Исследование биосинтеза Mogroside V

Sweeteners are A/данные отсутствуют.type Соединенные Штаты америкиfood additive. They cА вот и нет.бытьdivided inПо адресу:Синтетические продукты (синтетические продукты)Подсластители для подсластителейиПо окружающей средеsweeteners according По адресу:their source. Natural sweeteners can be further divided inПо адресу:saccharides иnon-saccharides according По адресу:their chemical structure иproperties. Recent studies have pointed out that Синтетические продукты (синтетические продукты)sweeteners can lead to intestinal florA/данные отсутствуют.imbalance иГлюкоза (глюкоза)intolerance, causing metabolic disorders[1], иhave become A/данные отсутствуют.new type Соединенные Штаты америкиpollutant causing environmental pollution[2]; while В настоящее времяhigh intake Соединенные Штаты америкиСахар с сахаромcontributes to В настоящее времяoccurrence Соединенные Штаты америкиСтоматология и стоматологияcaries, obesity, diabetes, metabolic syndrome иcardiovascular disease[3-5]. Natural non-Сахар с сахаромsubstances Соединенные Штаты америкиplant origВ случае необходимостиhave attracted increasing attentiПо состоянию наПо состоянию на 31декабряa new generatiПо состоянию наСоединенные Штаты америкиsweeteners that can satisfy sweВ то же времяcravings due to their high sweetness [6], low calories [7], Безопасность на рабочем месте[8], иlack Соединенные Штаты америкиcariogenicity [9].

В настоящее время основнойПо окружающей средеnon-sugar sweeteners that have been developed иutilized at home иabroad are: Thaumatin, steviol glycosides, Могросайд (Mogroside) (Mogrosides) и- глицирризикacid[6](Table 1), among which В настоящее времяsweetest В настоящее времяThaumatin, but it exhibits a bitter taste иВ настоящее время“off-flavor” Соединенные Штаты америкиliquorice, иВ настоящее времяВ настоящее времяdisadvantages Соединенные Штаты америкиdelayed sweetness иan excessively long duratiПо состоянию на[17]; the second В настоящее времяmonk fruit sweetener, which has no unpleasant aftertaste иis the only all-По окружающей среде- подсластитель.that can reduce fat [14]. MogrosiД/дV. Категория V(M5) is the maВ случае необходимостиИсточник:Постоянный представитель российской федерацииsweetness Соединенные Штаты америкиMogroside [18]. At a concentration Соединенные Штаты америки1/10,000, its sweetness value is 425 times that Соединенные Штаты америки5% sucrose [19]. It also has many Лекарственные препараты и лекарственные препаратыactivities, such as relieving coughs иphlegm [20], anti-- Рак;[21-22], anti-oxidation [23], иmany other pharmacological activities, making it a new generation Соединенные Штаты америкиfunctional sweeteners that are being developed around the world. Due to the many difficulties Участие в проектеВ случае необходимостиcultivating Luo В чем дело?Го (фр.)[25], иthe fact that the content Соединенные Штаты америкиM5 В случае необходимостиthe whole fruit is only 0.8%–1.3% (W/W) [26], it is difficult to purify the complex Товар (по запросу)Соединенные Штаты америкиits analogues, and it is impossible to achieve large-scale Производство и продажаПо запросу:relying on extraction Из российской федерацииLuo В чем дело?Guo.

Развитие культуры растительных клеток [27], метаболической инженерии [28]и синтетической биологии [29]дало идеи устойчивого производства для приобретения натуральных растительных продуктов. Культура растительных клеток трудно использовать для производства специализированных натуральных продуктов из-за ее высокой стоимости, длительных сроков и низкой урожайности. Кроме того, сложность растительных клеток и отсутствие генетических инструментов и надлежащих методов осложняют метаболическую инженеру растительных клеток для производства сложных натуральных продуктов м5, что требует многоступенчатых биосинтезных путей [30]. Поэтому культура растительных клеток и метаболическая инженерия могут не быть жизнеспособным методом для крупномасштабного производства м5. Синтетическая биология — это наука, возникшая в последние годы для перепроектирования, инженерии, построения и применения жизненных систем и процессов [31].

По сравнению с традиционными методами она обладает такими преимуществами, как короткий цикл, высокая урожайность, безопасность и отсутствие загрязнения, а также простой процесс добычи. Это новая экологически чистая и эффективная модель производства. Благодаря непрерывному развитию синтетических биологических исследований и углубленному пониманию молекулярного биосинтезионного механизма могросидов в Лу хан го [32]использование микроорганизмов для синтеза м5 стало новым способом крупномасштабного производства, что имеет большое значение и широкие перспективы для удовлетворения потребительского спроса на натуральные подсластители. В настоящем документе основное внимание уделяется обзору биосинтезионного механизма и прогресса в области синтетических биологических исследований м5, а также обсуждаются проблемы, возникающие при синтезе микробов, с тем чтобы обеспечить основу для биосинтезионных исследований м5.

1 структура и фармакологическая активность Mogroside V

13. Сирайтияgrosvenorii is the ripe fruit Соединенные Штаты америкиthe 13. Сирайтия- гросвенориplant В случае необходимостиthe Cucurbitaceae family. It is used as a common traditional Китайская медицинаВ случае необходимостиChina [33]дляits effects Соединенные Штаты америкиmoistening the lungs to relieve coughs, cooling the blood, and moistening the bowels to promote bowel movements. Its maВ случае необходимостиactive ingredient is the sweВ то же времяglycoside [34]. Researchers [19,35–36] have isolated and identified a variety Соединенные Штаты америкиsweВ то же время- гликозиды.В городе сирайтияgrosvenorii, the basic structure Соединенные Штаты америкиwhich is shown В случае необходимостиFigure 1. В настоящее времяnumber Соединенные Штаты америкиglucose units and the way they are connected produce - подсластитель.molecules сsignificantly different tastes: the disaccharide sweetener IIE tastes extremely bitter, while the pentasaccharide M5 tastes extremely sweВ то же время[37].

M5 является компонентом подсластителя Luo В чем дело?Го (фр.)с высочайшей сладостью и содержанием [38]. Впервые он был изолирован японскими учеными, такими как Takemoto цунематсу [39-41], и структура агликоне была определена как тетрациклический тритерпене момондол спектроскопическими методами, тем самым создавая полную структуру M5. Молекулярная формула M5 - C60H102O29, которая формируется путем добавления глюкозы в моординол на позициях C3 и C24. R2 - это две пирамидальные единицы, связанные между собой градом -1,6- гликосидическими облигациями, R1 - разрывная 3- глюкопираниловой группой, связанная между собой градом -1,6- гликосидическими облигациями и градом -1,2- гликосидическими облигациями.

