Исследование биосинтеза Mogroside V

Подсластители являются одним из видов пищевых добавок- да- да. Они могут быть разделены на синтетические подсластители и натуральные подсластители в зависимости от их источника.Натуральные подсластители могут быть далее разделены на сахариды и несахаридыВ зависимости от их химической структуры и свойств. Недавние исследования показали, что синтетические подсластители могут привести к дисбалансу кишечной флоры и непереносимости глюкозы, вызывая нарушения обмена веществ [1], и стали новым типом загрязняющих веществ, вызывающих загрязнение окружающей среды [2]; В то время как высокое потребление сахара способствует возникновению кариеса зубов, ожирения, диабета, метаболического синдрома и сердечно-сосудистых заболеваний [3-5]. Натуральные несахарные вещества растительного происхождения привлекают все большее внимание как новое поколение подсластителей, которые могут удовлетворить сладкие потребности из-за их высокой сладости [6], низкой калорийности [7], безопасности [8]и отсутствия кариогенности [9].

В настоящее время основными натуральными несахарными подсластителями, которые были разработаны и используются внутри страны и за рубежом, являются: тауматин, стевиол гликозиды, могрозид (могрозиды) и глицирризовая кислота [6](таблица 1), среди которых самым сладким является тауматин, но обладает горьким вкусом и «неароматом» ликорита, а также недостатками замедленной сладости и чрезмерной длительности [17]; Во-вторых, это монах фруктовый подсластитель, который не имеет неприятного послевкуса и является единственным натуральным подсластителем, который может уменьшить жир [14].Могросайд V(м5) — главный источник сладости могросида [18]. При концентрации 1/10000 его сладость в 425 раз больше, чем у 5% sucrose [19]. Он также имеет много фармакологических мероприятий, таких как снятие кашля и флегма [20], против рака [21-22], против окисления [23], и многие другие фармакологические мероприятия, что делает его новым поколением функциональных подсластителей, которые разрабатываются во всем мире. Из-за многочисленных трудностей, связанных с культивированием Luo В чем дело?Го (фр.)[25], и того факта, что содержание M5 во всем фрукте составляет всего 0,8% - 1,3% (вт/вт) [26], трудно очистить сложный продукт его аналогов, и невозможно достичь крупномасштабного производства, полагающегося на экстракцию из Luo HА вот и нет.Guo.

Развитие культуры растительных клеток [27], метаболической инженерии [28]и синтетической биологии [29]дало идеи устойчивого производства для приобретения натуральных растительных продуктов. Культура растительных клеток трудно использовать для производства специализированных натуральных продуктов из-за ее высокой стоимости, длительных сроков и низкой урожайности. Кроме того, сложность растительных клеток и отсутствие генетических инструментов и надлежащих методов осложняют метаболическую инженеру растительных клеток для производства сложных натуральных продуктов м5, что требует многоступенчатых биосинтезных путей [30]. Поэтому культура растительных клеток и метаболическая инженерия могут не быть жизнеспособным методом для крупномасштабного производства м5. Синтетическая биология — это наука, возникшая в последние годы для перепроектирования, инженерии, построения и применения жизненных систем и процессов [31].

По сравнению с традиционными методами она обладает такими преимуществами, как короткий цикл, высокая урожайность, безопасность и отсутствие загрязнения, а также простой процесс добычи. Это новая экологически чистая и эффективная модель производства. Благодаря непрерывному развитию синтетических биологических исследований и углубленному пониманию молекулярного биосинтезионного механизма могросидов в Лу хан го [32]использование микроорганизмов для синтеза м5 стало новым способом крупномасштабного производства, что имеет большое значение и широкие перспективы для удовлетворения потребительского спроса на натуральные подсластители. В настоящем документе основное внимание уделяется обзору биосинтезионного механизма и прогресса в области синтетических биологических исследований м5, а также обсуждаются проблемы, возникающие при синтезе микробов, с тем чтобы обеспечить основу для биосинтезионных исследований м5.

1структура и фармакологическая активность MogrosiД/дV

SiraitiA/данные отсутствуют.- гросвенори— созревший плод растения SiraitiA/данные отсутствуют.grosvenorii семейства Cucurbitaceae. Он используется в китае в качестве традиционной китайской медицины [33]для смачивания легких с целью облегчения кашля, охлаждения крови и увлажнения кишечника с целью стимулирования движения кишечника. Его основным активным ингредиентом является сладкий гликозид [34]. Исследователи [19,35 — 36] выделили и выявили в сирайтии гросвенории разнообразные сладкие гликозиды, базовая структура которых показана на рис. 1. Количество единиц глюкозы и то, как они связаны производят подсластители молекул со значительно различными вкусами: disaccharideПодсластитель IIE на вкус очень горький, в то время как пентасакхарид M5 на вкус очень сладкий [37].

