхностного отображения споре имеет недостаток, заключающийся в низкой урожайности споре, что затрудняет ее промышленное применение. В таблице 2 резюмируются упомянутые выше литературные доклады о каталитическом синтезе d-тагатозы из d-галактозы.

Из-за ограничений термодинамического равновесия изомерно-катализируемые реакции характеризуются низкими коэффициентами преобразования, что снижает эффективность производства и не способствует разделению и очистке продуктов. Хотя повышение температуры реакции может сместить равновесие реакции на сторону продукта, но чрезмерно высокие температуры не только снижают ферментную активность, но и легко приводят к браунтингу сахара, влияя на качество продукта, особенно в щелочных условиях. Поэтому разработка ферментного катализатора с низкой температурой реакции, кислотной реакцией p- г,высокой каталитической активностью и высокой термостойкостью будет полезна для промышленного применения.

3.2 d-тагатоза 3- эпимотрический катализатор производства d-тагатозы из d-сорбитола

D- тагатоза 3- эпистерер (D- тагатоза 3- эпистерер, DTE) или D- псикоза 3- эпистерер (D- псикоза 3- эпистерер, DPE) широко используются ферменты для биосинтеза D- псикоза. Они имеют широкий спектр субстратных особенностей. Например, ферменты DPE из Agrobacterium tumefaciens[34] и артробактора globiformis[35] и DTE фермент из Caballeronia fortuita[36] могут преобразоваться между D- сорбитолом и D- сорбитолом, в которых соотношение D- тагатозы к D- сорбитолу в равноценном состоянии составляет 30,7:69,3, когда биокатализованы DTE фермент из Caballeronia fortuita (рисунок 3). Что делает промышленное производство d-тагатозы из d-сорбитола нерентабельным.

3. 3 гальактитол дегидрогеназа катализирует производство d-тагатозы из гальактитола

Гальактитол 2- дегидрогеназа (GDH) может окислять различные полиспирты и полиолы в соответствующие кетоны и кетозы, соответственно, в присутствии coenzyme NAD+. JA GTAP и др. [37] гетерогенно выразил фермент GDH из Rhizobium leguminosarum bv. Viciae 3841 в экспрессии кишечной палочки.

Белки фермента GDH очищались с помощью хроматографии аффинити. Электрофорез натрия додецил сульфат-полиакриламид геля геля был использован для определения молекулярного веса фермента 28 кда, а хроматография фильтрации геля была использована для определения молекулярного веса фермента 114 кда, что указывает на то, что фермент является однороднотрамером. Анализ ферзиматических свойств показал, что оптимальная температура 35 градусов, а оптимальная реакция pH 9,5. Когда субстрат galactitol, кинетические параметры км 8,8 ммоль/л, KcПо адресу:835 мин -1, и Kcat/ км 94,9 мин -1 ммоль · л -1, что указывает на то, что фермент имеет хорошую субстратную специфику для galactitol. Фермент G DH катализирует реакцию гальактитола в течение 30 мин, а коэффициент преобразования d-тагатозы достигает 72%. Путем измерения оптического вращения проверяется, является ли продукт окисления d-тагатозом.

Хотя высокий коэффициент преобразования d-тагатозы может быть получен путем катализации производства d-тагатозы из гальактитола с использованием галактитола дегидрогеназы, эта реакция окисления требует добавления coenzyme NAD+, а субстрат гальактитола является дорогостоящим, поэтому он не экономичен в качестве сырья для промышленного производства.

4  Катализатор синтеза d-тагатозы из недорогих субstrates с помощью мультиферментных катализаторов

4. 1 Катализатор производства d-тагатозы из лактозы

Лактоза представляет собой дисаксарид, состоящий из одной молекулы d-глюкозы и одной молекулы d-галактозы. Поскольку его цена намного ниже, чем цена d-галактозы, d-сорбитола и гальактитола, он является предпочтительным субстритом для производства d-тагатозы. Чжан и др. [38] создали плантарий лактиплатибациллуса Штамм инженера, вырубка гена галактокиназы, чтобы блокировать обмен d-галактозы; Он также выражает β-galactosidase (β-g galactosidase, β-GAL) и Г-н арабинозеизомеров, который катализирует d-галактозу в d-тагатозу, тем самым обеспечивая прямую биосинтез d-тагатозы из лактозы в одном горшке. Используя этот искусственный штамм был использован в реакции клеток покоя на 65 °C и pH 7,5 для 56 h с субстратом 175 г/л лактозы, и скорость преобразования d-тагатозы составила 33%.