Натуральные несахарные подсластители растительного происхождения часто проявляют множественную фармакологическую активность (таблица 1). M5 выполняет множество функций, включая снятие кашля и мокроты, противораковые средства, окисление и регулирование содержания сахара в крови. Исследования показали, что активный ингредиент в луоханго, который освобождает от кашля, составляет 50% спиртного экстракта по объему, а изолированный M5 может значительно сократить количество кашлей у мышей, продлить период задержки кашля и значительно увеличить экскрецию фенола красного в трахеи, что указывает на определенный эффект ожидаемого [20]. М5 может препятствовать распространению и выживанию клеток рака поджелудочной железы, нацеливая их на несколько биологических целей [21], что было подтверждено мышкой моделью ксенотрансплантатов рака поджелудочной железы. 7,12- диметилбенз [а] антрацен (DMBA), 12- о-тетрадеканойлфорол -13- ацетат (TPA) и пероксиазотная кислота (ONOO -) являются канцерогенами, которые вызывают преобразование нормальных клеток в раковые клетки. Было установлено, что м5 замедляет преобразование обычных клеток в раковые клетки кожи, противодействуя канцерогенам в ходе теста на канцерогенез кожи мышей [22], что указывает на то, что м5 оказывает воздействие на предотвращение рака кожи, вызываемого химическими канцерогенами. M5 и 11-O-Могросайд (mogroside)V могут значительно испачкать химически активные виды кислорода (O2 - ·, H2O2 и ·OH) и ингибировать окислительные повреждения ДНК. В то время как 11-O- Mogroside V обладает более высоким эффектом улавливания O2 - · и H2O2, чем M5, но M5 обладает более высоким эффектом улавливания на ·OH [23]. Было установлено, что м5 может вызывать выделение инсулина в инсулиномном элементе рин - 5f, тем самым раскрывая эффект регулирования глюкозы крови м5 на клеточном уровне для диабетических пациентов. Это исследование показывает, что экстракт Лу хан го, особенно м5, имеет потенциал для профилактики и лечения диабета 2 типа [24].

2. Исследование механизма биосинтеза Mogroside V

Синтетическая биология — это реконструкция существующих биосинтезных путей в микробных клетках [29] для получения микробных сотовых заводов, которые производят желаемую продукцию, тем самым обеспечивая масштабное производство целевых соединений. Поэтому уточнение молекулярного механизма синтеза м5 в ло хан го заложит основу для использования синтетической биологии для строительства клеточных заводов и достижения синтеза В случае необходимостиvitro.

2.1 модель накопления могросайда

Понимание схемы накопленияMogroside is conducive to a better 3. АнализСоединенные Штаты америкиthe molecular mechanism Соединенные Штаты америкиM5 synthesis. Research on the accumulation pattern Соединенные Штаты америкиMogroside during the development Соединенные Штаты америкиLuohanguo has shown that the nВ то же времяcontent Соединенные Штаты америкиMogroside is conserved, that is, the total content Соединенные Штаты америкиMogroside remains unchanged throughout the growth process [42]. During the В первой половине дняНа всех этапахСоединенные Штаты америкиfruit development, the glycosides are mainly В случае необходимостиthe form of Mogroside IIE, with R1 and R2 both being monosaccharide groups. This indicates that the В первой половине дняstep В случае необходимостиthe glycosylation of the glycosides is two primary glycosylations, after which the second glycosyl group is linked to R1 По запросу:a β-1,6-glycosidic bond, resulting В случае необходимостиthe accumulation of Могросайд (mogroside)IIIX. At a later stage (77 d after flowering), a large number of tetrasaccharide products appeared, mainly sialenoside (Siamenoside), whose R1 contains a branch formed По запросу:a β-1,6-glycosidic bond and a β-1,2-glycosidic bond. В настоящее время1. Потреблениеof tetrasaccharide products began 77 days after flowering, and accumulation of R2 M5, which contains two sugar moieties, increased sharply during the final stage of maturation. В настоящее времяmaВ случае необходимостиcomponent of the sweВ то же времяglycoside В случае необходимостиmature Фрукты и фрукты103 d after flowering is M5. The accumulation pattern of mogroside suggests that the biosynthetic pathway of M5 is that mogroside first undergoes primary glycosylation at the C3 and C24 positions, and then branched glycosylation is carried out on this basis [32].

2.2 анализ биосинтеза Mogroside V

Транскриптомический анализ и анализ метаболизма являются эффективной стратегией для прояснения биосинтетических путей растительных природных продуктов [43]. В 2016 году израильские исследователи Itkin В то же время- эл. - привет.[32] провели полный анализ биосинтеза M5 на основе транскриптомных данных и данных генома Лу хан го (рис. 2). Биосинтез M5 может быть примерно разделен на три этапа: этап синтеза прекурсоров, этап формирования скелета среднего потока и этап производства и модификации исходного ядра.

2.2.1 синтез прекурсоров IPP и DMAPP

Первичные прекурсоры синтеза терпеня включают изопентилпирофосфат (ипп) и диметилаллилпирофосфат (дмапп). Существуют два различных способа биосинтеза IPP и DMAPP на растениях: мевалонический кислотный путь (MVA/данные отсутствуют.путь) и мегил-эритритолофосфатный путь (MEP путь). Выбор различных путей зависит от типа синтетического продукта и подклеточного пространственного расположения [45]. Путь MEP в основном используется для синтеза монотерпенов, дитерпенов и тетратерпенов в плазме [46], в то время как путь MVA/данные отсутствуют.в основном используется для синтеза сескитерпенов, тритерпенов и политерпенов в цитоплазме [47]. Однако они не являются полностью независимыми, и общий промежуточный IPP может использоваться друг другом через пластическую мембрану [48].

M5 представляет собой тритерпеновый сапонин, содержащийся в цитоплазме, а его прекурсоры IPP и DMAPP образуются из ацетилового коэнзима а по методу MV- A.Во-первых, две молекулы ацетилкоэнзима а формируются из ацетилкоэнзима а тиостеразы (атот) и 3- гидрокси3 - метилглутарилкоэнзима а синтазы (ХМГЦ) в форме 3- гидроксил3 - метилглутарилкоэнзима а (ХМГК-коа). Затем под катализатором 3- гидрокси3 - метилглутарилкоэнзима формируется редуктаза (ГГР), 3- гидрокси3 - метилглутарилкоа (мва), которая затем преобразуется в ипп ферментами метил-д-эритритол -4- фосфат-киназа (мк), метил-д-эритритол -3- фосфат-киназа (ПМК) и метил-д-эритритол -3- фосфат декарбоксилаза (МВД). IPP преобразовывается в свой двойной изомер диметилаллилпирофосфат (DMAPP) ферментом isopentenyl пирофосфат изомер (IPI).

2.2.2 формирование скелетов 24,25- эпоксигульдиенола

Гиранилпирофосфатный синтаз (пс) катализирует образование гиранилпирофосфата (ГПС) из IPP и DMAPP. Затем фарнезилпирофосфатный синтез (FPPS) катализирует синтез фарнезилпирофосфата (FPP) из одной молекулы IPP. FPP преобразуется в скволен (кв) путем синтазы скволен (кв). SQS-это бифункциональный фермент, который сначала ускоряет конденсацию двух молекул FPP для формирования прескваленового дифосфата (PSPP), а затем преобразует PSPP в пл в присутствии надф и Mg2+[44].

Долгое время учёные считали, что скволеновая эпоксидаза (SQE) катализировала одноэтапную реакцию кв на формирование линейной 2,3эпоксискволена, который затем циклизировался циклоназой на формирование скелета, ulipristal[49]. Тем не менее, недавние исследования показали, что прекурсор агликоне составляет 24,25- эпоксилуп -20(29)-en-3- ол, а не cucurbitadienol, и что прекурсор 2,3;22,23- диэпоксисквален, а не 2,3- эпоксисквален. Кв проходит две последовательные реакции эпоксиокисления, катализируемые SQE, в порядке, производя 2,3- эпоксисквален 2,3;22,23- диоксосквален, а последний циклизируется до 24,25- эпоксигулустринола под катализатором синтазы cucurbitadienol(cd) [32].