M5 является компонентом подсластителя Luo В чем дело?GuoС высочайшей сладостью и содержанием [38]. Впервые он был изолирован японскими учеными, такими как TakemoПо адресу:цунематсу [39-41], и структура агликоне была определена как тетрациклический тритерпене момондол спектроскопическими методами, тем самым создавая полную структуру M5. Молекулярная формула M5 - C60H102O29, которая формируется путем добавления глюкозы в моординол на позициях C3 и C24. R2 - это две пирамидальные единицы, связанные между собой градом -1,6- гликосидическими облигациями, R1 - разрывная 3- глюкопираниловой группой, связанная между собой градом -1,6- гликосидическими облигациями и градом -1,2- гликосидическими облигациями.

Натуральные несахарные подсластители растенийПроисхождение часто характеризуется многочисленными фармакологическими видами деятельности (таблица 1). M5 выполняет множество функций, включая снятие кашля и мокроты, борьбу с раком, окисление и регулирование сахара в крови. Исследования показали, что активный ингредиент в луоханго, который освобождает от кашля, составляет 50% спиртного экстракта по объему, а изолированный M5 может значительно сократить количество кашлей у мышей, продлить период задержки кашля и значительно увеличить экскрецию фенола красного в трахеи, что указывает на определенный эффект ожидаемого [20]. М5 может препятствовать распространению и выживанию клеток рака поджелудочной железы, нацеливая их на несколько биологических целей [21], что было подтверждено мышкой моделью ксенотрансплантатов рака поджелудочной железы. 7,12- диметилбенз [а] антрацен (DMBA), 12- о-тетрадеканойлфорол -13- ацетат (TPA) и пероксиазотная кислота (ONOO -) являются канцерогенами, которые вызывают преобразование нормальных клеток в раковые клетки. Было установлено, что м5 замедляет преобразование обычных клеток в раковые клетки кожи, противодействуя канцерогенам в ходе теста на канцерогенез кожи мышей [22], что указывает на то, что м5 оказывает воздействие на предотвращение рака кожи, вызываемого химическими канцерогенами. M5 и 11-O-Могросайд (mogroside)V. Категория Vмогут значительно испачкать химически активные виды кислорода (O2 - ·, H2O2 и ·OH) и ингибировать окислительные повреждения ДНК. В то время как 11-O- Mogroside V обладает более высоким эффектом улавливания O2 - · и H2O2, чем M5, но M5 обладает более высоким эффектом улавливания на ·OH [23]. Было установлено, что м5 может вызывать выделение инсулина в инсулиномном элементе рин - 5f, тем самым раскрывая эффект регулирования глюкозы крови м5 на клеточном уровне для диабетических пациентов. Это исследование показывает, что экстракт Лу хан го, особенно м5, имеет потенциал для профилактики и лечения диабета 2 типа [24].

2. Исследование механизма биосинтеза Mogroside V

Синтетическая биология — это реконструкция существующих биосинтезных путей в микробных клетках [29] для получения микробных сотовых заводов, которые производят желаемую продукцию, тем самым обеспечивая масштабное производство целевых соединений. В этой связи уточнениеМолекулярный механизм синтеза м5 в ло хан гоЗаложит основу для использования синтетической биологии для строительства клеточных заводов и достижения синтеза В случае необходимостиvitro.

2.1 модель накопления могросайда

Понимание схемы накопленияMogroside способствует лучшему анализу молекулярного механизма м5- синтез. Исследование структуры накопления Mogroside в ходе разработки Luohanguo показало, что чистое содержание Mogroside сохраняется, то есть общее содержание Mogroside остается неизменным на протяжении всего процесса роста [42]. На ранних этапах развития фруктов гликозиды в основном имеют форму могрозидных мип, причем как R1, так и R2 являются моносакваридными группами. Это указывает на то, что первым шагом в гликозилировании гликозидов являются две первичные гликозилирования, после чего вторая гликозиловая группа связана с R1 градом -1,6- гликозидной связью, что приводит к накоплению Могросайд (mogroside)IIIX. На более позднем этапе (77 d после цветения) появилось большое количество продуктов тетрасакарида, главным образом sialenoside (Siamenoside), R1 которого содержит филиал, образованный β 1,6-glycosidic облигации и β 1,2-glycosidic облигации. Потребление тетрасаксаридных продуктов началось через 77 дней после расцвета, и накопление R2 M5, который содержит два сахарных раствора, резко возросло на заключительном этапе созревания. Основной компонент сладкого гликозида в зрелых фруктах 103 d после расцвета составляет м5. Модель аккумуляции mogroside предполагает, что биосинтическая траектория M5 состоит в Том, что mogroside сначала проходит первичную гликозиляцию на позициях C3 и C- 24,а затем на этой основе проводится разрезная гликозиляция [32].