4. 2. Каталитическое производство d-тагатозы из сырого порошка

Отходы молочной промышленности используются в качестве дешевого сырья для производства редких сахарных продуктов [39, 40]. В 2022 году чжанг и др. [41] сообщили о преобразовании богатого лактозой молочного побочного продукта-сырного сырого сырого пороха (КЖП)-в три низкокалорийных подсластителя-d-тагатозу, d-арабитол и галактитол с использованием непрерывного катализа и ферментации цельных клеток (рис. 4). Затем d-глюкоза и оставшаяся d-галактоза ферментируются метшниковией пулчерримой е1 в d-арабитол и гальактитол. Наконец, 68,35 г/л d-тагатозы, 60,12 г/л d-арабитола и 28,26 г/л гальактитола были получены с использованием 428,57 г/л CWP (содержащего 300 г/л лактозы). Этот доклад также обеспечил полное использование промежуточных метаболитов d-глюкозы и остаточного d-галактозы, в результате чего был получен ряд ценных продуктов из побочных промышленных продуктов.

4.3 каталитическое производство d-тагатозы на мальтодекстроине

20 22 года, DAI В то же время- эл. - привет.[42] построили систему, состоящую из грау-глюканфосфорилазы (грау-глюканфосф-лиаза, αGP), фосфоглукомутазы (PGM), глюкозы - 6- фосфатного изомера (PGI), д-тагатозы - 1,6- бисфосфатного алдолазы (гатц) и фосфогликолата фосфатазы (PGP). Фосфатаза (ПМГ) состоит из цельноклеточного биокаталыста эшеричийской коли. Технология CRISPR-Cas9 была использована для выбить ген, который вызывает метаболизм промежуточного продукта (рис. 5), чтобы увеличить накопление промежуточного продукта. Полученный в результате этого штамм E. coli использовался в качестве биоокаталиста для получения 3,383 г/л d-тагатозы со скоростью преобразования 33,83 г/л с использованием 10 г/л мальтодекстроина в качестве субстрата в течение 3 ч.

Мультиферменты стимулируемые реакции имеют большой потенциал с точки зрения биосинтеза и преобразования. По сравнению с одноферментными реакциями, мультиферментные реакции могут достигать более сложных реакций, производить продукты с высокой добавленной стоимостью из недорогих субstrates, избегать разделения промежуточных веществ, сокращать ингибирование промежуточных веществ и даже изменять баланс реакции [5]. Однако из-за несбалансированного соотношения различных ферментов, несбалансированного метаболического потока промежуточных веществ и различных оптимальных условий реакции различных ферментов коэффициент преобразования д-тагатозы не является высоким. На более поздней стадии можно использовать такие методы, как синтетическая биология, метаболическая инженерия и белопротеиновая инженерия для оптимизации синтеза и выражения фермента, повышения производительности фермента, увеличения синергии между различными молекулами фермента, а также повышения коэффициента преобразования d-тагатозы.

