Исследование экстракта хмелей для остеопороза

Остеопороз(оп)Является системным метаболическим заболеванием, характеризующимся снижением костной массы и микроскопическими структурными повреждениями костной ткани. Распространенность оп позитивно коррелируется с возрастом. Согласно эпидемиологическому обследованию, проведенному в 2019 году, распространенность остеопороза среди лиц в возрасте 60 лет и старше в китае составляла 36%. По мере старения населения Китай будет сталкиваться со все более серьезными проблемами остеопороза [1].

В настоящее время широко используемые препараты для профилактики и лечения оп подразделяются на две основные категории: антикурортные средства и анаболические средства. К антирезорным веществам относятся бисфосфонаты, кальцитонин и эстроген; Среди анаболических агентов — аналоги паратироидных гормонов, соли стронция и дрАктивные аналоги витамина D- да. Эти препараты демонстрируют значительную клиническую эффективность, но также ассоциируются с различными отрицательными реакциями [2], такими как бисфосфонаты, вызывающие остеонекроз челюсти [3] и эстроген, повышающие риск сердечно-сосудистых заболеваний [4]. Поэтому разработка новых целевых методов лечения оп имеет большое клиническое значение.

Флавоноиды широко присутствуют в растениях природы и, как доказано, обладают антиостеопорозной активностью с минимальными отрицательными реакциями, низкой стоимостью и широким механизмом действия, что делает их безопасными и идеальными естественными антиостеопорозами [5].Xan3. Тохумолявляется уникальным флавоноидомСоединение, обнаруженное в экстрактах хмела, демонстрирующее сильный антиоксидантный стресс, противовоспалительное, антираковые клеточные распространения, и может действовать на остеобласты (ос) и остеокласты (ос), нацеливая и стимулируя соответствующие цитокины для содействия распространению ос и ингибирования дифференциации ос [6]. В соответствующей литературе сообщается, что патенты на ксантохумол для профилактики и лечения оп уже утверждены за рубежом [7]. Таким образом, большой потенциал имеет активизация исследований по адресной терапии для оп с использованием xanthohumol и расширение ее клинического применения. В настоящем документе резюмируются механизмы xanthohumol в профилактике и лечении оп.

1.- ксантохумол' роль в предотвращении и лечении оп на клеточном уровне и соответствующих сигнальных путей

1.1 Xanthohumol' участие в дифференциации ос и соответствующих сигнальных путях

Бс играют решающую роль в развитии скелета. Аномальная дифференциация оби может привести к нарушению обмена веществ между костями, тем самым спровоцировав такие заболевания, как OP [8]. Исследования показали, что остеобласты и остеобластные прекурсоры демонстрируют конкурентную дифференциацию [9]. Когда дифференциация остеобластных прекурсоров усиливается, она сдерживает распространение ББС, тем самым влияя на их дифференциацию и созревание. XanthohumolМожет способствовать распространению и дифференциации ос, стимулируя использование 2 - го коэффициента транскрипции остеобласти (2 - й коэффициент транскрипции, Runx2), пероксисомного рецептора, активируемого пролифератором γ (PPARγ), для содействия распространению и дифференциации ос, препятствуя при этом образованию адипоцитов [6,10].

Кроме того, в условиях окислительного стресса в организме аккумулируются реактивные виды кислорода (рос), стимулирующие обу апоптоз [11]. Когда обу апоптоз является чрезмерным, это приводит к снижению образования костей и начало OP. исследования показали, чтоXanthohumol может стимулировать выражениеЯдерного фактора эритроида -2 фактор 2 (Nrf2), повышение кузова и#39. Антиоксидантная стрессовая способность s, очищение аккумулированных реактивных видов кислорода и ингибирование обу апоптоза [12].

1.1.1 коэффициент остеогенной транскрипции Runx2

Коэффициент остеогенной транскрипции Версия для androidспособствует дифференциации клеток по остеогенным и хондрогенным направлениям, играя особенно важную роль в преобразовании ос. Runx2 может способствовать распространению и делению незрелых бс, преобразуя незрелые костные клетки в зрелые костные клетки [13]. При специфических индуктивных условиях Runx2 может также способствовать транскрибированию конкретных остеогенных целевых генов развития, ведущих к посттранскрибирующему образованию белков, таких как остеокальцин и коллаген, которые играют решающую роль в формировании костной ткани [14]. Исследования показали, что уменьшение экспрессии Runx2 у мышей сдерживает дифференциацию остеообласти [15]. Короче говоря, это указывает на то, что Runx2 играет важную роль в содействии распространению и дифференциации ББС.

