Исследование по методу синтеза женьшеня

Женьшень являются основными активными ингредиентами драгоценных лекарственных трав, таких как женьшень и американский женьшень. Современные фармакологические исследования показали, что женьшень имеет хорошую фармакологическую деятельность, такую как противоопухолевая, противовоспалительная, противоокисление и ингибирование апоптоза [1]. Женьшень относится к классу тритерпеноидов и гликозидных соединений, образующихся в результате соединения гликозидного прекурсора и сахара. В соответствии с aglycone женьшень может быть разделен на три типа: Один из них является пентациклическим пентациклическим тритепеном сапонин ро олеананового типа, который aglycone является олеанолиевой кислотой; Двумя другими являются женьшень женьшеня типа (например, Rb1, Rb2, Rc, Rd, F2, Rg3, Rh2 и т.д.) и женьшень типа - тритерпене.(например, Re, Rg1, Rg2, Rf, Класс r1и т.д.). Оба типа относятся к dammarane- тип тетрациклический triterpene Организация < < сапонины > >и составляют большинство женьшень, что делает их основными активными ингредиентами. До настоящего времени более 60 женьшень были изолированы и их структуры определены. Большинство женьшенозидных мономеров имеют значительные фармакологические эффекты и показывают хорошие перспективы для разработки новых лекарств. Например, Рг - 1и Rb1 имеют антистареющую активность, а Рг - 3и Rh2 имеют антиопухолевую активность [2].

Содержание женьшеня в женьшень и американский женьшень является относительно низким. Ограниченные природные ресурсы едва ли могут удовлетворить постоянно растущий спрос на лекарства и исследования и разработки. Кроме того, долгосрочная зависимость от природных ресурсов как источника медицины неизбежно приведет к истощению природных ресурсов и серьезно нарушит экологический баланс. Искусственное культивирование женьшеня и американского женьшеня требует 4-15 - летнего цикла роста и культивирования и сталкивается с такими проблемами, как остаточные пестициды, загрязнение тяжелыми металлами и деградация видов. Все это сдерживает крупномасштабное культивирование. Для того чтобы избавиться от дилеммы ограниченных медицинских ресурсов и в то же время защитить ценные природные ресурсы, в последние годы отечественные и зарубежные ученые исследовали биосинтез женьшеня с помощью культуры ткани, биохимической трансформации и синтетической биологии и добились некоторых результатов. В настоящем документе рассматриваются эти изменения и перспективы биосинтеза женьшень.

1 исследования с использованием культуры ткани для решения проблемы нехватки женьшеня ресурсов

Начиная с середины xx века, многие исследователи были посвящены изучению тканевой культуры женьшеня и американского женьшеня, пытаясь решить проблему ресурсного обеспечения этих драгоценных лекарственных материалов через ткани и клеточной культуры, или сделать возможным быстрое распространение через получение пробных саженцев труб. Что касается изучения культуры ткани женьшеня и американского женьшеня, то в последние годы было много обзорных статей [3, 4]. Растительная ткань и клеточная культура должны в конечном итоге создать крупномасштабные методы культуры — реакторную культуру — для достижения промышленного производства. Япония успешно провела женьшень клеточной культуры на 20 000 л биореактор в размере 100 кг в месяц для производства пищевых добавок, и состав женьшеня в культуре почти точно так же, как культивируемых корней женьшеня [5]. Южная Корея также добилась большого прогресса в культуре ферментации авантюритных корней женьшеня и волостных корней, а масштаб реактора достиг 10000 л [6]. Китай разработал серию косметики Ding Jiayi через культуру женьшеня каллуса [7].

Хотя исследования тканей и клеточной культуры женьшеня и американского женьшеня были относительно глубокими и был достигнут определенный прогресс в клеточной культуре, волоконно-корневой и коронной желчной опухоли и реакторной культуре, Однако по-прежнему существуют некоторые проблемы, такие как нестабильные клеточные линии, трудности в расширении культуры, низкое содержание целевого продукта и высокие затраты, связанные со сложными культурными условиями. Поэтому для удовлетворения потребностей людей необходимо найти более подходящие культурные условия и технические методы, которые легко поддаются индустриализации#39;s фармацевтические и научно-исследовательские потребности женьшеня и американского женьшеня медицинских материалов и женьшеня.

2 исследования по получению редких женьшень и агликосов путем биотрансформации

Различные женьшень присутствуют в различных количествах в растения Panax и имеют различные фармакологические функции. Некоторые женьшень, такие как Rb1 и Rg1, очень распространены, в то время как другие, такие как Rh1, Rh2, Rh3 и Rg3, являются редкими женьшень, которые присутствуют в очень небольших количествах [2]. Многие фармакологические исследования показали, что редкие женьшень, как правило, имеют лучшую фармакологическую активность. Женьшень protopanaxadiol имеет самую сильную антиопухолевую активность, и по мере увеличения количества сахарных оснований, антиопухолевая активность женьшень уменьшается в свою очередь, то есть, protopanaxadiol > Моносакварид гликозиды > Disaccharide glycosides > Trisaccharide glycosides > Тетрасаксарид гликозиды [8]. Изучая метаболические структуры женьшеня в организме, было также установлено, что большинство женьшень плохо поглощается в желудочно-кишечном тракте, и что вторичные женьшень и женьшень, которые были деглизолизованы, имеют более сильную фармакологическую активность и более высокую биодоступность, чем женьшень [9-11].

Редкие женьшень и агликосы присутствуют в очень небольших количествах в сырых женьшень растений, клеточных культур, приключенческих корней и волокнистых корней. В прошлом они были получены главным образом путем физического и химического гидролиза гликоцидных связей женьшеня, но условия гидролиза были суровыми, не легко контролировать, и производит много побочных продуктов реакции. Кроме того, в атмосферу выбрасывается большое количество загрязняющих веществ, таких, как органические растворители, кислоты и щелочи, что наносит большой ущерб окружающей среде. Для того чтобы избежать нанесения ущерба окружающей среде и получить ресурсы для устойчивого использования, многие исследователи используют пути биотрансформации для изменения структуры сахарной цепи женьшеня, с тем чтобы получить редкие женьшень и агликосы [12].

Биоконверсия-это процесс, в котором используется организм (клетки, органилы) или фермент в качестве катализатора для достижения химической конверсии. Это химическая реакция, при которой биологическая система (включая бактерии, грибы, растительные ткани и т.д.) изменяет структуру экзогенного субстрата. Его суть заключается в каталитической реакции экзогенного субстрата с использованием фермента, производимого самим организмом. Преимущества биологической трансформации заключаются в Том, что она отличается высокой избирательностью, использует мягкие условия реакции, производит мало побочных продуктов, является легкой в переработке и экологически безопасной. В последние годы наблюдается увеличение объема исследований по биотрансформации женьшеня, со многими значимыми результатами. Биотрансформация женьшеня в основном включает использование микроорганизмов или ферментов для изменения гликозиловых структур на позициях C3 и C20 женьшеня типа и на позициях C6 и C20 женьшеня типа, так что более высокое содержание женьшеня женьшеня может быть гидролизировано и направлено в редкие женьшень и агликосы [13]. Основными методами биохимической трансформации являются микробная трансформация и ферментативная трансформация.