5 D-разделение, очистка и кристаллизация тагатозы

Разделение и очистка d-тагатозы является важным шагом, который влияет на последующую кристаллизацию d-тагатозы и качества продукции. В 2008 году хуан венся и др. [43] сообщили об использовании ионной обменной смолы Ca2+ для отделения d-галактозы и d-тагатозы, при этом чистота d-тагатозы была достигнута на 98%, а коэффициент восстановления составил 83%; Затем полученный d-тагатозный раствор подвергся воздействию анионных и катионных обменных смол для опреснения и деколонизации с коэффициентом опреснения 93 процента и коэффициентом восстановления d-тагатозы 87 процентов. Впоследствии d-тагатоза была кристаллизована путем добавления этанола. Су ци и др. использовали смоделированную хроматографию подвижного слоя для отделения d-тагатозы и d-галактозы и обнаружили, что при времени переключения клапана 6,43 мин чистота d-тагатозы, полученная путем отделения, достигла 100%, а скорость восстановления 99,93% [44]. В последние годы смоделированная хроматография подвижного слоя широко используется в производстве редких сахара благодаря ее преимуществам высокой эффективности разделения, высокой утилизации растворителей и низкого потребления энергии.

В настоящее время поступило мало сообщений о кристаллизации д-тагатозы. Биоссинтез d-тагатозы подвержен образованию других гетеросакшаридов (например, d-глюкозы, d-фруктозы и т.д.), и они часто не могут быть полностью удалены во время промышленной сепарации, которая влияет на нуклеацию и рост кристаллов d-тагатозы, а также морфологии, распределения частиц по размеру и чистоты кристаллов d-тагатозы. В 2022 году 13. ВанВ то же время- эл. - привет.[45] изучили влияние трех сахара-примеси (D-maltose, D-fructose и D-glucose) на скорость нуклеации кристаллов d-тагатозы и пришли к выводу, что адсорбция сахара-примеси на поверхности кристаллов d-тагатозы препятствует росту кристаллов d-тагатозы (рис. 6). WANG В то же время- эл. - привет.И использовали моделирование молекулярной динамики, чтобы выявить кристаллическое нуклеация и механизм роста d-тагатозы в молекулярном масштабе. В настоящее время имеется мало сообщений о процессе промышленной кристаллизации d-тагатозы.

6 резюме и перспективы

Являясь функциональным натуральным подсластником, d-тагатоза не только имеет важное практическое значение в пищевой промышленности, но и играет жизненно важную роль в фармацевтической промышленности и здравоохранении. Хотя д-тагатозе был утвержден в качестве нового пищевого ингредиента в китае, крупномасштабное производство до сих пор не реализовано по следующим причинам: (1) ферментный катализатор с высокой интенсивностью производства, сильной термостойкостью и высоким коэффициентом преобразования пока не получен; (2) недостаточное развитие пищевых бактерий-носителей; (3) высокая стоимость субстрата; (4) высокая трудность разделения и очистки продуктов.

С учетом вышеизложенных причин рекомендуется сосредоточить внимание на следующих исследованиях: (1) использование белковой инженерии, ферментной инженерии и других технологий для изменения молекулярной структуры ферментов с целью получения ферментных молекул с высокой каталитической активностью, высокой скоростью преобразования и высокой термоустойчивостью; (2) разработка пищевых хост-бактерий с сертификацией GRAS в качестве биокаталитических носителей, включая Bacillus subtilis, дрожжи, молочные кислоты бактерии и т.д.; (3) в полной мере задействовать потенциал мультиферментных катализаторов в биосинтезе и преобразовании, сбалансировать уровни экспрессии различных молекул фермента и поток промежуточного метаболизма, увеличить синергетический эффект между различными молекулами фермента и использовать низкозатратные субструаты для массового производства д-тагатозы; (4) оптимизация процессов разделения, очистки и кристаллизации d-тагатозы. Благодаря вышеуказанным усилиям был создан простой, эффективный и инновационный технологический маршрут для промышленного производства д-тагатозы.

Ссылка:

[1]  - сурапуредди С, равиндранат к, кумар г, И др. Методы анализа с высокой разрешающей способностью и высокой пропускной способностью для D-тагатозы и связанных с процессом примесей с использованием капиллярного электрофореза [J]. Аналитическая биохимия, 2020, 609: 11398 1.

[2]  Баптиста с, румыния, оливейра с и др. От галактозы до тагатозной изомеризации с помощью l-арабинозного изомера из Bacillus subtilis: биоизысканный подход к валоризации гелидия сескипедейла [J]. Наука и технологии,15, 2021,151: 112199.