Чон и др. [16] провели расследованиеДействие ксантохумолаО дифференциации клеток мыши C2C12. Клетки C2C12 были культивированы в растворе xanthohumol, и обнаружение показало, что активность EPK и P38 значительно возросла в зависимости от концентрации, что позволяет предположить, что xanthohumol активизирует выражение Runx2 путем упредгуляции фосфоризации EPK и P38. Ксия тянь шуанг и др. [17] обрабатывали остеобласты мышей дексаметасоном (DEX) на предмет повреждений, за исключением пустой группы. Западный блот анализ показал, что xanthohumol значительно способствует выражению Runx2, а маркеры костного метаболизма, такие как щелочный фосфатаз, увеличились. Исходя из вышеприведенной литературы, предполагается, что xanthohumol может упрегулировать выражение Runx2 для содействия распространению и дифференциации ос, а путем увеличения выражения Runx2 повысить гены, связанные с остеогеном, тем самым оказывая определенное ингибиторное воздействие на развитие оп.

1.1.2 коэффициент транскрипции липидов PPARγ

Между остеобластами и адипоцитами существует конкурентная дифференциация. Дифференциация адипоцитов является строго регулируемым трансконгибиционным каскадным процессом, а PPARγ является ключевым регулирующим фактором в процессе адипогенеза. При адипогенной дифференциации ампулы ответной реакции связывающих элементов белков проходят белково-фосфорилирование, вызывая выражение цебп -β, что, в свою очередь, активизирует транскрипцию цебп -α и PPARγ, тем самым поддерживая завершение процесса адипогенеза [18]. Экспериментальные данные показывают, что при нокаутировании адипогенеза в эмбриональных стволовых клетках практически полностью подавляется [19].

Киёфудзи и др. [20] культурные клетки мышей 3T3-L1 вызывают их дифференциацию на адипоциты, а затем подвергают их различным воздействиямКонцентрации xanthohumol- да. Результаты показали, что экспрессия ксантохумола оказала зависимое от концентрации ингибиторное воздействие на ингибиторное выражение PPARγ. Янг и др. [21] дифференцировали клетки 3T3-L1 на адипоциты и вмешивались в разное время. Анализ электрофореза показал, что ксантохумол значительно уменьшил гравюру PPAR, причем наиболее выраженный эффект наблюдался в течение 24 часов. Вышеуказанные исследования показывают, что ксантохумол может ограничить дифференциацию адипоцитов путем ограничения адипоцитов. Учитывая конкурентную дифференциацию между остеобластами и адипоцитами, а также то, что xanthohumol может способствовать выражению Runx2 для upregulate OB дифференциации, поэтому исследование о Том, может ли xanthohumol способствовать OB дифференциации путем ингибирования PPARγ expression, имеет большое значение в перспективе.

1.1.3 коэффициент транскрипции антиоксидантного стресса Nrf2

Окислительный стресс означает дисбаланс между окислительной и антиокислительной способностью организма, ведущий к чрезмерному накоплению роз, вызывающий повреждения клеток и тканей, и препятствующий выражению остеогенных маркеров дифференциации, таких как щелочный фосфатаз,Тип I коллаген, и Runx2, что приводит к обу апоптозу и снижению образования костей, способствуя возникновению OP [22]. Nrf2 является важным фактором транскрипции антиоксидантного стресса в организме. При нормальных условиях Nrf2 связывается с кип1 в цитоплазме и является убикитинированным и деградированным; При стимуляции окислительного стресса комплекс Nrf2-Keap1 диссоцируется и переносится в клеточный нуклей, где он соединяется с антиоксидантными элементами реакции, способствуя выражению различных антиоксидантных ферментов, таких как глутатион-пероксидаза и глутатион-с-трансферазы [23].