2.1 преобразование микробов

Метод преобразования микробов является недорогостоящим, имеет мало побочных продуктов и широко используется. Многие исследователи имитировали В случае необходимостиvivo метаболизм женьшеня и обнаружили, что реальный активный ингредиент, который оказывает влияние женьшеня является aglycone путем преобразования женьшеня через некоторые кишечной флоры, которая закладывает основу для разработки новых лекарств [14]. Bae В то же время- эл. - привет.[15]изолированные молочно-кислотные бактерии кишечной флоры, которые могут преобразовать женьшень в соединение K, И преобразование Rg3 в Rh2 и PPD кишечными бактериями Bacteroides sp., Eubacterium sp. и Bifidobacterium sp. [16]. Помимо кишечных бактерий, микроорганизмы, которые биотрансформируют женьшень, также включают грибы, такие как аспергилл, пенициллий, ризопус, и слизь видов. * * * * *В то же время- эл. - привет.[18]обнаружили, что небольшие филяктивные грибы Aspergillus Нигер (3.1858) и Absidia coerulea (3.3538) имели возможность конвертировать Рг - 1в Rh1, при коэффициенте преобразования 80,9%.

Фу цзяньго [19]использовал большой лечебно-пищевой грибок двойного назначения, чтобы сообразовывать культуру с американским женьшенем и его корневым экстрактом, а также биотрансформировал женьшень с использованием твердого ферментации. Результаты показали, что ферментная система, выделенная мицелием, имеет функцию разложения диол-типа сапонинов, И имеет очень слабую функцию разложения для triterpene saponins, которые могут производить соединение к. ченг и др. [20]используется Caulobacter leidyia, который производит β-glucosidase, чтобы преобразовать женьшень Rb1 в F2. Bao Haiying В то же время- эл. - привет.[21]использовали Rhizopus sp. для преобразования женьшень Re в Rg1, Rg5 и Rk1, с коэффициентом преобразования до 92,16%. Цуй ю и др. [22]выделили четыре штамма из почвы, где выращивался женьшень. Путем преобразования женьшеня фруктов всего сапонина (SFPG), штамм Fusarium spp. который может преобразовать соединение К. К.был отсортирован.  Этот штамм отличается высокой специфичностью и высокой эффективностью преобразования, обеспечивая новый способ промышленного производства соединения K.

1. ДаиJun-gui В то же время- эл. - привет.[23, 24] также проделали большую работуБиотрансформация женьшеня- да. Rg1 и Rb1 были преобразованы Fusarium oxysporum Z-001, и в общей сложности было получено 9 метаболитов, из которых 6α,  12 град-дигидроксидаммарт -3- 1 -20(с)- о-град-д-глюкопираносайд и 3а-окса -3- а-гомо -6 (с), 12 град-дигидроксидаммарт -3- 1 -20(с)- о-град-д-глюкопираносайд являются новыми соединениями; Rg1 был преобразован в пять метаболитов синим цветом Aspergillus sp. AS3.2462, из которых 3-oxo-7β-hydroxy-20(S)-protopanaxatriol и 3-oxo-7β, 15α-dihydroxy-20(S)-protopanaxatriol являются новыми соединениями.

2.2 преобразование фермента

По сравнению с микробной трансформацией метод фермента имеет короткий цикл реакции, меньший уровень загрязнения, высокую чистоту полученного продукта, высокую управляемость и определенную степень конкретности. Ферменты различных свойств действуют на гликосидические связи различных конформаций и композиций, тем самым позволяя целевое формирование желаемого продукта. Ко и др. [25]изучали гидролиз смеси тритерпеновых гликозидов различными гликозидными гидролазами. Смесь тритерпене сапонинов гидролизировалась с использованием сырого фермента галактозидазы из аспергиллы оризаи и лактазы из пенициллия sp. Соответственно, произведено большое количество Rg2 и Rh1; Гидролиз триол-сапониновой смеси с использованием сырого фермента нарингиназы, полученного из декумбенов пенициллия, привел к образованию метаболита кишечника F1 и небольшого количества 20(S)-PPT. Это первый отчет об эффективной подготовке Rg2, Rh1 и F1 с использованием ферментативного гидролиза смеси triol- типа сапонина. Последующие исследования по конверсии диол гликозидной смеси различными гликозидазными ферментами показали, что сырые ферментные растворы лактазы из аспергиллы oryzae, грау-галактозидазы и целлюлазы из триходермы viride могут преобразовать F2, соединение K и Rd, соответственно; Сырый фермент лактозы из пенициллия может конвертировать Rd, Rg3 и соединение к. это первый отчет о ферментативной подготовке F2 и Rg3 в больших количествах с использованием смеси диол-типа сапонинов [26].

Лю (Liu)В то же время- эл. - привет.[27]использовали сырую гликозидазу, полученную из аспергиллы, Нигер, для преобразования Rg3 (R) в PPD (S, R) с коэффициентом преобразования до 100%; Конвертировано Rf в 20(S)-PPT со скоростью конвертации 90,4% [28]. Исследовательская группа (подпись) джинFengxie [29]провела большую работу по производству редкого сапонина Rh2 путем ферзиматического преобразования. Используя недавно обнаруженные женьшень β-glucosidase, глицезил группы женьшень диол типа был частично гидролизирован для производства Rh2 и других сапонинов. Они проверяли и вырабатывали инженерные бактерии, производящие ферменты, разрабатывали технологию разделения и очистки вторичных сапонинов ферментативных продуктов преобразования, Rh2 может быть произведено в промышленности путем ферзиматического преобразования. Этот метод был продемонстрирован в производственной практике, чтобы иметь коэффициент преобразования более 60% для производства Rh2 из женьшеня диола, чистота Rh2 90%, и выход Rh2 более чем 0,5% сырого женьшеня материала, что в 500 раз выше, чем выход из красного женьшеня. Скорость восстановления фермента после реакции составляет 60%.

С развитием генной инженерии, в последние годы некоторые исследователи начали пытаться передать гликкосидазе гены в кишечной палочки. Определенный прогресс был достигнут в биотрансформации женьшеня с помощью рекомбинантных ферментов, полученных через высокую экспрессию. - нет. Нет.В то же время- эл. - привет.[30]перенесли ген β-glycosidase, клонированный из сульфолобуса solfataricus, в E. coli. Полученный рекомбинантный фермент смог преобразовать женьшень экстракт корня в соединение K, С коэффициентом пересчета 80,5%. Ю, ю, юВ то же время- эл. - привет.[31]перенесли ген β-glycosidase клонирован из пирококка furiosus в E. coli, и в результате рекомбинантного фермента сначала преобразован женьшень экстракт корня в соединение - к,с коэффициентом преобразования 79,5%, а затем в aglycone PP- д,с коэффициентом преобразования 100%, урожайность женьшеня может достичь 1,8 г · л -1. Урожайность соединения к и женьшеня в этом исследовании является самой высокой в литературе, поэтому у него есть хорошие перспективы для индустриализации.