[3]  Berens K, DESMET - т,SOETAERT W. ферменты для биоокаталитического производства редких сахаров [J]. Журнал промышленной микробиологии и биотехнологии, 2012, 39(6): 823 — 834.

[4]   Организация < < лаксми > > F, F, 3. Араи - с, - тсурумару - г, В то же время - эл. - привет. Повышение качества услуг 1. Субстрат В частности: для D- галактоза Соединенные Штаты америки Г-н арабинозе 1. Изомеры (изомеры) для Промышленное применение [J]. Biochimica В то же времяBiophysica Acta (BBA) — белки и протеомика, 2018, 1866(11): 1084 — 1091.

[5]  Дай и, ли м, цзян б и др. Биосинтез d-тагатозы из maltodextrВ случае необходимостипо технологии Escherichia coli с многоферментной системой совместного выражения [J]. Фермент и микробные технологии, 2021, 145: 109747.

[6]WANG J. производство подсластителя D-1. Тагатозеи его применение в пище [J]. Китай приправа, 2016, 41(01): 140-143.

[7]  Рой с, чиккерур джей, Рой с и Al. Тагатозе как потенциальное нутрицестическое: производство, свойства, биологические роли и применение [J]. Журнал пищевой науки, 2018, 83(11): 2699-2709.

[8]  Лаксми ф, арай С, аракава т и др. Выражение и характеристика l-арабинозе изомеров из Geobacillus stearothermophilus для повышения активности при кислом состоянии [J]. Выражение белка и очистка, 2020, 175: 105692.

[9]  - привет, бобер. - младший, 1. Наир - нет. Нет. - галактоза. По адресу: tagatose  Изомеризация (isomerization) at  В среднем по стране - температура воздуха с - высокий уровень Преобразование должностей в должности и Производительность [J]. Природные коммуникации, 2019, 10(1): 4548.

[10] го кью, у, юн джей и др. Увеличение производства d-тагатозы с помощью поверхностно демонстрируемого l-арабинозного изомера споре из изолированных Lactobacillus brevis PC16 и биотрансформации [J]. Технология биоресурсов, 2018, 247: 940 — 946.

[11] Д/дSOUSA - м,MELO V, HISSA D и др. Одноступенчатая иммобилизация и стабилизация рекомбинатной энтерококковой фэциума DBFIQ E36 L — изомера арабинозы для синтеза д-тагатозы [J]. Прикладная биохимия и биотехнология, 2019, 188(2): 310 -325.

[12] ди суза т, оливейра р, безерра с и др. Альтернативное гетерологическое выражение l-арабинозного изомера из энтерококка faecium DBFIQ E36 путем остаточной индукции лактозы сыворотки [J]. Молекулярная биотехнология, 2021, 63(4): 289 — 304.

[13] DAI Y. биосинтез D- тагатозы из мальтодекстрина мультиферментной каталитической системой [D]. Университет цзяньнань, 2021 год.

[14] GUO Q. производство D- тагатозы из лактозы с использованием грау-галактозидазы и l-арабинозы изомеров [D]. Шаньдунский университет, 2018 год.

[15] IZUMORI K. Izumoring: стратегия биопроизводства всех гексасов [J]. Журнал биотехнологии, 2006, 124 (4): 717-722.

[16] лю - Y,ли S, сюй H и др. Эффективное производство d- тагатозы с использованием системы отображения поверхности пищевых продуктов [J]. Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии, 2014, 62(28): 6756-6762.

[17] чжэн ц, се дж, лю п и др. Элегантная и эффективная биотрансформация для двойного производства d-тагатозы и биоэтанола из сырового сырого сырого порошка [J]. Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии, 2019, 67(3): 829 — 835.

[18] ван ц, ван м, лю х и др. Подготовка тагатозы высокой чистоты из галактозы с использованием адсорбированной адсорбированной адсорбированной аффинити на основе одногоршки [J]. Журнал химической инженерии, 2022, 446: 137089.