2.2 анализ биосинтеза Mogroside V

Транскриптомический анализ и анализ метаболизма являются эффективной стратегией для прояснения биосинтетических путей растительных природных продуктов [43]. В 2016 году израильские исследователи ItkВ случае необходимостиВ то же время- эл. - привет.[32] провели полный анализ биосинтеза M5 на основе транскриптомы иДанные генома Лу хан го(рис. 2) биосинтезионный путь M5 можно условно разделить на три этапа: этап синтеза прекурсоров на начальном этапе, этап формирования скелета на среднем этапе и этап производства и модификации исходного ядра на последующем этапе.

2.2.1 синтез прекурсоров IPP и DMAPP

Первичные прекурсоры синтеза терпеня включают изопентилпирофосфат (ипп) и диметилаллилпирофосфат (дмапп). Существуют два различных способа биосинтеза IPP и DMAPP на растениях: мевалонический кислотный путь (MVA/данные отсутствуют.путь) и мегил-эритритолофосфатный путь (MEP путь). Выбор различных путей зависит от типа синтетического продукта и подклеточного пространственного расположения [45]. Путь MEP в основном используется для синтеза монотерпенов, дитерпенов и тетратерпенов в плазме [46], в то время как путь MVA/данные отсутствуют.в основном используется для синтеза сескитерпенов, тритерпенов и политерпенов в цитоплазме [47]. Однако они не являются полностью независимыми, и общий промежуточный IPP может использоваться друг другом через пластическую мембрану [48].

M5 — продукт тритерпене сапонин в цитоплазме, и его прекурсоры IPP и DMAPP производятся из ацетилкоэнзима а по методу MV- A.Во-первых, две молекулы ацетилкоэнзима а формируются из ацетилкоэнзима а тиостеразы (атот) и 3- гидрокси3 - метилглутарилкоэнзима а синтазы (ХМГЦ) в форме 3- гидроксил3 - метилглутарилкоэнзима а (ХМГК-коа). Затем под катализатором 3- гидрокси3 - метилглутарилкоэнзима формируется редуктаза (ГГР), 3- гидрокси3 - метилглутарилкоа (мва), которая затем преобразуется в ипп ферментами метил-д-эритритол -4- фосфат-киназа (мк), метил-д-эритритол -3- фосфат-киназа (ПМК) и метил-д-эритритол -3- фосфат декарбоксилаза (МВД). IPP преобразовывается в свой двойной изомер диметилаллилпирофосфат (DMAPP) ферментом isopentenyl пирофосфат изомер (IPI).

2.2.2 формирование скелетов 24,25- эпоксигульдиенола

Гиранилпирофосфатный синтаз (пс) катализирует образование гиранилпирофосфата (ГПС) из IPP и DMAPP. Затем фарнезилпирофосфатный синтез (FPPS) катализирует синтез фарнезилпирофосфата (FPP) из одной молекулы IPP. FPP преобразуется в скволен (кв) путем синтазы скволен (кв). SQS-это бифункциональный фермент, который сначала ускоряет конденсацию двух молекул FPP для формирования прескваленового дифосфата (PSPP), а затем преобразует PSPP в пл в присутствии надф и Mg2+[44].

Долгое время учёные считали, что скволеновая эпоксидаза (SQE) катализировала одноэтапную реакцию кв на формирование линейной 2,3эпоксискволена, который затем циклизировался циклоназой на формирование скелета, ulipristal[49]. Тем не менее, недавние исследования показали, что прекурсор агликоне составляет 24,25- эпоксилуп -20(29)-en-3- ол, а не cucurbitadienol, и что прекурсор 2,3;22,23- диэпоксисквален, а не 2,3- эпоксисквален. Кв проходит две последовательные реакции эпоксиокисления, катализируемые SQE, в порядке, производя 2,3- эпоксисквален 2,3;22,23- диоксосквален, а последний циклизируется до 24,25- эпоксигулустринола под катализатором синтазы cucurbitadienol(cd) [32].