Несмотря на значительный прогресс, достигнутый в биохимической трансформации женьшеня, для достижения индустриализации необходимо выявить высокоурожайные штаммы и ферменты, которые могут конкретно трансформироваться или получать рекомбинантные ферменты с высокой степенью преобразующей активности с помощью генной инженерии, а затем создать соответствующие условия промышленного производства. Это имеет большое значение для масштабного производства женьшеновых производных и исследований инновационных лекарств.

3 исследования синтетической биологии женьшень

Синтетическая биология натуральных лекарственных средств основана на геномных исследованиях, которые включают в себя обнаружение и характеристику компонентов, участвующих в биосинтезе натуральных лекарственных средств, их проектирование и стандартизацию с использованием инженерных принципов, а также реконструкцию биосинтезных путей и метаболических сетей путем их сборки и интеграции в клетки шасси, Для достижения целевого и эффективного гетерологического синтеза активных фармацевтических ингредиентов и решения ряда крупных проблем в области исследований, разработок и производства натуральных лекарственных средств [32]. В области разработки и синтеза натуральных лекарственных средств применение синтетической биологии позволяет более точно контролировать метаболические пути. Генетическое манипулирование биологическими путями биосинтеза натуральных продуктов может использоваться для производства инновационных молекул лекарственных средств на основе натуральных продуктов. Синтетические "суперпроизводители", которые могут производить важные природные препараты, также могут быть спроектированы и изготовлены. Желаемые целевые соединения могут быть получены непосредственно путем ферментации "супер-производителей". И, как ожидается, станет одной из самых перспективных зеленых технологий для производства наркотиков в будущем. Она может эффективно решать проблемы ресурсов, которые могут быть вызваны исследованиями и разработками природных лекарственных средств из растений. В настоящее время синтетическая биология добилась значительного прогресса в производстве некоторых лекарственных натуральных продуктов.

Ван вей и др. [33]впервые клонировали ген синтазы таксанов из китайского ю и построили путь биосинтеза таксанов, введя его в Saccharomyces cerevisiae. Рекомбинантные бактерии могут непосредственно производить таксан, предшественник paclitaxel, закладывая основу для синтетических биологических исследований таксановых соединений. Аджикумар и др. [34]использовали эшерихию коли для производства ферментации paclitaxel's ключевой прекурсор, таксол. Урожайность может достичь 1 г · л -1 благодаря fed- пакетной обработке, что означает, что, как ожидается, за счет дальнейшей оптимизации других шагов биосинтеза paclitaxel, крупномасштабная подготовка paclitaxel через синтетическую биологию в конечном итоге будет достигнута.

Конг цзяньцян и др. [35]получили прекурсоры артемизинина жишуйхуай -4, 11- диен и артемизиновую кислоту путем переноса генов, связанных с биосинтезом артемизинина, в Saccharomyces cerevisiae. Кроме того, синтаза жишуйхуэй -4, 11- диен, была полностью генетически оптимизирована, что значительно повысило каталитическую эффективность синтазы жишуйхуэй -4, 11- диена и Что значительно повышает урожайность артемизинина - 4,11 - диена в искусственных бактериях. - уэстфолл.В то же время- эл. - привет.[36]создали искусственный штамм Saccharomyces cerevisiae для производства артемизинина - 4,11 - диена, который может достигать урожайности 40 г · л -1 через культуру fed-batch и синтезировать его в дигидроартемизиническую кислоту, являющуюся непосредственным прекурсором артемизинина, С общей доходностью 48,4%. Это позволяет готовить прекурсоры артемизинина в больших количествах с помощью синтетической биологии, что упрощает синтез артемизинина и тем самым значительно снижает себестоимость его производства.

В последние годы был достигнут определенный прогресс в исследованиях биосинтеза женьшеня и его механизма реакции, что заложило основу для производства женьшеня с помощью синтетической биологической технологии [37, 38]. Биосинтез женьшеня включает в себя более 20 последовательных ферментативных реакций (рис. 1). Ключевыми ферментами являются 3- гидроксия -3- метилглутарил-коа редуктаза (HMGR), фарнезилдиофосфат-синтаза (FPS), скволеновая синтаза (SS), эпоксидаза скволена (SE) и даммаренедиол-ii синтаза (DDS). FPS, Синхронизация функций- сквален.(SS), эпоксидаза squalene (SE), Синхронизация функцийdammarenediol-II (DS), AS, cytochrome Код P450(CYP450) и гликозилтрансферазы (GT) и т.д.

3.1 3- гидрокси -3- метилглутарил-коэнзим

 Редуктаза (HMGR) HMGR признается в качестве первого фермента, ограничивающего скорость, в биосинтезе женьшеня. Это ключевой фермент, который начинает функционировать в процессе синтеза терпеноидов, Влияние на биосинтез женьшеня путем воздействия на производство IPP и DMAP- п,прекурсоров женьшеня. У у уВ то же время- эл. - привет.[39]клонировали ген HMGR от 4- летних американских корней женьшеня. Закодированный белок состоит из 589 аминокислот. Анализ биоинформатики показал, что HMGR содержит два трансмембранных домена и каталитический домен. Этот ген имеет высокую гомологию с генами HMGR, клонированными из многих растений, особенно с геном HMGR камелии синенсис, который имеет гомологию до 83,8%. Биосинтез камптотецина, монотерпенола индола алкалоида в камелии синенсис, должен пройти через путь мевалоната (MVA).  Можно сделать вывод о Том, что ген HMGR тесно связан с биосинтезом женьшеня.

3.2 фарнезилпирофосфатный синтаз (FPS)

Ким и др. [40]клонировали кодирование гена FPS от корней женьшеня, PgFPS, и кодированная аминокислотная последовательность составила 77%, 84%, 87% и 95% гомологичных FPS от Arabidopsis, rubber, Artemisia annua и Centella asiatica, соответственно. Анализ южного блута показал, что в женьшень кодируется более двух генов FPS. Было подтверждено, что рекомбинантный белок имеет активность FPS, выражая PgFPS в Escherichia coli. Обработка волосатых корней женьшеня метилжасмонатом, как было установлено, повышает как уровень mRNA PgFPS, так и активность FPS. Ранее сообщалось, что метилжасмонат вызывает накопление женьшеня в клетках суспензии корня женьшеня [41], что, скорее всего, связано с увеличением выражения ПФЦП.

Ким и др. [42]также пережатые ПФЦВ из женьшеня в волосатых корнях Centella asiatica и обнаружили, что уровень mRNA синтазы damaran в Centella asiatica значительно возрос, а производство triterpene saponins madecassoside и asiaticoside быстро возросло. Вышеуказанные исследования показывают, что FPS играет важную роль в биосинтезе тритерпеноидов и является важным компонентом для улучшения женьшеня производства с использованием синтетических биологических методов.