[19] бортон - н, - фидалео. - м. B. стабилизация положения В случае иммобилизации Г-н арабинозе 1. Изомеры (изомеры) для В настоящее время Производство и продажа Из д-тагатозе Из российской федерации D- галактоза [J]. Прогресс в области биотехнологии, 2020 год, 36(6): e3033.

[20] DE SOUSA M, SILVA GURGEL B, PESSELA B, В то же время- эл. - привет.Подготовка клитов и магнитных клитов рекомбинантного L-арабинозного изомера для синтеза д-тагатозы [J]. Фермент и микробные технологии, 2020, 138: 109566.

[21] ченг - L, 8. Му Ч, ч, ч. Чжан (Китай) - т,  et  - эл. - привет. А вот и нет. Г-н арабинозе 1. Изомеры (изомеры) Из российской федерации Acidothermus  cellulolytics  ATCC  43068: - клонирование, Выражение, очищение и характеристика [J]. Прикладная микробиология и биотехнология, 2010, 86(4): 1089 — 1097.

[22] ким - джей, Прабху (прабху) - п, Джея м, et  al.  3. Определение характеристик Соединенные Штаты америки А вот и нет. L-arabinose  1. Изомеры (изомеры) Из российской федерации Bacillus  Subtilis [J]. Применение на практике 1. Микробиология И биотехнология, 2010, 85(6): 1839-1847.

[23] рахими м, илхаммами р, баджич г, И др. Кислотный толерантный l-арабиноз изомеров из Lactobacillus sakei 23K является привлекательным производителем d-тагатозы [J]. Биоресурсная технология, 2010, 101(23): 9171 -9177.

[24] сюй зи, цин - Y,ли С, и др. Роман l-арабинозный изомер из лактобациллуса ферментума CGMCC2921 для производства d-тагатозы: клонирование, очистка и определение характеристик генов [J]. Журнал молекулярных катализаторов B: Enzymatic, 2011, 70(1): 1 -7.

[25] SEO - м. 3. Определение характеристик Соединенные Штаты америки А вот и нет. L-arabinose  1. Изомеры (изомеры) Из российской федерации Bacillus   термоглюкосидаций для Д-тагатозе (D-tagatose) Производство [J]. Биохимия и биотехнология, 2013, 77(2): 385 — 388.

[26] фан с, лю к, чжан т и др. Биохимическая характеристика термостабильного l-арабинозного изомера из термокислотной бактерии Alicyclobacillus hesperidum URH17-3-68[J]. Журнал молекулярных катализаторов B: энзиматика, 2014, 102: 120 — 126.

[27] мей Ч, ч, ч.WANG L, ZANG Y, et al. Характеристика l-арабинозного изомера из Bacillus coagulans NL01 и его применение для производства D-тагатозы [J]. BMC Biotechnology, 2016, 16(1): 55.

[28] сюй W,  Вентилятор и вентилятор C, C, Чжан (Китай) - т, et  al.  - клонирование, Выражение: и 3. Определение характеристик По состоянию на 31 декабря Роман о любви L-arabinose  1. Изомеры (изомеры) Из российской федерации В настоящее время Psychrotolerant bacterium Pseudoalteromonas haloplanktis[J]. Молекулярная биотехнология, 2016, 58(11): 695-706.

[29] нгуен T,  Гонконг (США) M,  - чанг. - п, et  al.  Биохимические свойства Из l-арабинозе 1. Изомеры (изомеры) Из российской федерации - клостридиум - гилемоне. По адресу: Продукты питания и напитки D- тагатоза как функциональный подсластитель [J]. График 1, 2018,13(4): e0196099.

[30] ду м, чжао д, чэн с и др. К эффективному ферментативному преобразованию д-галактозы в д-тагатозу: очищение и характеристика l-арабинозного изомера из Lactobacillus brevis[J]. Биохимическая инженерия, 2019, 42(1): 107 — 116.

[31] манзо - р, Антунес а, DE  Суза м., et  al.  1. Биохимическая технология 3. Определение характеристик Жаростойкий рекомбинант L-arabinose  1. Изомеры (изомеры) От Enterococcus faecium DBFIQ E36 штамм с возможным применением в производстве d-тагатозы [J]. Молекулярная биотехнология, 2019, 61(6): 385 — 399.