2.2.3 производство и модификация базового ядра mogroside

Уникальная особенность кукурбитанового тетрациклического тритерпеноидаMogroside-это специфическое для региона насыщение кислородомНа позициях C3, C11, C24 и C25 (рис. 2), образующих базовое ядро mogroside [32]. Таким образом, главной задачей при определении ступени синтеза материнского нуклея является его уникальная гидроксиляция, особенно трансгидроксиляция позиций C24 и C25. ItkВ случае необходимостиВ то же время- эл. - привет.[32] пришли к выводу, что эпоксид гидролаза (эф) отвечает за катализацию гидроксиляции позиций C24 и C25 в 24,25- эпоксилуп -20(29)-en-3-one для генерации транс -24,25- дигидроксилуп -20(29)-en-3-one, которая затем гидроксилируется на позиции C11 членом семейства CYP87, CYP87D18(CYP102801),[50]в системе фермента цитохром P450 (CYP450) для генерации lupeol. Предложен также порядок гидроксилионных реакций: эф белк, как правило, привязан к эпоксилуп -20(29)-en-1-ol, а не к линейной 2,3;22,23- диэпоксисквален, поэтому эф реакция следует реакции циклизации cd; Дополнительная гидрофилическая гидроксиловая группа на C11 предотвратила бы стыкование в гидрофобном кармане эф, поэтому гидроксиловая реакция C11 происходит после эф реакции.

Последний шаг в игреСинтез M5 - модификация гликозиляцииПозиции C3 и C24 на могросайде. Было установлено, что гликозилация в положении C24 повышает степень родства гликозилации в положении C3 путем стыковки субстрата с гликозилтрансферазом. Порядок гликозилации был определен на основе модели аккумуляции могросайдов: могросайд сначала проходит первичную гликозилацию на позиции C24 глюкозилтрансферазе ugt2022 -269-1 для получения Mogroside Ⅰ-A1; Затем угт720 -269-1 производит гликозилирование на позиции с3 для получения mogroside ⅡE; Затем UGT94-289-3 отвечает за разветвленную глюкозу цепи глюкозы на позициях C3 и C24, а промежуточное звено тетрасаксарида синтезируется в форму M5[32].

3 Mogroside V синтетические биологические предварительные исследования

Являясь естественным несахарным подсластителем, микробное производство белкового подсластителя taro имеет долгую историю исследований, и было достигнуто в различных микроорганизмах [51-53], но урожайность низкая. Биосинтетический путь стевиосида был полностью прояснен в 2013 году [54]. В настоящее время сообщается о ферментации и синтезе стевиозидных продуктов, главным образом rebaudioside A.,rebaudioside D и rebaudioside M [55-56], однако урожайность является низкой, поскольку искусственный путь является относительно длинным.

В 2016 году Сюй (Xu)В то же время- эл. - привет.[57]сообщили о переносе глюкуроновой кислоты UDP-glucuronic GuUGAT (принадлежащей к семейству UGT73) из лакрицы, которая катализирует двухступенчатую глюкуроновую кислоту гликозилацией гликироновой кислоты в гликироновую кислоту, тем самым раскрывая полный путь биосинтеза гликироновой кислоты. Профессор ли чунь' исследовательская группа s [58]использовала в качестве основы модифицированную бактерию, производящую глицирризовую кислоту, и ввела ген глицезилтрансферазы UGT1A3 человека, ген удг-глюкозы UGDH (Hs) человека и ген UGDH (Ec) эшеричии коли для получения рекомбинатной бактерии, производящей глицирризовую кислоту. Из-за позднего проясненияБиосинтетическая тропа могросайда и длинная тропа, исследования синтетической биологии м5 ограничены.

3.1 отбор и оптимизация элементов шасси

Шасси клетки являются фабриками для синтеза натуральных продуктов. Выбор шасси-клеток со зрелыми операционными системами и генетической стабильностью является основой для эффективного производства натуральных продуктов. Модельные микроорганизмы EscherichiA/данные отсутствуют.coli и - сачаромицисОбщее состояние здоровьячасто используются в качестве шасси. - сачаромицисcerevisiae обладает уникальными преимуществами в исследовании гетерологического синтеза сложных натуральных продуктов, таких как м5: эндогенный путь мва и путь эргостерола синтеза может устойчиво обеспечивать прекурсоры IPP, DMAPP и 2,2 - эпоксический сквалин [59-60], а полная мембранная система и постконвертационная модификация способствуют активному выражению циклозы и CYP450. 2,3- эпоксисквален является общим прекурсором синтеза тритерпеноидов и стерольных скелетов в растениях [61]. Однако в биосинтезе подсластителей предшественником для синтеза скелета является 2,3;22,23- диэпоксисквален. Эндогенная эпоксидаза сквалена (ERG1) в - сачаромицисcerevisiae может окислять 2,3- эпоксисквалена до 2,3;22,23- бисэпоксисквалена [32,62], что означает, что Saccharomyces cerevisiae ERG1 может заменить SgSQE.