3.3 синтаза сквалена (SS)

Сс находится в точке ответвления изопреноидного пути и катализирует начальный этап синтеза стеролов и тритерпеноидов. Его содержание и деятельность играют очень важную роль в производстве женьшень. Ли и др. [43]клонировали ген SS PgSS1 из библиотеки cDNA, построенной из листьев женьшеня. Этот ген является 84,1%, 75,78%, 81,45% и 71,33% гомологичным для генов SS в сое, арабидопсе, табаке и рисе, соответственно, с 84,1%, 75,78%, 81,45% и 71,33% гомологией. Вектор экспрессии растений для гена SS был построен, и выражение гена было вверх-регулируется путем преобразования женьшеня, чтобы получить приключительные корни. Результаты показали, что выражение всех последующих генов было улучшено, что привело к увеличению количества стеролов и женьшеня, что указывает на то, что сс играет регулирующую роль в биосинтезе как стеролов, так и женьшеня.

Ким и др. [44]клонировали два других гомологических гена PgSS1, PgSS2 и PgSS3, из библиотеки выраженных тегов последовательности (EST), построенной с использованием в качестве материала предприимчивых корней. Функциональный анализ завершенности показал, что PgSS1, PgSS2 и PgSS3 могут восстановить эргостерол прототрофического фенотипа Saccharomyces cerevisiae SS генного дефектного мутанта. Анализ гибридизации В случае необходимостиsitu показал, что уровни транскрипции этих трех генов в различных органах женьшеня различны. Эти результаты свидетельствуют о Том, что три гена SS имеют различные формы выражения, но все они участвуют в синтезе сквалена женьшеня. Со со соВ то же время- эл. - привет.[45]перенесли ген SS женьшеня в каллус сибирского женьшеня с помощью Agrobacterium tumefaciens, чтобы выразить окончательные метаболиты. Результаты показали, что повышение активности женьшеня SS значительно увеличить производство стеролов, а также увеличить производство тритерпеноидов сапонинов. Из этого следует, что SS является ключевым ферментом в синтезе женьшеня сапонинов. Увеличение экспрессии сс не только способствует конверсии ФТП в сквален, но и опережает активность других ферментов, расположенных ниже по течению, тем самым увеличивая производство стеролов и тритерпеноидов.

В настоящее времяShicui В то же время- эл. - привет.[46]разработали на основе женьшеня SS грунтовки для создания вектора экспрессии генов SS генов и античувственных фрагментов. Вектор был преобразован в женьшень каллюса ткани через агробактерии-медиум преобразования. Уровень экспрессии генов SS в преобразованной каллусовой ткани снизился, а содержание сапонина также изменилось. Предполагается, что SS является ключевым ферментом в биосинтическом пути женьшеня, и что ингибирующее выражение гена SS может регулировать производство женьшеня. Поэтому сс также является очень важным компонентом для улучшения производства женьшеня с использованием синтетических биологических методов.

3.4 эпоксидаза сквалена (SE)

SE катализирует первую окислительную реакцию стерола и биосинтеза тритерпеноидов и считается одним из ферментов, ограничивающих скорость синтеза. Хан и др. [47]клонировали два гена SE, PgSQE1 и PgSQE2, из библиотеки cDNA, построенной из женьшеня листья и авантвенные корни, соответственно. Пgsqe1 RNA интерференция (RNAi) технология была использована, чтобы обнаружить, что глушитель PgSQE1 в трансгенных корнях женьшеня может значительно упрегулировать выражение PgSQE2 и циклоартенол синтазы (CAS), в результате чего увеличение содержания стерола. Эти результаты свидетельствуют о Том, что пgsqe1 и пgsqe2 имеют различные механизмы регулирования, при этом пgsqe1 участвует только в синтезе женьшеня и не участвует в производстве стерола. Цзян шицуй и др. [48]исследовали различия в общем содержании сапонина и мономера сапонина в различных тканях и органах американского женьшеня и взаимосвязь между этим и уровнями экспрессии генов SS и SE. И обнаружили, что уровни экспрессии генов SS и SE в 14 тканях и органах существенно различаются и что существует значительная положительная корреляция с содержанием женьшеня Re, Rg1, Rb1, Rd. Рд.и общим содержанием женьшеня. Это показывает, что SS и SE играют чрезвычайно важную роль в пути синтеза женьшеня.

3.5 синтазы Даммарендиол - 2(DS) и a-amyrВ случае необходимости(AS)

2,3- оксидоскаленовая циклизация, катализируемая оксидоскаленовой циклоразой (OSC), является ключевым местом в биосинтезе тритерпеноидных сапонинов и стеролов. OSC образует мультигенное семейство, а циклизация оксидоскулена может производить более 100 тритерпеноидов с различными скелетами. Гены OSC были клонированы из различных растений. Два гена O- ск,C,C,C,связанные с женьшень синтез были клонированы из женьшеня: DS и как гены, которые являются ключевыми генами фермента для синтеза женьшень damarane и oleanane типов, соответственно. Кусиро и др. [49]использовали волосатые корни женьшеня в качестве материала для приготовления микросомов, Обнаружили, что он может циклизировать 2,3 - оксо-сквален в dammarane-II В случае необходимостиvitro. Тансакул и др. [50]разработали дегенеративные грунтомеры на основе сохраненной последовательности гена OSC и клонировали ген DS PNA из корня женьшеня. После переноса в Saccharomyces cerevisiae этот ген может стимулировать производство dammarane-II.

Хан и др. [51]клонировали ген DS DDS из библиотеки ES- т,построенной с использованием цветов женьшеня, что соответствует вышеупомянутой генной последовательности PNA. Было установлено, что дрожжи, преобразованные с геном DД-р,могут производить damareneii и hydroxydamarenone; Метилжасмонат может прегулировать выражение гена DDS; Глушение гена DDS по технологии RNAi может сократить производство женьшень в корнях женьшеня до 84,5% оригинала. Ли и др. [52]перенесли ген DDS в табак, что привело к образованию женьшеня типа damarane, тем самым значительно повысив устойчивость табака к вирусу табачной мозаики. Эти результаты показывают, что DS играет очень важную роль в биосинтическом пути женьшеня и является важным компонентом для получения даммаранского женьшеня типа с использованием синтетических биологических методов. Как катализатор циклизации 2,3- окислителя квалена, чтобы сформировать eudesmanolide, и до сих пор является единственным ключевым ферментом, найденным в синтезе женьшенозидов олаананового типа.

Кусиро и др. [53]клонировали последовательность cDNA AS от волосатых корней женьшеня и перенесли PNY в Saccharomyces cerevisiae, чтобы катализировать производство женьшень Rb1. Чжао шуцзинг и др. [54]также клонировали как ген из корня женьшеня и успешно создали вектор выражения античувственного растения для как гена. Устанавливая вектор выражения античувственного для как гена и используя античувственную RNA технологию для ингибирования выражения как гена, метаболический поток в основном направлен на damarane- тип triterpene saponВ случае необходимостиветви, тем самым увеличивая содержание женьшеня.