Су и др. [24] вызывают накопление роз и митохондриальных супероксидов в остеобластиях MC3T3-E1 с использованием метилглеxal (мг), что приводит к клеточной апоптозе. Клетки предварительно обрабатываются xanthohumol, а затем подвергаются воздействию MG. Результаты показали, что накопление рос, вызываемое мг, значительно сократилось, а уровень Nrf2 увеличился в зависимости от концентрации при концентрации xanthohumol. Таким образом, xanthohumol может способствовать производству антиоксидантов или повысить антиоксидантную активность путем упрегуляции Nrf2 выражения, тем самым препятствуя накоплению роз и снижая вероятность окислительных стрессовых повреждений ББС. Учитывая это,xanthohumol' с мощным антиоксидантомСтрессовая способность открывает большие перспективы для профилактики и лечения остеопороза.

1.2 исследования по Xanthohumol' участие в дифференциации ос и соответствующих сигнальных каналах

Окс являются многонациональными клетками, получаемыми из гематопоэтических стволовых клеток. Под действием стимуляции ядерного фактора -Категория Bрецептор лиганд (NF-κB ligand, RANKL) и макрофагический стимулирующий фактор (M-CSF), моноциты могут различаться в зрелом OC. M-CSF способствует распространению и выживанию моноцитов, в то время как RANKL стимулирует дифференциацию и созревание ос. М -CSF. M-CSF способствует распространению и выживанию моноцитов, в то время как RANKL стимулирует дифференциацию и созревание ос [25]. Эти два сигнальных фактора способствуют дифференциации ос с помощью ряда сигнальных каналов.Ксантохумол может препятствовать передачеНекоторых сигнальных путей, таких как NF-κB, путь Иона кальция/фосфолипазы, зависящей от кальция /NFAT (Ca2+/NFATc1), митоген-активированный белковый киназ (MAPK) и т.д., препятствуя тем самым дифференциации и созреванию ос и препятствуя дифференциации и созреванию ос [6].

1.2.1 путь NF-κB

NF-κB является важным транскрипционным фактором, способствующим дифференциации ос. Перед активацией он соединяется с подблоком IkB в цитоплазме. После стимуляции соответствующими факторами, IkB деградирует, поощряя NF-κB для входа в клеточной ядре, инициируя транскрипцию и экспрессию генов, способствуя дифференциации и созреванию оу. RANKL связывается с ранклом, активируя комплекс NF-κB/IκB, что приводит к деградации и высвобождению IκB, а NF-κB переходит в клетное ядро для содействия дифференциации и созреванию оу [26]. Li et - эл. - привет.[27] предварительно обработанная экспериментальная группа RAW264.7 клеток с Xanthohumol, затем RANKL, чтобы вызвать дифференциацию ос. Контрольная группа лечилась только с помощью RANKL. Обнаружение показало, что IκB деградация белка была значительно снижена в экспериментальной группе по сравнению с контрольной группой.

Се хуан [28] культивировал RAW264.7 клетки в растворе, содержащем маркировку NF-κB, с последующим воздействием различных концентрацийРешения xanthohumol и RANKL- да. Клетки были лизефицированы и провели генный анализ люсиферазы. Результаты показали, что RANKL активирует NF-κ tional activity, в то время как xanthohumol демонстрирует зависящее от концентрации ингибирование NF-κB transcription. Учитывая важную роль NF-κB в дифференциации ок, изучение ингибирования NF-κB дифференциации имеет важное значение. Исходя из вышеприведенных исследований, xanthohumol действительно препятствует NF-κB транскрипции и может сделать это, препятствуя деградации IκB. Однако оптимальная ингибиторная доза xanthohumol для NF-κB еще четко не определена, поэтому необходимы дальнейшие исследования для определения надлежащей дозы xanthohumol для ингибирования NF-κB транскрипции.

1.2.2 путь Ca2+/NFATc1

Ядерный фактор активированных т-клеток 1 (NFAT1) в цитоплазме т-клеток является ключевым фактором транскрипции для дифференциации остеокласта, в первую очередь вызывая дифференциацию и созревание остеокласта на поздней стадии. Семья NFAT в основном регулируется Ca²⁺ calcineurin. После стимуляции и активации RANKL крепельные узлы NFAT дефосфорилируются, что способствует переносу NFATc1 с помощью ядерного оружия, завершению транскрипции генов и облегчает дифференциацию и созревание остеокласта. Когда ген NFAT был выбит у мышей, остеобласты не могли завершить связанную с ос дифференциацию при стимуляции RANKL [29]. Suh et - эл. - привет.[30] культурные RAW264.7 клетки в RANKL, а затем в различных концентрациях xanthohumol. Результаты показали, что в4 μg/ml xanthohumol, NFAT1 значительно снизился, что указывает на то, что xanthohumol может подавить дифференциацию ос путем подавления NFAT1 дифференциации.