2.2.3 производство и модификация базового ядра mogroside

Уникальной особенностью тетрациклического могросида cucurbitane является характерная для данного региона оксигенация в позициях C3, C11, C24 и C25 (рис. 2), образующая базовое ядро могросида [32]. Таким образом, главной задачей при определении ступени синтеза материнского нуклея является его уникальная гидроксиляция, особенно трансгидроксиляция позиций C24 и C25. Itkin В то же время- эл. - привет.[32] пришли к выводу, что эпоксид гидролаза (эф) отвечает за катализацию гидроксиляции позиций C24 и C25 в 24,25- эпоксилуп -20(29)-en-3-one для генерации транс -24,25- дигидроксилуп -20(29)-en-3-one, которая затем гидроксилируется на позиции C11 членом семейства CYP87, CYP87D18(CYP102801),[50]в системе фермента цитохром P450 (CYP450) для генерации lupeol. Предложен также порядок гидроксилионных реакций: эф белк, как правило, привязан к эпоксилуп -20(29)-en-1-ol, а не к линейной 2,3;22,23- диэпоксисквален, поэтому эф реакция следует реакции циклизации cd; Дополнительная гидрофилическая гидроксиловая группа на C11 предотвратила бы стыкование в гидрофобном кармане эф, поэтому гидроксиловая реакция C11 происходит после эф реакции.

Последним этапом синтеза м5 является гликозиловая модификация позиций с3 и C24 могросайда. Было установлено, что гликозилация в положении C24 повышает степень родства гликозилации в положении C3 путем стыковки субстрата с гликозилтрансферазом. Порядок гликозилации был определен на основе модели аккумуляции могросайдов: могросайд сначала проходит первичную гликозилацию на позиции C24 глюкозилтрансферазе ugt2022 -269-1 для получения Mogroside Ⅰ-A1; Затем угт720 -269-1 производит гликозилирование на позиции с3 для получения mogroside ⅡE; Затем UGT94-289-3 отвечает за разветвленную глюкозу цепи глюкозы на позициях C3 и C- 24,а промежуточное звено тетрасаксарида синтезируется в форму M5[32].

3 Mogroside V синтетические биологические предварительные исследования

As a natural non-sugar sweetener, the microbial Производство и продажаof the Содержание белка в кровиsweetener taro sweetener has a long history of research, and has been achieved in a variety of microorganisms [51-53], but the yield is low. The biosynthetic pathway of stevioside was completely elucidated in 2013 [54]. At present, the fermentation and Ii. Обобщениеof stevioside products have been reported, mainly including Rebaudioside A, rebaudioside D and rebaudioside M [55-56], but the yield is low, because the constructed synthetic pathway is relatively long.

В 2016 году Сюй (Xu)В то же время- эл. - привет.[57]сообщили о переносе глюкуроновой кислоты UDP-glucuronic GuUGAT (принадлежащей к семейству UGT73) из лакрицы, которая катализирует двухступенчатую глюкуроновую кислоту гликозилацией гликироновой кислоты в гликироновую кислоту, тем самым раскрывая полный путь биосинтеза гликироновой кислоты. Профессор ли чунь' исследовательская группа s [58]использовала в качестве основы модифицированную бактерию, производящую глицирризовую кислоту, и ввела ген глицезилтрансферазы UGT1A3 человека, ген удг-глюкозы UGDH (Hs) человека и ген UGDH (Ec) эшеричии коли для получения рекомбинатной бактерии, производящей глицирризовую кислоту. Из-за позднего прояснения биосинтетического пути Mogroside и длинного пути, исследования синтетической биологии M5 ограничены.

3.1 отбор и оптимизация элементов шасси

Шасси клетки являются фабриками для синтеза натуральных продуктов. Выбор шасси-клеток со зрелыми операционными системами и генетической стабильностью является основой для эффективного производства натуральных продуктов. Модельные микроорганизмы Организация < < эшерихия > >coli и - сачаромицисОбщее состояние здоровьячасто используются в качестве шасси. - сачаромицисcerevisiae обладает уникальными преимуществами в исследовании гетерологического синтеза сложных натуральных продуктов, таких как м5: эндогенный путь мва и путь эргостерола синтеза может устойчиво обеспечивать прекурсоры IPP, DMAPP и 2,2 - эпоксический сквалин [59-60], а полная мембранная система и постконвертационная модификация способствуют активному выражению циклозы и CYP450. 2,3- эпоксисквален является общим прекурсором синтеза тритерпеноидов и стерольных скелетов в растениях [61]. Однако в биосинтезе подсластителей предшественником для синтеза скелета является 2,3;22,23- диэпоксисквален. Эндогенная эпоксидаза сквалена (ERG1) в - сачаромицисcerevisiae может окислять 2,3- эпоксисквалена до 2,3;22,23- бисэпоксисквалена [32,62], что означает, что Saccharomyces cerevisiae ERG1 может заменить SgSQE.

Большая часть 2,3- эпоксисквалена в клетках Saccharomyces cerevisiae поступает в путь синтеза эргостерола через ланостерол синтазу (ERG7) [63], конкурируя за метаболический поток в могросиде преобразования. Штамм Saccharomyces cerevisiae GIL77 аккумулирует высокие концентрации 2,3- эпоксисквалена из-за отсутствия ERG7 [64]и часто используется в качестве шасси-клетки для проверки функции ферментов, связанных с могрозидным синтезом. С постоянным развитием биологических исследований по синтезу тритерпене сапонина постепенно совершенствуются стратегии оптимизации Saccharomyces cerevisiae для накопления больших количеств 2,3- эпоксисквалена. В основном следующие: 1. Чрезмерная сжатие генов, связанных с синтезом терпеня в пути движения мва [65 — 66]; 2. Ингибирование синтазы эргостерола с использованием ингибитора R0 48-8072 или системы CRISPR/dCas9 для ингибирования экспрессии ERG7 [32,63], понижения регуляции ветви синтеза эргостерола; 3. Использование гена мутанта UPC2 -1 глобального коэффициента транскрипции UPC2 для прямого или косвенного повышения эффективности транскрипции генов, связанных с два [67].

3.2 клонирование и выражение ключевых ферментов

Для достижения синтеза de - Новый годM5 в микробных клетках ключевые гены фермента должны быть гетерологически собраны. Таким образом, клонирование генов фермента обеспечит части для гетерологической сборки, а гетерологическое выражение ферментов заложит основу для функциональных исследований. Ключевые ферменты, которые были клонированы и выражены до сих пор являются SQE, cd, эф, CYP450 и гликозилтрансферазы.