3.6 цитохром P450 (CYP450)

CYP450 является ключевым ферментом в биосинтезе женьшеня пути, так как он проводит сложные изменения, такие как гидроксиляция и окисление углерода тритерпене скелет женьшеня. В последние годы, используя следующее поколение секвенирования технологии и биоинформатики анализа, Соответствующие CYP450s, участвующие в биосинтезе женьшеня, были проверены, а биологические функции генов-кандидатов были проверены, что дополнительно прояснило путь биосинтеза женьшеня [55]. Хан и др. [56]провели транскриптомное секвенирование на индуцированных метилом жасмоном предчувственных корней женьшеня и получили девять потенциальных полноформатных генов CYP450 путем сплющивания, аннотации и усиления. Среди них ген CYP716A47 не только реагировал на индукцию метилжасмоната путем упредгуляции его выражения, но и увеличил производство женьшеня в корнях женьшеня после того, как был передан трансгенным женьшень растений, чрезмерно прессующих ген SS. Преобразование гена CYP716A47 в Saccharomyces cerevisiae, выраженный рекомбинатный белок может катализировать гидроксиляцию с -12 позиции damarenediol-II, чтобы преобразовать его в протоженол. DS и CYP716A47 были одновременно перенесены в Saccharomyces cerevisiae, а производство протопанаксадиола было обнаружено в штамме рекомбинатов. Этот отчет является первым функционально подтвердить CYP450 участие женьшеня сапонина синтез.

Чен шилин's [57]исследовательская группа применила высокопроизводительную технологию секвенирования 454GS FLX для проведения транскриптомного исследования женьшеня, американского женьшеня и Panax notoЖеньшень (женьшень)и извлек CYP450 из большого объема транскриптозных данных, обеспечив важную основу для дальнейшего скрининга CYP450, задействованного в синтезе женьшеня. Солнце и СолнцеВ то же время- эл. - привет.[58]провели высокую пропускную способность секвенирования на американских корнях женьшеня и И получил 150 CYP450s путем сплинга и аннотации. Для экспериментов по индукции метилжасмоната были отобраны уровни стенограмм 27 CYP450s с самым высоким выражением. Среди корневых, стеблей, листьев и цветочных тканей только стенограмма contig00248 показывает ту же структуру выражения, что и DS. Протокол contig00248 фитогенетически близок к семье арабидопсис CYP88. В статье используется протокол contig00248 в качестве ключевого кандидата CYP450 для окисления дамаскена-ii или протопанахадиола.

О (фр.)В то же время- эл. - привет.[59]производили высокопроизводительную последовательность на корнях Panax notoginseng, которые затем были собраны, аннотированы и усилены 15 полноформатных CYP450s. Среди них стенограмма Pn00158 имеет высокую степень сходства с американским кандидатом женьшень CYP450 contig00248 стенограмма, и является гомологичным функционально подтвержденным женьшень CYP716A47 аминокислотной последовательности с высокой степенью гомологии 97,95%. Из чего следует, что Pn00158, скорее всего, CYP450 участвует в биосинтезе женьшеня в Panax notoginseng. Хан и др. [60] клонированные CYP716A53v2 из вызванной метилом жасманом библиотеки корень ES- т,и рекомбинантный белок, выраженный в Saccharomyces cerevisiae, может катализировать гидроксилирование C-6 протоженолида, чтобы преобразовать его в протоженолид. Вышеуказанный прогресс в исследованиях, касающихся женьшеня CYP450, значительно продвинул вперед исследование биосинтеза женьшеня, а также обеспечил важные компоненты для исследования производства женьшеня с помощью синтетических биологических методов.

3.7 гликозилтрансферазы (GT)

Глицезилационная реакция, катализируемая G- т,является последним шагом в биосинтезе женьшеня. Основной процесс заключается в передаче активной молекулы сахара нуклеозидного дифосфата женьшеносиду aglycone substrate, чтобы сформировать гликозидную связь. Гликозилация может повысить стабильность и растворимость женьшеня в воде, и этот процесс также определяет их разнообразие. ГТС также существуют в растениях в виде генных семейств с высокой степенью конкретности. Различные GTs необходимы для передачи различных шумоприемников или различных сахароприемников. Чэнь (Китай)В то же время- эл. - привет.[61]впервые изолировали GT от волосатых корней женьшеня и определили его молекулярную массу в 56,6 кd, используя SDS-PAGE. И его ферментативные характеристики были предварительно изучены. Yue В то же время- эл. - привет.[62]изолировали и очистили гт от подвески Panax notoginseng, которая может конвертировать Rd в Rb-1. Однако сообщений о клонировании гена GT растений Panax не поступало. Гликозилация является самым последним шагом на пути биосинтеза женьшень, и углубленные исследования имеют большое значение для выборочного получения весьма ценных женьшень.

Короче говоря, значительный прогресс был достигнут в изучении базовых основ биосинтеза женьшеноза и связанных с ним ферментов. Более 20 генов кодирования ферментов, связанных с женьшеня биосинтеза женьшеня были клонированы из женьшеня и американского женьшеня и других растений в genus Panax и функционально проверены, обеспечивая основные биологические компоненты для производства женьшеня через синтетические биологические методы и закладывая хорошую основу для этого исследования.

Saccharomyces cerevisiae обычно используется в качестве шасси клетки для проверки функции генов кодирования ключевых ферментов, участвующих в биосинтезе женьшеня. Это связано с тем, что Saccharomyces cerevisiae обладает характеристиками, необходимыми для превосходной шаровой клетки, такими как способность расти в среде культуры с простыми питательными веществами, простота увеличения производства с использованием биореактора, множественные типы с дефицитом питательных веществ на выбор и множественные выбираемые маркеры для использования. В частности, 2,3- оксидосвален, который производится Saccharomyces cerevisiae через свой собственный органический путь MVA, является предшественником синтетических женьшенозидов. Это обеспечивает большое удобство для строительства метаболических путей женьшеня в Saccharomyces cerevisiae. Кроме того, поскольку гликозиловые группы некоторых женьшень не являются необходимыми для фармакологических эффектов, фармакологическая активность женьшеньовых агликосов, которые были дегликозилированы, даже сильнее, чем у женьшень. Таким образом, это также имеет большое значение, чтобы непосредственно получить женьшень агликосы через синтетическую биологию.