[32] чжан г, у, парвез а и др. Изучение специфического для д-галактозы l-арабинозного изомера из бифидобактерий подросткового возраста для производства д-тагатозы [J]. Горизонты биоинженерии и биотехнологии, 2020, 8: 377.

[33] син к, со м, ким с и др. Характеристика L-arabinose изомера из Klebsiella pneumoniae и его применение в производстве Д-тагатозе (D-tagatose)из D-galactose[J]. Прикладные науки, 2022, 12(9): 4696.

[34] ким х, хён е, ким и, И др. Описание Agrobacterium tumefaciens D-psicose 3-epimerase, который преобразует D-fructose в D-psicose [J]. Прикладная и экологическая микробиология, 2006, 72(2): 981 -985.

[35] YOSHIHARA A, KOZAKAI T, SHINTANI T, et al. Очистка и характеристика d-аллюлозы 3- эпистерер, полученный из артробактера globiformis M30, микроорганизма гра [J]. Журнал бионаук и биоинженерии, 2017, 123(2): 170 — 176.

[36] 1. ЛиS, CHEN Z, ZHANG W и др. Описание D-tagatose 3-epimerase из Caballeronia fortuita и ее применение в производстве редкого сахара [J]. Международный журнал биологических макромолекул, 2019,138: 536 — 545.

[37] джагтап с, сингх р, кан и др. Клонирование и определение характеристик галоктитоловой 2- дегидрогеназы из ризобия легуменосара и ее применение в производстве d-тагатозы [J]. Фермент и микробные технологии, 2014, 58 — 59: 44 — 51.

[38] чжан с, го т, син у и др. Биотехнологическое производство d-тагатозы из лактозы с использованием метаболической инженерии Lactiplantibacillus plantarum[J]. LWT — наука и техника о продовольствии, 2021, 142: 110995.

[39] раи с, каур х, колдхар б и др. Двуферментный металлический гибридный кристалл для непосредственного преобразования пшеничной лактозы в высококачественный редкий сахар d-тагатозу: синтез, характеристика и устойчивый процесс [J]. Наука и техника оао «биоматериалы», 2020, 6(12): 6661 — 6670.

[40] чжан г, зебед х, юн дж., и др. Двухступенчатая биосинтез d-тагатозы из порошка молочной сыпи инженером штамма Escherichia coli, выражающего l-арабинозный изомер из плантара Lactobacillus [J]. Технология биоресурсов, 2020, 305: 123010.

[41] чжан г, забед х, и, И др. Биокаталитическое преобразование молочных отходов, богатых лактозами, в d-тагатозу, d-арабитол и галактитол с использованием технологий последовательной ферментации цельных клеток [J]. Технология биоресурсов, 2022, 358: 127422.

[42] DAI Y, 1. ЛиC, ZHENG L, et al. Усиленная биосинтез d-тагатозы от maltodextrin через модульную инженерию путей рекомбинатной Escherichia coli[J]. Журнал биохимической инженерии, 2022, 178: 108303.

[43] HUANG W, MU W, JIANG B. исследование о разделении и очистке D -tagatose[J]. Пищевая и ферментационная промышленность, 2008, 34(06):168 — 171.

[44] су - Q, LI  H,  Ж/д - X, et  al.  1. Моделирование Исследования по теме: По состоянию на Прекращение службы Соединенные Штаты америки D-tagatose  и D- галактоза in  1. Имитация В другое место Кровать [J]. Современная химическая промышленность, 2014, 43(07): 1379-1381+1385.

[45] юань - д, WANG  Y,  LI  Y,  et  al.  Открытие для себя В настоящее время Роль организации объединенных наций С точки зрения содержания примесей - с сахаром По состоянию на В настоящее время 3. Кристаллизация Из д-тагатозе «Кристалл» : В ходе экспериментов И моделирование молекулярной динамики [J]. Пищевая химия, 2022, 397: 133762.