3.2.1 эпоксидаза сквалена

Эпоксидаза сквалена выполняет двойную эпоксидацию сквалена, о которой сообщалось во многих системах синтазы тритерпеноидов [68-70], и функционально выраженная эпоксидаза сквалена растений может одновременно производить моноокисляемый сквален и диокисляемый сквален [62,71]. В 2018 году чжао хуан и др. Поскольку N-termini белковых последовательностей, закодированных SgSQEs, имеют трансмембранные домены, они существуют как неактивные включи, выраженные в прокариотах, и фермент активности не может быть проверена. Молекулярное стыкование протеинового субстрата указывает на то, что SgSQEs могут взаимодействовать с лиганом 2,3- эпоксисквален для формирования водородных связей, и предполагается, что они могут выполнять функцию генерации бисэпоксисквалена. Позднее Itkin В то же время- эл. - привет.[32] смоделировали белок SgSQE и показали, что наличие первого эпоксида не препятствует стыковыванию второй эпохи, что указывает на то, что SgSQE может подвергаться двойной эпоксидной реакции.

3.2.2 синтаза Cucurbitadienol

2,3- эпоксисквален образуется путем протонирования, циклизации, перегруппировки и депротонирования под катализатором различных типов оксидоскваленовой циклоразы (оск), образующей скелет фитостеролов и тритерпенов [73]. Поэтому существует конкуренция между различными видами псок. Как член семейства OSC, C,C,C,cd является ключевым циклоназом в синтезе могрозидов. Его выражение и активность влияют на метаболический поток преобразования 2,3- эпоксисквалена в могросайд, который определяет выход могросайдов.

1. ДаиВ то же время- эл. - привет.[74]определили SGCD с помощью RNA/данные отсутствуют.sequ(RNA-seq) и цифрового профилирования экспрессий генов (DGE) анализа Лу хан го. CDNA/данные отсутствуют.составляет 2800 бп в длину и содержит орф 2280 бп, кодируя белок с 759 аминокислотами с прогнозируемым молекулярным весом 84,4 кда. Функция циклизации SGCD была впоследствии проверена с помощью дрожжевого штамма GIL77, который может циклизировать 2,3- эпоксисквален до cucurbitadienol. Это, кажется, несовместимо с SGCD в биосинтистическом пути Mogroside велосипедистов 2,3;22,23- диэпоксисквален для генерации 24,25- эпоксисквален-эпоксисквален (рис. 2). На самом деле, Itkin и др. [32] использовали Saccharomyces cerevisiae и преобразовал табак никотиана табак L для функционального анализа SGCD и пришли к выводу, что SGCD может не только циклизировать 2,3;22,23- бисэпоксисквален, но и циклировать 2,3- эпоксисквален для производства сквален, хотя последний не участвует в синтезе Mogroside. Дальнейшие исследования показали, что для 2,3- эпоксисквалена циклизация SGCD предшествует эпоксификации ERG1, в результате чего SGCD в основном демонстрируют функцию циклизации 2,3- эпоксисквалена.

3.2.3 CYP450 и гликозилтрансферазы

CYP450 — это суперсемейство генов растений, играющих ключевую роль в окислении природных продуктов, таких как терпены, флавоноиды, алкалоиды и лигнин [75]. Со строгой спецификой субстрата и низким сходством последовательности. Гликозилтрансферазы могут быть членами второго по величине семейства ферментов растений 1ugt, которые передают различные сахара или сахара в различные рецепторы, и требуют различных гликозилтрансферазы [76]. Поэтому относительно сложно эффективно обнаружить и клонировать гены CYP450 и гликозилтрансферазы, которые катализируют биосинтез конкретных метаболитов. Танг и др. [77]выявили и проверили семь CYP450s и пять UDPGs в качестве потенциальных генов, ответственных за синтез M5 на основе комбинированного применения Рна-секи D- джи,в сочетании с быстрым накоплением M5 после 50-70 d после цветения. Этот метод создал эффективный способ выявления потенциальных генов, ответственных за биосинтез новых вторичных метаболитов в немодельных растений.

Чжан и др. [50] выявили многофункциональный цитохром P450 фермент (CYP87D18) и гликозилтрансферазу (UGT74AC1) в ло хан го. Анализ ферментной активности In vitro показал, что CYP87D18 отвечает за каталитическое окисление положения C11 фуростанола до формы 11- оксофуростанола и 11- гидроксифуростанола; UGT74AC1 может специально передать глюкозу в положение C3 логанинола, чтобы сформировать логанин IE. Почти в то же время иткин и др. [32] выявили 191 кип и 131 уг в момордике гросвенори и предварительно проверили 40 кип и 100 уг, которые были выражены в развитии плодов. Функциональная проверка была проведена в дрожжах и эшерихия коли, соответственно. Результаты показали, что CYP87D18 (CYP102801) катализирует гидроксилирование позиции C11 транс - 2425 - дигидроксихолеста -4-en-3-one для производства росмолиевой кислоты; UGT74-345-2, UGT75-281-2, UGT720-269-1 и UGT720-269-4 отвечают за первичную гликозилирование на позиции C3, из которых UGT720-269-1 является также единственным ферментом, ответственным за первичную гликозилирование на позиции C24. UGT720-269-1, UGT94-289-1, UGT94-289-2 и UGT94-289-3 отвечают за разветвленную глюкозу цепей с3 и C24.

3.3 биосинтез cucurbitadienol

Ли шуй-лиань и др. [78]использовали тритерпеноидное соединение, полученное в лаборатории, для гетерогенного экспрессии и ферментации клонированных SGCD в дрожжевой шаговой деформации WD-2091 (FP- с,SQ- с,SQE и MVA пути были пережаты и регулировались), клонированные SGCD были гетерогенно выражены и ферментированы, а урожайность cucurbitadienol составила 27,44 мг/л. Ген cd был далее переведен из высококопированной плазмид pRS425 в низкокопировальную плазмид pRS313 для регулирования экспрессии гена cd, а также был получен 313-SL-CB Saccharomyces cerevisiae 1. Ячейкаfactory, с 202,07% увеличением производства cucurbitadienol. Высокая плотность ферментации достигла 1724,10мг/л, что в настоящее время является самой высокой урожайностью микробного синтеза cucurbitadienol. Это исследование заложило основу для создания эффективной клеточной фабрики по производству тетрациклических тритерпеноидов типа cucurbit.

Строительство завода по производству микробных клеток для M5 может быть связано с передачей первоначального биосинтеза или реконструкцией и строительством всего метаболического пути. Хотя доказано, что cucurbitadienol не является скелетом для синтеза логанина, инженерная бактерия 313-SL-CB, которая производит высокие уровни cucurbitadienol, может быть использована в качестве шасси клетки. Ген оксидазы может быть рекомбинирован для преобразования cucurbitadienol в 24,25- эпоксиcucurbitadienol, а затем катализирован эф, CYP450 и гликозилтрансферазы для производства M5 (рис. 3).

4 обсуждение и перспективы

С улучшением людей#39; санитарное просвещение, потребление и др#- 39; Погони за едой больше не ограничиваются удовлетворением вкусовых рецепторов, но также уделяют все больше внимания ее здоровью и функциональности, что привело к «взрывному» росту спроса на натуральные несахарные подсластители [30]. В частности, M5, Один из world's сильнейшие натуральные подсластители, не только встречает публику и#39;s demand as a natural non-sugar sweetener, but also serves as a sucrose substitute дляdiabetics and obese people due to its medicinal properties [79]. The demand дляM5 is gradually increasing worldwide [80], and plant extraction methods can no longer meВ то же времяmarkВ то же времяdemand. Синтетическая биологияhas unique advantages in the В целях повышения эффективностиand sustainable extraction of natural plant products, and has been applied to the Ii. Обобщениеof various natural products [81-83]. Therefore, the large-scale production of M5 using synthetic biology is an inevitable trend. At present, the biosynthetic pathway of M5 has been completely elucidated, and the key 1. Ферментыhave been cloned and functionally verified, but research on microbial production is still lacking.