4. Выводы

Женьшень, американский женьшень и их сапонины стали горячей точкой исследований из-за растущего спроса на лекарства и исследования и разработки. В этих областях был достигнут определенный прогресс. В дополнение к искусственному выращиванию женьшеня и американского женьшеня сообщалось о нескольких методах получения женьшеня сапонинов внутри страны и за рубежом, включая культуру тканей, биотрансформацию и синтетические биологические методы. Культура ткани в настоящее время является важным способом решения проблемы источников наркотиков. Учитывая, что метаболический путьЖеньшень (женьшень)Постепенно стало ясно, выражение ключевых генов фермента может быть расширено с помощью методов генной инженерии для улучшения синтеза женьшеня и получения высокой урожайности клеточных линий, тем самым более эффективно смягчая растущий спрос на лекарства и исследования и разработки. Биотрансформация имеет выдающиеся преимущества в получении редких женьшень и их агликосов, и это также может быть возможно, чтобы получить женьшень производные, которые не существуют в естественных растений. Синтетические биологические исследования женьшеня также являются перспективным подходом с широкими перспективами развития.

Биосинтез женьшеня представляет собой сложный и динамичный процесс, регулируемый многочисленными факторами. Для достижения цели производства женьшеня через синтетическую биологию необходимо не только передать клонированные гены соответствующих ключевых ферментов в соответствующие клетки шаша и искусственно изменить эти гены, чтобы обеспечить гетерологическое и эффективное выражение, но и провести углубленное изучение некоторых регулирующих генов, которые регулируют метаболическую сеть женьшеня, с тем чтобы найти переключателя, который включает всю метаболическую сеть, Тем самым улучшается общий уровень экспрессии генов во всем метаболическом пути и более эффективно увеличивается производство женьшеня. До сих пор, несмотря на некоторые крупные достижения в области синтетических биологических исследований женьшеня с точки зрения получения биологических компонентов и проверки их функций, исследования по модификации шасси клеток и сборке метаболических путей только начались. Поэтому соответствующие дисциплины должны объединить усилия для совместного содействия развитию этих исследований.

Ссылки на статьи

[1]     - он...  - DT,  13. Ван  - B,   Чэнь (Китай)   - джей Эм.      В. научные исследования   Ii. Прогресс   По лекарственным средствам  Последствия для окружающей среды  Соединенные Штаты америки Женьшень (женьшень)  [J].- J. < < ляонин юнив > > В чем дело? 13 ч. 00 м. - чин - мед, 2012 год,  14: 118-121.

[2]    Кристенсен ип.    Женьшень: химия, биосинтез, анальный ysis, и B. потенциальные возможности В области здравоохранения Последствия для окружающей среды [J].   1 2 3 4 - продукты питания Национальный исследовательский институт по атомной энергии - привет. - привет.2009, 55: 1-99.

[3]     Цуо (фр.) - бм, Гао (Gao) Ну и ну. Dong  - да, да. В то же время - эл. - привет.   Ii. Прогресс Постоянный представитель российской федерации Культура ткани в лекарственных растений Panax женьшеня [J].   Мо чин мед, 2012 год,14: 34 — 37.

[4]    Лю х, гао ви, зуо бм и др.    Развитие культуры ткани в Panax quinquefolium - я.[J].   Мо чин мед, 2012, 14: 1-4.

[5]     Гао ви, цзя у, штаб-квартира дуана и др.   Индустриализация культуры тканей лекарственных растений [J].   Китай - J.13 ч. 00 м. - чинMater Med, 2003, 28: 385-390.

[6]     у - КВТ, Цао (Cao) Ну и ну. - хан - эй джей, В то же время - эл. - привет.   - жасминическая болезнь - кислота; Улучшает женьшень аккумуляции в авантюритной корневой культуре Panax женьшень C. A. Meyer [J].   М. : наука, 2002.

[7]     Чэнь у, гао ви, цзя у и др.   Достижения в исследованиях тканей и 1. Ячейка Культура и искусство В случае необходимости В медицинских целях 3. Виды растений Организация < < панакс > > L.  [J].   Наркотики на подбородке, 2005, 36: 616 — 620.

[8]    29. Доу Д-р кью, JВ случае необходимости - L, Чэнь (Китай) - эй джей.   Авансы в счет авансов и Перспективы на будущее Исследования по химическим компонентам и фармакологической деятельности женьшеня панакса [J].   - J.Шэньян (Китай)- "фарм"Univ, 1999, 16: 151 — 156.

[9]    Кобаши к.   Отношение кишечных бактерий к фармакологическим последствиям женьшеня [J].   Bioci Microflora, 1997, 16: 1-7.

[10]  Г-жа хасегава - эйч.   Доказательства того, что В чем дело? B. эффективность Женьшень: основное и В медицинских учреждениях Испытания: 1 3. Метаболизм 3. Активация Дегикозилация женьшеня По запросу: - кишечник. 1. Бактерии и 1. Эстерификация С жирной кислотой [J].   - J.Pharmacol - ТСС,2004 год,95: 153 — 157.

[11]  13. Ван - да, да. Чэнь (Китай) - джей, Чжу (Китай) SF, F,et, - эл. - привет.   Повышение эффективности работы Памяти в мире  Мыши и мыши  и  Увеличение объема ресурсов  Соединенные Штаты америки Гиппокампал (гиппокампал)  3. Возбудимость  В случае необходимости С крыс по  Женьшень (женьшень)  Rg1's  5. Метаболиты   Женьшень (женьшень)  Rh1    И протопанакриол [J].   J Pharmacol Sci, 2009, 109: 504 — 510.

[12]  Лю (Liu) - X, Dai  - джей джи.   Авансы в счет авансов В области прав человека Исследование биотрансформации Женьшень (женьшень) [J].    Женьшень (женьшень) Res,  2010 год, 22: 19-22.

[13]  Чжан (Китай) - YX, Чэнь (Китай) - СИ, Чжао чжао чжао - WQ.    Авансы в счет авансов В случае необходимости Ii. Исследования О биотрансформации Соединенные Штаты америки Женьшень (женьшень) [J].    J  Shenyang  М. : юнив, 2008, 25: 419 — 422.

[14]  Ван и, лю тх, ван в и др.  Исследования по вопросу о преобразовании Женьшень (женьшень) Rg1  По запросу: - кишечник. - флора  [J].    Китай (Китай) J  Чин матер мед, 2001 год,26: 188 — 190.

[15]   Бэ еа, чу мк, пак эк и др.   Метаболизм женьшеня R(c) человеком Кишечные бактерии и В его рамках По теме: Антиаллергическая активность [J].   Биол фарм булл, 2002, 25: 743 — 747.

[16]  Bae EA, В чем дело?M- джей,Choo MK и др.   Метаболизм 20(S)- и 20(R)- женьшень Rg3  По запросу: По правам человека - кишечник. 1. Бактерии и Его связь с биологической деятельностью В случае необходимостиvitro [J].   Биол фарм булл, 2002, 25: 58 — 63.

[17]  Цуй ин, чжан икс, чжао ик.    Достижения в исследованиях по вопросам подготовки В случае редких заболеваний Женьшень (женьшень) Путем биотрансформации [J].   Наркотики на подбородке, 2009, 40: 676 — 680.