Другие исследования показали, что ключевым фактором в сохранении транскрипции NFAT являются неполадочные колебания Ca. Когда блокируются околовательные колебания Ca, NFAT не может завершить транскрипцию, а также блокируется дифференциация OC [31]. Li et - эл. - привет.[27] поместили элементы BMM3. КальцийПоток посуда, добавил xanthohumol и RANKL в экспериментальную группу, чтобы вызвать Ca²⁺ osations, и только добавил RANKL в контрольной группе. Результаты показали, что датчики CA/данные отсутствуют.в экспериментальной группе были значительно ниже, чем в контрольной группе. Роль NFAT в дифференциации ок имеет большое значение, и роль Ca²⁺ osations в содействии транскрипции NFAT была подтверждена. Эти выводы свидетельствуют о Том, что ксантохумол может препятствовать дифференциации ок путем подавления неодорационов Ca, что указывает на его огромный потенциал для профилактики и лечения остеопороза (OP).

1.2.3 путь мапк

Путь MAPK является важнейшим путем для сохранения дифференциации ос, включая экстраклекулярные сигнальные кинасы (EPK), P38 и JNK. RANKL может активировать путь MAPK, побуждая EPK, NFAT1 и c-fos стимулировать дифференциацию ос, среди которых EPK1/2 играет особенно важную роль в дифференциации, созревании и апоптозе остеокластов [32]. M-CSF связывает с c-Fms, что приводит к фосфоризации тирозиновых остатков на c- терминале c-Fms, который затем связывает с MEK2 для активации транскрипции EPK1, способствуя транскрипции EPK1 из цитоплазмы в нуклеус, инициируя фосфорилирование связанных с нисходящим потоком факторов для завершения транскрипции OC.

При нокаутировании гена EPK у мышей существенно ограничены дифференциация ос, созревание и перенос [33]. Suh et - эл. - привет.[30] культурированные клетки RAW264.7 в ранкле, за которыми следует воздействие различных концентраций xanthohumol, а затем производится обнаружение ПЦР. Результаты показали, что уровни EPK1 и c-fos существенно ограничены. На основе вышеупомянутых исследований предполагается, что ксантохумол препятствует действию RANKL на пути MAPK, тем самым снижая активацию сигналов, связанных с понижением, и ограничивая дифференциацию и зревание ос. Однако ввиду ограниченных масштабов и глубины нынешних исследований необходимы дальнейшие исследования для повышения точности этих выводов.

2 перспективы на будущее

С ускорением старения China's население, предупреждение иЛечение остеопороза (оп)Стали серьезной социальной проблемой. Хотя традиционные фармацевтические препараты обеспечивают быструю эффективность, они связаны с многочисленными отрицательными последствиями и высокой стоимостью, что вызывает растущий интерес к природным растительным компонентам, которые делают упор на целостную профилактику и оказывают минимальное неблагоприятное воздействие. Клеточные эксперименты на кзантохумоле продемонстрировали его значительную потенциальную ценность в профилактике и лечении оп. как флавоноидного компонента растений, кзантохумол обладает мощными противовоспалительными и антиоксидантными свойствами и может регулировать нарушения обмена костного обмена через несколько путей, таких как RUNX2, MAPK и NF-κB, тем самым уменьшая дефекты трабекулярной кости и потери минерального сырья.

Кроме того, он может напрямую действовать на остеобласты (ос) и остеокласты (ос), чтобы влиять на резорбцию и формирование костной матрицы, тем самым комплексно достигаяЗащита костей- эффект. Изучая и размышляя о наших достижениях, мы должны также объективно признать, что все еще существуют проблемы в разработке препарата xanthohumol для профилактики и лечения оп, такие как недостаточно четкие конкретные цели xanthohumol'. Антиостеопорозная активность и неполные исследования ее специфических молекулярных механизмов. Необходимы дальнейшие углубленные исследования. Мы с нетерпением ожидаем расширения исследований по ксантохумолу для профилактики и лечения оп в будущем, ускорения его перевода в клиническую терапию и разработки клинически эффективных стратегий профилактики и лечения, основанных на глубоком понимании фундаментальных патофизиологических механизмов оп.