Основываясь на принципах синтетической биологии, мы предлагаем две стратегии для строительства клеточного завода M5: во-первых, как упоминалось выше (рис. 3), переход на M5 может быть достигнут на основе высокопроизводительной инженерии производства огуретадиенола бактерии 329 - l- cb, что является наиболее удобным способом; Во-вторых, пять генов фермента, задействованных в преобразовании 2,3;22,23- диоксо-сквалена в M5 (рис. 2), могут быть рекомбинированы в дрожжевые клетки для достижения синтеза de novo. Существует еще много трудностей в реализации микробного производства активных молекул м5 с использованием этих двух стратегий: во-первых, фермента, который катализатор окисления сквалена до 24,25- эпоксисквалена в первой стратегии не был обнаружен, и вторая стратегия, yeast's эндогенный ERG1, не может обеспечить достаточным 2,2;22,23- бисепоксискволен для SGCD. День рождения.Во-вторых, биосинтезионные пути м5 включают в себя много ферментов и промежуточных веществ, метаболический процесс является сложным, и трудно достичь эффективного и скоординированного выражения экзогенных генов, интегрированных в одну микробную клетку, что также вызывает большее метаболическое давление на организм. Наконец, SGC- д,UGT720-269-1 и UGT94-289-3 являются неспецифическими ферментами, которые могут действовать на различных субстратах, образуя различные продукты, и порядок и направление катализа в шасси клетки трудно контролировать.

Для решения этих проблем мы предлагаем следующие стратегии: выявление и проверка окислителей, которые катализируют производство 2425 - эпоксилюлюидов из люпилюлов и квадратов, которые эффективно катализируют реакцию эпоксиляции; Более точно регулировать путь вниз по течению 2,3- эпоксисквалена и 2,3- эпоксисквалена в большей степени направлены на синтез могросида. В последние годы модульная технология совместного культивирования стала новой стратегией снижения клеточного напряжения и увеличения производства целевой продукции [84 — 85]. Таким образом, путь биосинтеза M5 можно разумно разделить на различные модули, и каждый модуль может быть интегрирован в конкретный штамм. Набранные штаммы могут быть интегрированы в одно пространство, а затем совместно культивировать набранные штаммы для достижения синтеза de novo M5. Структурная биология используется для анализа структуры фермента белков и понимания специфического каталитического механизма, а субстратная специфика фарнезилтрансферазы и гликозилтрансферазы повышается за счет соответствующей фермента модификации. Для достижения прямого катализа ферментов разрабатываются ключевые технологии мониторинга соединений в режиме реального времени и регулирования метаболических динамических процессов. С развитием синтетической биологии и метаболической инженерии, недорогое, крупномасштабное производство м5, несомненно, будет реализовано.

Ссылка:

[1] 13 ч. 00 м. - суэц  - джей,  Корейская народно-демократическая республика  - т,  - зееви.  D,    В то же время  - эл. - привет.  Искусственные подсластители В случае необходимости glucose  По борьбе с нетерпимостью По запросу: Изменения в системе   - нет, нет.   - микробиота.  - природа,   2014 год,   514(7521): 181-186.

[2] Кокоту (Япония) Мг, мг, - асимакопулос - аг, - томайдис. - нс. - привет. Искусственное дыхание (искусственное дыхание) sweeteners  as  Новые загрязнители В окружающей среде:     В целях анализа     Iii. Методологии      И окружающей среде Удар с места. Анальные методы, 2012, 4(10): 3057 — 3070.

[3] Гупта п., Гупта н, - павар ап, В то же время Al. Роль С сахаром и сахаром sugar  3. Заменители in  dental  - карис: a  - рецензия. ISRN Dent, 2013, 2013: 519421.

[4] - брэй!  - привет. - привет. - привет, попкин. М. : м.  Питание с пищей  sugar  and  Вес тела: мы достигли кризиса в эпидемии ожирения and  - диабет? : : категория: В области здравоохранения be  Черт бы тебя побрал! За счет заведения - на сахар. Диабет, 2014 год,37(4): 950 — 956.

[5] Ян ць, чжан цф, грег фу и др. Добавили потребление сахара и смертность от сердечно-сосудистых заболеваний  - взрослые люди.  Организация < < джама > >  - стажер.   - мед,  2014 год,   174(4): 516-524.

[6]  Świader - к,Wegner - к,Piotrowska A.,и др. Растения в качестве  source   of  natural  Высокая интенсивность света  Подсластители:  - обзор. - да. - J.Appl Bot - продукты питанияQual, 2019, 92: 160-171.

[7] - до свидания.   - м,   - майстер, майстер.   - к,   - да, кава.   - р.   Малокалорийные подсластители и другие заменители сахара: обзор safety  - какие-то проблемы. Компания < < компар > > В настоящее время - продукты питания Sci-i (Sci) - продукты питания Saf, 2006, 5(2): 35-47.

[8] (подпись) джин    В мл,    Организация < < мугурума > >    - м,    13. Мото    - м,    В то же время    Эл. 13 недель - повторное рассмотрение  3. Доза Токсичность для окружающей среды  of  Сирайтия гросвенори 1. Выписка in  3. < < вистар > > Париж (Франция)  (галас) крысы. - продукты питанияПо химии и химииToxicol, 2007, 45(7): 1231-1237.

[9] - кингхорн.   - о, боже.   Канеда (Канада)   - н,   Пэк (пэк)   - ни,   В то же время   Al. Некариогенные интенсивные натуральные подсластители. Med В настоящее времяRev, 1998, 18(5): 347-360.

[10] Адеогун (Adeogun)  - о,  < < адекунле > >  A.,  3. Ашафа  - A.  Химический состав, Смертность в результате несчастных случаев and  Противогрибковые средства Мероприятия в области развития of the  Выдержки из статьи of  Листья и листья of  Тауматококк. - да Даниэллиант (Бразилия) Продукты питания, переносимые - грибы. Бени-суэф Организация < < юнив > > - J. Базовый Appl Sci, 2016 год,5(4): 356-368.

[11] - гоял.  - ск,  - сэмшер,  - гоял.  - в рк.  В чем дело?  (стевия ребаудина) Био-подсластитель: a  - рецензия. По запросу Int - J. Питание Sci-i (Sci)Nutr, 2010 год,61(1): 1-10.

[12] Сингх (США)   М, д,   3. Кумари   - м,   - "пракаш"   HG,   В то же время   Al. Фитохимия and  pharmacological  И важное значение Из стевии: натуральный подсластитель без калорий. Sugar Tech, 2019, 21(2): 227-234.

[13] Джин джейс, ли джей х. Фитохимические и фармакологические аспекты сирайтии гросвенория, Лу хан ко. Oripharm Exp Med, 2012, 12(4): 233-239.