[18]   Дон аль, цуй ЙДЖ, го гц и др.   Микробиологическое преобразование женьшеня Rg1  [J].   J  13 ч. 00 м. - чин Pharm  Sci,  2001,  10. : 114- 118.

[19]   13 ч. 00 м. -  - джей джи.     Исследования по теме: По состоянию на В настоящее время 1. Микробиологическая система  B. преобразование системы  Соединенные Штаты америки Женьшень [D].   Чанчунь: цзилинский сельскохозяйственный университет, 2004.

[20]    Чэн лк, ким мк, ли чжу, В то же время - эл. - привет.     Преобразование должностей в должности Основной женьшень Rb1 Женьшень F2 Автор: Caulobacter leidyia [J].Biotechnol Lett, 2006 год,28: 1121 — 1127.

[21]   Бао хи, ли л, зан юф и др.   Женьшень и биотрансформация Полиция ризопуса  [J].   Mycosystema, 2010 год, 29: 548-554.

[22]    Ну и ну. - Y, В настоящее время - биг, В чем дело? - Y, В то же время - эл. - привет.    На микробной основе Преобразования в целях развития Женьшень (женьшень) На территории комплекса K  Из российской федерации всего saponins  В случае необходимости Фрукты и фрукты Женьшень панакс [J].   Наркотики на подбородке, 2007, 38: 189 — 193.

[23]  Лю (Liu) - X, Цяо (Китай) - лр, Xii. Се D,  В то же время - эл. - привет.    На микробной основе Дегликозиляция и кетонизация Женьшень Rg1 и Rb1 от Fusarium oxysporum [J].   J Asian Nat Prod Res, 2011 г.,13: 652-658.

[24]  Лю (Liu) - X, Цяо (Китай) - лр, Се ди, В то же время - эл. - привет.   На микробной основе B. преобразование системы Женьшеносидоз-rg1 Absidia coerulea и обратная активность метаболитов к многолекарственным резистентным опухолевым клеткам [J].Филадельфия, 2011, 82: 1313 — 1317.

[25]   ко - старший, Чхве КДЖ, сузуки к и др.   Ферментативная подготовка Женьшень Rg2, Rh1 и F1 [J].   Хем фарм булл, 2003, 51: 404 — 408.

[26]  ко - старший, < < судзуки > > - Y, < < судзуки > > K,  В то же время - эл. - привет.     Обозначенные буквой: Производство и продажа Женьшень Rd, F2, Rg3 и соединение K по enzymatic me- thod [J].   Хем фарм булл, 2007, 55: 1522 — 1527.

[27]   Лю (Liu) - L, - чжу. X- м,ван QJ, В то же время - эл. - привет.   1. Ферментативная ферма Подготовка к экзамену Из 20(S), - протопанакадиол По запросу: B. преобразование системы Из 20(S), R -Rg3 Из российской федерации Черный цвет кожи Женьшень (женьшень)  [J].   - фитохимия, 2010 год, 71. :  1514- 1520.

[28]  Лю л, гу лж, чжан дл и др.   Микробное преобразование редкого женьшеня Rf в 20(S)- протоанакриол по Aspergillus Нигер [J].   Biotechno1 Biochem, 2010 год,74: 96 — 100.

[29]   Ким ким ким DS,  По рукам и ногам Ю хс и др.   Женьшень (женьшень) Rh2 получают из фермента реакции [J].   J Dalian Inst Light Ind, 2002, 21: 112 — 115.

[30]   Noh  - хх, - сын мой. - джей-ви, Ким ким ким - HJ, В то же время al.     Женьшень (женьшень) Производство соединения K из экстракта корня женьшеня с помощью термостабильного be- ta-glycosidase Из российской федерации Сульфолобус solfataricus [J].   - биосчи Bio- techno1 Biochem, 2009, 73: 316 — 321.

[31]   Yoo  М-м, (фр.) ё м - эс-джей, - в парке - СИ, В то же время al.     Производство и продажа Агликон протопанаксадиол виа соединение к термостойким станко-гликозидазом от Pyrococcus furiosus [J].   Группа по планированию семьи Микробиол (микробиол) Биотехнол, 2011, 89: 1019 — 1028.

[32]   Чэнь (Китай) - SL, - чжу. - XX, 1. Ли Ср., ПНР В то же время al.     Ii. Геномика и Синтетическая биология традиционной китайской медицины [J].   Acta Pharm Sin, 2012, 47: 1070-1078.

[33]   13. Ван Ч, ч, ч. Организация < < мужчины > > C,  - чжу. P,  et  al.     В предварительном порядке  Исследования по теме:  По метаболическим веществам Инженерно-технические работы Соединенные Штаты америки - дрожжи. для Производство и сбыт - таксадиен [J].Китай Biotechnol, 2005, 25: 103 — 108.

[34]   Аджикумар ПК, сяо вх, тьо ке и др.   Оптимизация изосферных путей для избыточного производства прекурсоров таксола в Escherichia coli [J].   Наука, 2010, 330: 70-74.

[35]   Соединенные Штаты америки - джей-кей, 13. Ван Ч, ч, ч. 13. Ван В общем, et  al.     В настоящее время Повышение эффективности работы Производства 11- диена по варианту [J], отвечающему требованиям года. JAppl Microb, 2009, 106: 941 — 951.

[36]   Westfall  - пи-джей, В чем дело? - ди-джей, - ленихан. - младший,  et  al.     Производство и продажа  Аморфадиена в дрожжевых составах и его преобразования в дигидроартемизиновую кислоту, прекурсора противомалярийного агента артемизинина [J].   Proc Natl Acad Sci USA, 2012, 109: E111-118.

[37]  У у у - Q, Париж (Франция) - YQ, Солнце и Солнце C,  et  al.     Ii. Прогресс В случае необходимости Женьшень биосинтез и перспективы вторичной метаболической инженерии для В настоящее время Производство и продажа Соединенные Штаты америки Женьшень (женьшень)  [J].    Китай (Китай) Биотехнол, 2009, 29: 102 — 108.

[38]  Организация < < мин > > - qi, В чем дело? T,  Хуанг (Huang) F,  et  al.     Авансы в счет авансов В случае необходимости Ii. Исследования На женьшеновой стороне 2. Биосинтез и В его рамках По теме: 1. Ферменты [J].    Наркотики на подбородке, 2010, 41: 1913 — 1917.

[39]   Wu   - Q,  Sun   C,   Чэнь (Китай)  - эл. Эл.     3. Идентификация  и  Экспрессионный анализ 3- гидрокси -3- метилглутарил коэнзима редуктазы гена Из российской федерации Соединенные Штаты америки Женьшень (женьшень) [J].   На территории предприятия Организация < < омикс > > J,  2012,  5: 414-420.

[40]   Ким от, бан х, чжон СИ и др.   Молекулярная характеристика гена фарнезилдифосфата женьшеня и его up- reg- ulation метилжасмонатом [J].   Биол завод, 2010, 54: 47 — 53.