Ссылки на статьи

[1] Сюй лицзин, чэнь миншэн, СИ лей. Текущее состояние, проблемы и рекомендации по экономической оценке остеопороза с точки зрения здравоохранения [J].Китайский журнал эндокринологии и метаболизма, 2021,

[2] Ван вэньхуэй. Последствия и достижения антиостеопороза [J].Китайский медицинский журнал, 2021, 56(11): 1189-1192.

[3] Лин кэнбин. Клиническая эффективность различных видов бисфосфонатных препаратов при лечении остеопороза [J].Журнал рационального потребления наркотиков, 2021, 14(32): 109-111.

[4] Юань чуньян, рен мулиан. Сексогормональная терапия при постменопаузном остеопорозе [J].Практический журнал акушерства и гинекологии, 2020, 36(7): 494-497.

[5] Ку ханшуай, чжэн цзинмин. Прогресс в исследованиях по антиостеопорозу флавоноидов растений [J].Китайский журнал остеопороза, 2021, 27(10): 1529-1533.

[6] Лю сяоянь, ся тянь шуанг, дун чжимин и др. Применение и перспективы хмеля при лечении остеопороза [J]. Журнал фармацевтической практики, 2020, 38(6): 492-495.

[7] аггарвал - ди, упадьяй Ск, сингх R,et - эл. - привет.Недавние патенты  В терапевтических целях  Мероприятия в области развития   Соединенные Штаты америки  Xanthohumol :a  Пренлилированный халконоид из хмеля (Humulus lupulus L.) [J].  Фарм пат анал,2021,10(1):37 — 49.

[8] окамото к, накашима т, шинохара м и др Ogy: концептуальные рамки, объединяющие иммунную и костную системы [J]. Physiol Rev,2017,97(4):1295-1349.

[9] муругандан с, ионеску ам, синал СИ джей. На перепутье дорог Из программ дифференциации адипоцитов и остеокластов: Будущие терапевтические перспективы  [J]. Int J Mol Sci,2020, 21(7):2277.

[10] чжан - привет, Бобби. G, Миранда, Швеция CL,et и al.  Тетрагидроксанто-хумол, ксантохумол Производное, ослабленное С высоким содержанием жира Ди-этно-индуцированный стеатоз печени путем антагонирования PPARγ [J]. Элайф,2021,10: е66398.

[11] клык У, чу, L,Li L,et al. Тетраметилпиразин защищает кости Костный мозг-производный - мезенхимал - стебель; 2. Камеры Против вызываемого пероксидом водорода апоптоза через пи3к/акт и ERK1/2-1/2 Iii. Пути развития    [J].  1. Биол - "фарм" Бык,2017,40 (12): 2166 -2152.

[12] Сунь сяолей. Сунь сяолей. Исследование влияния хмеля и кемпферола на обучение и ухудшение памяти, а также потери костей, вызванные перегрузкой железа [D]. Цзинань: шаньдунский университет традиционной китайской медицины, 2021 год.

[13] комори т. рунх2, индуктор остейской области и чондро-киты Дифференциация по признаку Пола   [J].  - "хисточем" 1. Ячейка Биол,2018,149 (4):313 — 323.

[14] вей - джей, шимазу - джей, макинистоглу MP, и др. глюкоза вверх - Возьмите и Runx2 синергии для управления остеобластного Dif- Ференция и образование костей [J]. Мобильный,2015,161(7): 576-1591 годы.

[15] шильц C, пруйе C, марти, C C,et и al.  - кости В. потери По желанию пользователя По запросу: Runx2  - выражение свыше В случае необходимости Мыши и мыши В настоящее время С пятнами на плече По запросу: Ос - 0 Теобластическое избыточное выражение TIMP-1 [J]. - J.телосложение клеток, 2010,222(1):219 — 229.

[16]  Jeong HM,Han EH,JВ случае необходимостиYH, и др. Biochem Biophys Res Commun,2011,409 (1):82-89.

[17] Ся тянь, дин люинг, чжан цзябао и др. Исследование воздействия хмеля и его активного компонента гумулона на остеопороз, вызываемый глюкокортикоидом [J]. Журнал фармацевтической практики, 2021, 39(3): 221-225.