[14] Чжан (Китай) Вб, вр, Песня для песни - да, День святого валентина Tryp celle hotel, В то же время - эл. - привет. Последствия для окружающей среды В могросиде  on   С высоким содержанием жиров  - ожирение;  И безалкогольные жирные заболевания печени у мышей. Молекулы, 2018, 23(8): 1894.

[15] Мидзутани к, курамото т, тамура и др. Сладость глициретической кислоты 3-O- гранат-д-моноглюкуронид и связанные с ним гликозиды. Biotechnol Biochem, 1994, 58(3): 554 — 555.

[16] - "исбрукер"   - ра,  - бурдок,   - привет. - привет.  Риск для окружающей среды  and   Оценка уровня безопасности on  the  consumption  of  - лакрица. Корневой (глицирриза) Sp., его экстракт и порошок в качестве пищевого ингредиента, с акцентом на фармакологии и токсикологии     of     - глицирризин.     Regul Toxicol Pharmacol, 2006, 46(3): 167-192.

[17] - дюбуа.  GE,   Пракаш и.некалорийный  Сладости, сладость моя  - модуляторы,  and   sweetener   - усилители. Annu В настоящее времяFood Sci-i (Sci)Technol, 2012, 3: 353 — 380.

[18] - уильямсон. Эм, лю хм, иззо аа. Тенденции в области использования, фармакологии и клинического применения новых лекарственных средств растительного происхождения. Br - J.фармакол, 2020 год,177(6): 1227-1240.

[19] - мацумото.  - к, В провинции касаи - р, - отани. K,   В то же время - эл. - привет. По делам несовершеннолетних Кукурбан-гликозиды   Из российской федерации   Фрукты и фрукты   of    13. Сирайтия Гросвенори (Cucurbitaceae). Хем фарм булл, 1990, 38(7): 2030 — 2032.

[20] Лю (Liu)  - т,  13. Ван  X- г,XH,  1. Ли  C,   В то же время  - эл. - привет.  Исследования по теме:  on   Антитостические, ожидаемые и антиспазмодические эффекты сапонина V от момордики гросвенори. Чин фарм - джей,2007, 42(20): 1534-1536, 1590.

[21] Лю (Liu) C,  1. Даи В общем, да. 29. Доу Д-р кью,  В то же время - эл. - привет. A  natural   Подсластитель для пищевых продуктов with   Антиподжелудочной железы  cancer  - в собственность. Oncogenesis, 2016, 5(4): e217.

[22] - такасаки.  - м,   Организация < < коносима > >  - т,  - "мурата"   - Y,  В то же время  - эл. - привет. - антикарциноген  Деятельность организации объединенных наций  of   natural   - подсластители, Кукурбитан гликозиды, из момордики гросвенори. Рак летт, 2003, 198(1): 37 — 42.

[23] Чэнь (Китай) Ж/д, 13. Ван - джей, Qi (Qi) - СИ, В то же время - эл. - привет. The  Антиоксидантная деятельность И природных ресурсов - подсластители, - могросайды, От плодов и фруктов Из провинции сирайтия - гросвенори. По запросу Int - J. Food  Sci-i (Sci) НТР, 2007, 58(7): 548 — 556.

[24] Чжоу - Y,чжэн - Y,эберсоул дж., и др. Секреция инсулина стимулирует эффект mogroside V и фруктовый экстракт Luo Han Kuo (Siraitia grosvenori Swingle). Acta Pharm Sin, 2009, 44(11): 1252-1257.

[25] В ту  Д-р кью,  - m  X- джей,XJ,  Чжао чжао чжао  - г,  В то же время  - эл. - привет.  1. Клонирование  and  Выражение SgCYP450-4 от Сирайтия гросвенория.Acta Pharm Sin B, 2016, 6(6): 614 — 622.

[26] Хк макапугай, НДП нанаяккара, суджарто дд и др.    Высокая производительность    В жидком состоянии    Хроматографический анализ основного сладкого принципа к ло хан ко фруктам. - J.Agric Food - чем могу помочь?1985, 33(3): 348-350.

[27] Рао (Россия)  - старший,  < < равишанкар > >  - привет. - привет.  На территории предприятия  cell   Культура: химическая   Предприятия и предприятия   of    Вторичные продукты питания   Метаболиты в организме. Biotechnol Adv, 2002, 20(2): 101-153.

[28]  А. дударева   - н,   - деллапенна.   D.    На территории предприятия   Метаболическая инженерия: В будущем Перспективы на будущее and  3. Задачи. - на курреОрганизация < < опин > >Биотехнол,2013, 24(2): 226 — 228.

[29]  - да, да. - Эм-джей, Париж (Франция) - г, - класен? - да. - джей, В то же время - эл. - привет. Synthetic biology  to  Доступ к интернету and  Расширение сети интернет Природа и природа Химическое разнообразие. Нат (Nat)Rev - микробиол,2016, 14(3): 135-149.

[30] - Филипп (Франция)  - RN,  Д/д  - Мэй!  - м,  Андерсон (США)  J,   В то же время  Al. Биотехнологическое производство натуральных безкалорийных подсластителей.   - на курре   Организация < < опин > >   Биотехнол,   2014 год,   26: 155-161.

[31] Кэмерон де, башор СИ джей, коллинз джей джей. Краткая история проекта synthetic   - биология. Нат (Nat)  Rev   Microbiol,   2014, 12(5): 381 — 390.

[32]  Иткин м, давидович-риканати р, коэн с и др. Биосинтетические пути несахарного подсластителя высокой интенсивности mogroside  V  Из российской федерации Siraitia  - гросвенори. Организация < < за сотрудничество > >   Организация < < натл > >   Организация < < асад > >    Sci    Соединенные Штаты америки,    2016,     113(47): E7619-E7628.

[33]  1. Ли М, д, Чжан (Китай) Отдел кадров.  Ii. Исследования and  А. виды применения  of  Китайский язык (english)medicine   Луоханго-а  По специальным политическим вопросам  Местные органы власти  product   - в гуанси.   - гихайя,   2000 год,   20(3):   270-276.

[34] В чем дело?  - ч.  - интенсивный процесс  sweetener   Из российской федерации  Ос (Lo)  Han   Куо (момордика гросвенори). - эксперимент, 1975 год, 31(5): 533-534.

[35] Касай р, ни рл, наши к и др. Сладкий кукурбитан гликозиды Из российской федерации fruits  О сирайтии сименсис (чи-зи Лу-хан-го), a  Chinese  Народная медицина. Народная медицина. Agric 1. Биол- чем могу помочь?1989, 53(12): 3347-3349.

[36] Организация < < юкия > > - м, Организация < < акихиса > > - т, 1. Токуда - г, В то же время - эл. - привет. Ингибиторные эффекты cucurbitane гликозидов и других тритерпеноидов от плодов Momordica grosvenori на эпштейн-барр  В случае вируса  early   Антиген, вызванный - опухоль. - нет. Промоутер 12- о-тетрадеканойлфорбол -13- ацетат. - J.Agric Food Chem, 2002, 50(23): 6710-6715.

[37] Ван л, ли лк, фу ЙКС и др. Разделение, синтез и цитотоксичность ряда mogrol производных. - J.Asian Nat Prod Res, 2019: 1-15.