[41]  3. Организация < < али > > - мб, у - КВТ, - хан - эй джей, et  1. А1. В. метил - жасмонат И с салицилом - кислота; Илисайон (elicitaion) 3. Индусы Женьшень (женьшень) Накопление, энзиматическое  и  - неэнзиматический   Антиоксидант (anti-oxidant)  in   Культура подвески Корни женьшеня Panax in  Биореагенты (биореагенты)  [J].   На территории предприятия Сотовый Rep, 2006, 25: 613-620.

[42]   Ким от, ким ш, охяма к и др.  Упрегуляция фитостерола и triterpene  2. Биосинтез  in  Сентелла азиатика волосатая Истоки истощены слишком сильно  ginseng   - фарнесил.  D. дифосфат  Синхронизация функций  [J]. Состав завода Rep, 2010, 29: 403-411.

[43]   В чем дело?  М-м, Чон ё н! - джей-эйч,  Seo  - джей-ви, et  al.     Усиленная система управления Тритерпене и фитостерол биосинтез в Panax женьшеня чрезмерно прессующейся сквален Синхронизация функций - генная инженерия [J].    На территории предприятия 1. Ячейка - телосложение, 2004,  45: 976-984.

[44]   Ким ди, хан джи, ха х и др.    Выражение и функциональная характеристика Из 3 человек squalene  synthase  Гены и гены Связанных с организацией объединенных наций Биосинтез сапонина В Panax женьшень [J].   На территории предприятия Телосложение клеток, 2011, 52: 125 — 137.

[45]    Со чжу, чон чж, син цг и а1.   Над выражением squa- lene synthase в Eleutherococcus senticosus увеличивается накопление phytos- терол и тритерпене [J].    Химия, 2005, 66: 869 — 877.

[46]   В настоящее время  - ск, Чжан (Китай) - MZ, 13. Ван - Y, et  al.     1. Вмешательство Векторная конструкция женьшеня Panax "SQS ген и преобразования callus [J]. - J. - цзилин? - да. - однородность, 2011,  49. :  1136-1140.

[47]   В чем дело? - джей, In  - джей джи, - вон там. - да, да. et  al.    Правила и положения Женьшень и фитостерол биосинтеза путем вмешательства РНК сквален эпоксидазе ген в Panax женьшень [J].   Химия, 2010, 71: 36 — 46.

[48]   Jiang   SC,   Liu  - туалет,  13. Ван - Y, et  al.     Корреляция между показателями Между женьшень накопления и SQS и SQE выражение гена в В отличие от других Органов организации объединенных наций От Panax quinquefolius [J].   Chin  Травяные наркотики, 2011, 42: 579 — 584.

[49]   - кусиро. T,  - о, нет. - Y, 13. Шибуя - м, et  1. А1.   In vitro преобразование 2,3 - оксидоскалена в dammarenediol Panax женьшень микросомы [J].   Биол фарм булл, 1997, 20: 292 — 294.

[50]    Тансакул п, шибуя м, кусиро т и др.   Dammarenediol-II  Synthase, первый выделенный фермент для биосинтеза женьшеня, в Panax женьшень [J]. Февраль летт, 2006, 580: 5143-5149.

[51]   В чем дело? - джей, - вон там. - да, да. Париж (Франция) Округ Колумбия, et  al.     Выражение на английском языке и Искусственное RNA глушение гена синтазы dammarenediol in  Panax женьшень [J]. На территории предприятия 1. Ячейка - телосложение, 2006,  47: 1653-1662

[52]   Ли мх, хан джи, ким ХДЖ и др.   Производство Dammarenediol-II обеспечивает ТМВ допуск в трансгенном табаке, выражающем Panax женьшень Dammarenediol-II synthase  [J].     На территории предприятия 1. Ячейка Физиология, 2011, 53: 173 — 182.

[53]   - кусиро.  T,   13. Шибуя  M,   - эбидзука.  - Y.     У-амирин  Синтакэзное клонирование оксидоскаленового циклона, которое ускоряет формирование наиболее популярного тритерпена среди высших растений [J].   Eur J Biochem, 1998, 256: 238-244.

[54]   Чжао шж, ху СИ, лян иль и др.    Клонирование женьшеня в качестве гена и В настоящее время Строительство зданий и сооружений Соединенные Штаты америки В его рамках - антиздравый смысл. На территории предприятия Вектор выражения мнений [J].     Китай (Китай) Биотехнол, 2008, 28: 74 — 77.

[55]  Национальный институт статистики - да, да. О (фр.) - хм, Хуанг (Huang) - если бы.    Авансы в счет авансов in  В настоящее время Исследования по теме: CYP450 включает в женьшень биосинтез [J].   Организация < < уорлд Sci > > Technol/Mod Tradit Chin Med Mater Med, 2012, 14: 1177 — 1183.

[56]   Han  - джей, Ким ким ким - HJ, - вон там. - да, да. et  al. В настоящее время Организация < < сэт > > P450  Фермент CYP716A47 ускоряет образование протопанахадиола из даммаренедиола-ii В течение года Женьшень (женьшень) 2. Биосинтез in  Panax женьшень [J].   Физиология растительных клеток, 2011, 52: 2062 — 2073.

[57]    Chen  - SL, Luo  - хм, 1. Ли - Y, et  Al. 454 Категории e 3. Анализ Обнаруживает гены, предположительно участвующие в биосинтезе женьшеня в Panax женьшень [J].   Состав предприятия Rep, 2011, 30: 1593-1601.

[58]    Сун СИ, ли й, у кью и др.   По новой версии Последовательность и анализ транскриптома корня женьшеня с использованием титана GS FLX Ii. Платформа По адресу: Откройте для себя - как предполагается. Гены и гены Участие в проекте В женьшеновии 2. Биосинтез  [J]. BMCGenomics, 2010,   11. :

262-273.

[59]   Luo HM, Sun C, Sun YZ, и др. Анализ транскриптома корень Panax notoginseng открывает предполагаемые triterpene saponin-биосинтетические гены и генетические маркеры [J].   BMC Genomics, 2011, 12: S5.

[60] хань  - джей, - хван - хш, Чхве (Choi)  С.у., et  al.     1. Цитохром P450 CYP716A53v2 3. Катализаторы В настоящее время 1. Формирование вооруженных сил Соединенные Штаты америки Протопанаксатриол из протопанаксадиола В течение года Биосинтез женьшенозида В па-накс женьшень [J].   Физиология растительных клеток, 2012, 53: 1535 — 1545.

[61]    Чэнь X, сюэ Y, лю ДЖХ и др.   Очистка и характеристика глюкозилтрансфер из Panax женьшеня волосатые корневые культуры [J].   Фарм биотехнол, 2009, 16: 50 — 54.

[62]   Ю СИ джей, чжун джей джей.    Очистка и характеристика UDPG: женьшень Rd  глюкозилтрансферазы Из российской федерации В настоящее время 2. Камеры Соединенные Штаты америки Panax notoginseng [J].   Proc биохимия, 2005, 40: 3742 —

3748.