[18] Юлия Дж., ли - да, ван. Y,et al.  Меры по предупреждению Последствия стихийных бедствий Сирна нацелилась на ппар параджин Под действием стероидов Остеонекроз у кроликов [J].  Соединительная ткань Res,2014,55(5/6):322-330.

[19] гамма-рецептор Imai T,Takakuwa R,MarchиS,et al и - коричневый цвет 1. Адипоциты для С их стороны В целях выживания В случае необходимости Мышь [J]. Proc Natl Acad Sci U S A,2004,101(13):4543 — 4547.

[20]Kiyofuji A,Yui K,Takahashi K, и др   Прыжки в воду   1. Выписка  По состоянию на  В настоящее время    Дифференциация по признаку Пола   Из праадипоцитов [J]. J Oleo Sci,2014,63(6):593-597.

[21] ян джи, делла-фера ма, райалам с и др и - изоксантохумол На 3T3 -L1 клеточный апоптоз и адипогенез [J]. Апоптоз,2007,12(11):1953 — 1963.

[22] чжан Q,Cheng X,Zhang H,et al. Разъединение молекулярных механизмов, лежащих в основе индуцированного h2o2 апоптоза мезенхимальных стволовых клеток костного мозга мышей: роль ингибирования Mst1 [J]. Стволовые клетки Res Ther,2020,11(1):526.

[23] полупальто C, ли (ли) О, хан, хан MH,et al.  Цитозащитные средства для защиты Воздействие ферментации на здоровье 3. "устрица" Выдержки из статьи Против: против Окислительное средство Стресс в - - утенок, утенок. - ДНК Ущерб, причиненный окружающей среде и - апоптоз. До конца года 3. Активация Постоянный представитель российской федерации Nrf2/HO -1 3. Сигнализация Путь к успеху В случае необходимости MC3T3 -E1 Os-теобласты [J]. Excli J,2020,19:1102-1119.

[24] су Кс, чон, С, чхве, - Эм. - привет. Цитозащитное действие сана - thohumol  Против: против Метилглеxal-индуцирован 1. Цитотоксичность in  Остеобластические клетки MC3T3-E1  [J]. J  Appl Toxicol,2018, 38(2):180-192.

[25] кан Джей и, кан Н, н, н М, и Al. Роль сигнализации Ca2 +- NFATc1 и ее модуляции на остеокластогене-esis [J]. Int J Mol Sci,2020,21(10):3646.

[26] юань FL,Xu Рс, цзян DL,et Эл. Леонурин гидрохло - Ездовый ингибирует остеокластогенез и предотвращает остеопороз Связано с дефицитом эстрогена, препятствуя NF- κB  и PI3K/Akt 3. Сигнализация Iii. Пути развития   [J]. Боун,2015, 75:128-137.

[27]Li J,Zeng L,Xie J,et al. Ингибирование остеокластогенеза и - кости На отдых в отеле В пробирке и В прямом эфире По запросу: a  - пренэл... Флавоноид ксантохумол из хмеля   [J]. Sci Rep,2015,5: 17605.

[28] Се хуан. СИ хуан. Механическое исследование по ингибированию дифференциации и функции остеокласта растительным соединением гумической кислоты [D]. Чанша: обычный университет хунань, 2012.

[29]  Пак чже, ли нк, ли СИ. Современное понимание знаков ранга в дифференциации и созревании остеокласта [J]. Mol ячейки,2017,40(10):706-713.

[30] су кс, ри СИ, ким и др. Food Chem Toxicol,2013,62:99-106.

[31] Zou B,Zheng J,Deng W, и др Подавление Ca2 +-NFATc1and Цав -1 3. Сигнализация Iii. Пути развития [J].  Фитомедицин,2021,80:153377.

[32] лю W,Xie G, юань, Япония G,et и al.  6& 6#39;-O -Galloylpaeoniflorin Attenuates Остеокласто-генезис and  В чем дело? Остеопороз, вызванный остеопорозом ми, путем ингибирования химически активных видов кислорода и сигналов MAPKs/c-Fos/NFATc1 [J]. Передний фармакол,2021,12:641277.

[33] он - Y, стазер K, род. Привет. Ур, и Al. Erk1 положительно регу-lates osteoclast дифференциация и костно-курортная activi- ty [J]. График 1, 2011,6(9):e24780.