[38] Мурата и ё сикава с, судзуки я и др. Характеристики подсластия   of   the    - тритерпене.   glycosides    in Siraitia  - гросвенори. J  В настоящее время ПГС (ГСС) Food  Sci  Технол, 2006, 53(10): 527-533.

[39] Такэмото т, арихара с, накаджима т и др. Исследования по вопросу о Состав участников - из капусты - момордика. Я-да. По состоянию на - о, боже. - в принципе. Якугаку (якугаку) - засси,  1983 год, 103(11): 1151-1154.

[40] Такэмото т, арихара с, накаджима т и др. Исследования составляющих момордики fructus. II. Положение в области прав человека Структура организации объединенных наций - сапогенин.  Якугаку (якугаку)  - засси,  1983 год,  103(11): 1155-1166.

[41] Такэмото т, арихара с, накаджима т и др. Исследования по вопросу о   Состав участников   of    - фрукт (fructus)   - момордика.   III. Положение в области прав человека Ii. Структура of  - могросайды. Якугаку (якугаку) - засси,  1983, 103(11): 1167-1173.

[42] Ли дп, икеда т, хуан ил и др. Сезонные вариации могрозидов в ло хан ко (сирайтия гросвенори) фруктов. J нат мед, 2007, 61(3): 307 — 312.

[43] Иткин м, хайниг у, цфадия о, и др. Биосинтез антинутриционного действия  1. Алкалоиды  in   D. солановые вещества  А. сельскохозяйственные культуры  В качестве посредника   По запросу:   Группы по группам   - гены.   - наука,   2013, 341(6142): 175 — 179.

[44] - гаррисон.  Дм. : дм.  The  2. Биосинтез  of  Тритерпеноиды, стероиды и каротеноиды. Nat Prod Rep, 1990, 7(6): 459-484.

[45] Ланге (Lange) - бм, - ах ками. A.  3. Метаболизм Инженерно-технические работы 1. Вид растений       - монографии,       - сескитерпенес        И ток дитерпенса 1. Статус and  В будущем - о возможностях. Завод биотехнол J, 2013, 11(2): 169-196.

[46] - добрый вечер.  F, F,   - добрый день.  A.,   В чем дело?  - б.   Биогенез, молекулярный   Правила и положения    and     3. Функция    of    Растительные изопреноиды. Prog Lipid Res, 2005, 44(6): 357-429.

[47] Ляо п, хеммерлин а, бах тиджей и др. Потенциал мевалонатного пути для увеличения производства изопреноидов. Biotechnol Adv, 2016, 34(5): 697-713.

[48] Лоле (Laule) - о, - фурхольц. A,  - чанг. - хш, В то же время - эл. - привет. Перекресток между   - цитозолик   and    Пластицид (пластицит)   Iii. Пути развития   - изопреноидной кислоты  2. Биосинтез  in  Арабидопсис (арабидопсис)  - талиана. - привет. Proc Natl Acad Sci USA, 2003, 100(11): 6866-6871.

[49] 13. Шибуя - м, адачи - с, Эбизука и я. Cucurbitadienol synthase,    Первый выделенный фермент для биосинтеза cucurbitacin — это отдельный фермент от циклоартенола Синхронизация функций для Фитостерол (фитостерин) - биосинтез. Тетраэдр, 2004, 60(33): 6995-7003.

[50]  Чжан (Китай) - сп, 1. Даи В общем, да. Париж (Франция) - джей джи, В то же время - эл. - привет. 5. Окисление Из кукурбадиенола  Каталитические нейтрализаторы  По запросу:  CYP87D18   in   Биосинтез могросидов с сирайтии гросвенории. Физиол растительных клеток, 2016, 57(5): 1000-1007.

[51] В чем дело?   - джей-эйч,   - вайкманн.   - джей эл.   - кодури.   Республика Корея,   В то же время   Al. Выражение мнения of  synthetic  - тхауматин Гены и гены in  - дрожжи. Биохимия, 1988, 27(14): 5101-5107.

[52] - даниэль. - привет. S,  Меллит х, фаус I и др. Снова складываю сладкую дегустацию protein  - тхауматин II. Положение в области прав человека Из российской федерации Нерастворимое включение И других органов  В обобщенном виде in  Escherichia  - коли. - коли? Food Chem, 2000, 71(1): 105-110.

[53] - масуда.    - т,   - китабатаке    - н.   Ii. События    В области биотехнологий production   of  - с удовольствием.  - белки. J Biosci Bioeng, 2006, 102(5): 375-389.

[54] Сеунен с, гюнс СИ. Стевиол гликозиды: химическое разнообразие, Обмен веществ, and  - функция. J  Nat  Prod, 2013, 76(6): 1201 — 1228.

[55] 13. Ван  - JF,  1. Ли   - сай,  Сионг (Китай)  - ZQ,   В то же время  - эл. - привет.   Путь минная интеграция критических ферментов для биосинтеза de novo steviolglycosides sweetener в Escherichia coli. Мобильный Res, 2016, 26(2): 258-261.

[56] В чем дело? K,  Карлсен (Carlsen) S,  Семмлер а, В то же время - эл. - привет. Производство микробов  of  Следующее поколение:  В чем дело?  - подсластители. Факт микробных клеток, 2016, 15: 207.

[57]  Сюй (Xu)   - джи джей,   Цаи (Cai)   Ч, ч, ч.   Гао (Gao)   Ч, ч, ч.   В то же время   - эл. - привет.   A    Новый глюкуронилтрансферазы    has     an     Беспрецедентная способность к работе      to       Каталитические нейтрализаторы      Непрерывные операции (продолжение)      Двухступенчатая глюкурониляция of  - глициретинический - кислота; to  Выход глициризина. Новый Phytol, 2016, 212(1): 123-135.

[58]  1. Ли C,  Чжао чжао чжао - эй джей, По запросу: XD, XD,  В то же время - эл. - привет. 3. Применение  - из гликозила Трансфер из аэропорта в аэропорт in  glycyrrhizic  - кислота; Синтез: CN, 110106222. 2019-08-09.

[59] Лю джей ди, чжан рг, ду су и др. Перепроизводство гераниола    by     Усиленная система управления    Информация о прекурсоре    3. Поставки    В сакчаромициях  - церебрысия.  J   Биотехнол,  2013, 168(4): 446 — 451.

[60] 6. Огюстен  - джей м.  Кузина (Китай)  - V,  - привет, андерсен.  - сб,  et   Al. Молекулярная структура Мероприятия, биосинтез and  Iii. Эволюция - тритерпеноида - сапонины. Фитохимия, 2011, 72(6): 435-457.

[61] Guo   Ч-ч,  1. Ли  - рф,  Лю (Liu)   - сб,   et    - эл. - привет.  Молекулярная характеристика,   Выражение:   and    Правила и положения   Генов эпоксидазы гиностеммы пентафиллум сквален

1. Физиология растений Biochem, 2016, 109: 230 — 239.

[62] Расбери ДЖМ, шан х, леклер рж и др. Арабидопсис талиана - сквален. Эпоксидаза (эпоксидаза) 1  is  По вопросам существа Для развития корнеплодов и семян. J 1. БиолChem, 2007, 282(23): 17002-17013.

[63] у Y,  - чанг. ПК, у - г, et  - эл. - привет. В целях развития Амирин синтазы   for    efficient    У-амирин   Ii. Обобщение   В области машиностроения Saccharomyces  - церебрысия. Организация < < акг > > Synth - биол,2018, 7(10): 2391-2402.

[64]  13. Ван  - ж, - да. - да. - т, Han  - г, et  - эл. - привет. 1. Клонирование И определение характеристик  of  - оксидоскален  3. Циклоны  От kalanche daigremontiana: enzymes  В целях стимулирования  10  Изменение структуры организации  В этом разделе На пути к успеху  - фриделин. И другие вопросы - тритерпеноиды. J  Biol  Chem,  2010,  285(39): 29703-29712.

[65] Яо (фр.) - Z, Чжоу пп, Су бм и др. Увеличение производства изопрена by  По реконструкции и восстановлению И метаболических процессов Баланс между показателями    Укрепление потенциала организации объединенных наций    Информация о прекурсоре    3. Поставки    И более совершенные   - изопрену.   Синхронизация функций   in    Сакчаромициес цевисии. ACS Synth Biol, 2018, 7(9): 2308-2316.

[66] Paramasivan K, Mutturi S. регенерация надph в сочетании с редуктазой HMG-CoA повышает сквален synthesis  in  Saccharomyces  - церебрысия. J Agric Food Chem, 2017, 65(37): 816-8170.

[67] Ro (*) DK, Paradise E- м,Ouellet M, и др. Производство противомалярийных лекарственных средств-прекурсоров артемизиновой кислоты в искусственных дрожжах. Природа, 2006, 440(7086): 940-943.

[68] Нельсон джа, стекбек старший, спенсер та. Биосинтез (биосинтез)    24,      25- эпоксихолестерин     Из российской федерации     Сквален 2,3;22,23- диоксид углерода.  J   Biol   Chem,    1981 год,  256(3): 1067-1068.

[69] - в буто.  - о,  В чем дело?  - дх,  - шубер.  - ф.  Преимущественное использование велосипедов of  2,3(S):22(S),23- диоксидоскален Материал, подготовленный млекопитающими  2,3- окислитель-ланостерол  - киклаз. - биохим.  Биофис (биофис)  Res   В общем, до свидания.   1992 год,  188(2): 898-904.

[70] - годио!  - RP,  - фусес.  - р,  В чем дело?  - джей ф.  A   Скволеновая эпоксидаза is  Участие в проекте in  2. Биосинтез И то, и другое Антиопухолевое соединение клаварической кислоты и стеролов в базидиомиете н. - сублатериций. Chem  Biol,  2007, 14(12): 1334-1346.

[71] < < судзуки > > - г, 10 ч. 00 м. - ахнин - L, Xu  - р, et  - эл. - привет. A  Подход на основе геномики to  the  early  stages  - из тритерпена Биосинтез сапонина в Medicago truncatula. Завод J, 2002, 32(6): 1033-1048.

[72] Чжао чжао чжао  - г,  Guo   J,   Г-н тан  - Q,  et   - эл. - привет.  1. Клонирование  И выражения мнений analysis  of  - сквален.  Эпоксидаза (эпоксидаза) Гены сирайтии гросвенории. Китай J Chin Mater Med, 2018, 43(16): 3255-3262

[73] У у у - тз, - чанг. Ч, лю йт, et  Al. Saccharomyces cerevisiae    Оксидоскален-ланостерол    Велосипедная разгрузка:    Химия-биология  По междисциплинарным вопросам  Исследования по теме:  of   - протеин...    Структурно-функциональная реакция    Отношения между механизмами. Химический рек, 2008, 8(5): 302-325.

[74]  Dai   В общем, да.  Лю СИ, чжу  - Эм,   et   al.    Определение функциональных характеристик  of  cucurbitadienol   Синхронизация функций  И тритерпене      гликозилтрансферазы      involved       В области биосинтеза     of     1. Могросайды     Из российской федерации     Siraitia grosvenorii.    На территории предприятия   1. Ячейка   - телосложение,   2015 год,   56(6): 1172-1182.

[75] Han  - джей, Ким ким ким - HJ, - вон там. - да, да. et  al.  The  Организация < < сэт > > P450 фермент  - CYP716A47  3. Катализаторы  the   1. Формирование вооруженных сил  Из протоанаксадиола из даммаренедиола-ii во время женьшеня 2. Биосинтез in  Организация < < панакс > > Женьшень и женьшень. Физиология растительных клеток, 2011, 52(12): 2062 — 2073.

[76] - капути!  - L,  - малной.  M,   - горемыкин.  - V,  et   al.   Общегеномная фитогенетическая реконструкция семьи

1 udp-гликозилтрансферазы показали расширение семьи во время адаптации растений к жизни на земле. Завод J, 2012, 69(6): 1030-1042.

[77]  Танг Q, ма XJ, мо см и др. Эффективный подход к решению     Поиск по сайту     Siraitia      grosvenorii      Биосинтез тритерпене Гены и гены by  RNA-seq  and  В цифровом формате Анализ экспрессии генов. BMC Genomics, 2011, 12: 343.

[78]  Ли сл, ван д, лю и др. Изучение гетерологического эффективного синтеза cucurbitadienol. Китай J Chin Mater Med, 2017, 42(17): 3326-3331.  

[79] Xia (Xia)  Y,   Ривера-хугет  - я,  - хьюз.  - биг,  et   Al. Изоляция of  the  - с удовольствием. Компоненты и компоненты Из российской федерации Сирайтия гросвенория. Food Chem, 2008, 107(3): 1022-1028.

[80] 13. Ван  - L,  Париж (Франция) - ZM,  Лу (Lu) * FL,  et   al.   Кукурбитан гликосайд     Полученный в результате      from      mogroside       Ii: структура-вкус  - отношения,  Антиоксидант (антиоксидант)  Деятельность, и   Острая токсичность   - токсичность.   Молекулы,   2014,     19(8): 12676-12689.

[81] Лю (Liu) - LQ, Лю (Liu) H,  Чжан (Китай) Ч, ч, ч. et  al.  Инженерно-технические работы - биосинтез.  of   - кофеин.   - кислота;  in   Saccharomyces cerevisiae с гетерологическими комбинациями фермента. Инжиниринг, 2019, 5(2): 287 — 295.

[82] Шринивасан п., - смолке. CD. Проектирование Микробный биосинтез Ii. Платформа for  de  novo  production  - тропановых алкалоидов. Nat Commun, 2019, 10: 3634.

[83] Чэнь хф, чжу СИ, чжу мз и др. Высокое производство валенсины in  Saccharomyces  cerevisiae  Через метаболическую инженерию. Факт микробных клеток, 2019 год, 18: 195.

[84] Ван рф, чжао ши, ван цт и др. Последние достижения в области Модульная система управления 2. Совместная культура Инженерно-технические работы for  synthesis  И природных ресурсов - продукты питания. Curr  Opin  Biotechnol,  2020,  62: 65-71.

[85] 1. Ли  - ж,  13. Ван  XN, XN,  Чжан (Китай)  Отдел кадров.  B. обеспечение сбалансированности  Нелинейный биосинтез росмариновой кислоты по модульной схеме 2. Совместная культура - инженерное дело. Организация < < метаб > > Английский язык, 2019, 54: 1-11.