Большая часть 2,3- эпоксисквалена в клетках Saccharomyces cerevisiae поступает в путь синтеза эргостерола через ланостерол синтазу (ERG7) [63], конкурируя за метаболический поток в могросиде преобразования. Штамм Saccharomyces cerevisiae GIL77 аккумулирует высокие концентрации 2,3- эпоксисквалена из-за отсутствия ERG7 [64]и часто используется в качестве шасси-клетки для проверки функции ферментов, связанных с могрозидным синтезом. С постоянным развитием биологических исследований по синтезу тритерпене сапонина постепенно совершенствуются стратегии оптимизации Saccharomyces cerevisiae для накопления больших количеств 2,3- эпоксисквалена. В основном следующие: 1. Чрезмерная сжатие генов, связанных с синтезом терпеня в пути движения мва [65 — 66]; 2. Ингибирование синтазы эргостерола с использованием ингибитора R0 48-8072 или системы CRISPR/dCas9 для ингибирования экспрессии ERG7 [32,63], понижения регуляции ветви синтеза эргостерола; 3. Использование гена мутанта UPC2 -1 глобального коэффициента транскрипции UPC2 для прямого или косвенного повышения эффективности транскрипции генов, связанных с два [67].

3.2 клонирование и выражение ключевых ферментов

Для достижения синтеза de - Новый годM5 в микробных клетках ключевые гены фермента должны быть гетерологически собраны. Таким образом, клонирование генов фермента обеспечит части для гетерологической сборки, а гетерологическое выражение ферментов заложит основу для функциональных исследований. Ключевые ферменты, которые были клонированы и выражены до сих пор являются SQE, cd, эф, CYP450 и гликозилтрансферазы.

3.2.1 эпоксидаза сквалена

Эпоксидаза сквалена выполняет двойную эпоксидацию сквалена, о которой сообщалось во многих системах синтазы тритерпеноидов [68-70], и функционально выраженная эпоксидаза сквалена растений может одновременно производить моноокисляемый сквален и диокисляемый сквален [62,71]. В 2018 году чжао хуан и др. Поскольку N-termini белковых последовательностей, закодированных SgSQEs, имеют трансмембранные домены, они существуют как неактивные включи, выраженные в прокариотах, и фермент активности не может быть проверена. Молекулярное стыкование протеинового субстрата указывает на то, что SgSQEs могут взаимодействовать с лиганом 2,3- эпоксисквален для формирования водородных связей, и предполагается, что они могут выполнять функцию генерации бисэпоксисквалена. Позднее ItkВ случае необходимостиВ то же время- эл. - привет.[32] смоделировали белок SgSQE и показали, что наличие первого эпоксида не препятствует стыковыванию второй эпохи, что указывает на то, что SgSQE может подвергаться двойной эпоксидной реакции.

3.2.2 синтаза Cucurbitadienol

2,3- эпоксисквален образуется путем протонирования, циклизации, перегруппировки и депротонирования под катализатором различных типов оксидоскваленовой циклоразы (оск), образующей скелет фитостеролов и тритерпенов [73]. Поэтому существует конкуренция между различными видами псок. Как член семейства OSC, C,C,C,cd является ключевым циклоназом в синтезе могрозидов. Его выражение и активность влияют на метаболический поток преобразования 2,3- эпоксисквалена в могросайд, который определяет выход могросайдов.

1. ДаиВ то же время- эл. - привет.[74]определили SGCD с помощью RNA/данные отсутствуют.sequ(RNA-seq) и цифрового профилирования экспрессий генов (DGE) анализа Лу хан го. CDNA/данные отсутствуют.составляет 2800 бп в длину и содержит орф 2280 бп, кодируя белок с 759 аминокислотами с прогнозируемым молекулярным весом 84,4 кда. Функция циклизации SGCD была впоследствии проверена с помощью дрожжевого штамма GIL77, который может циклизировать 2,3- эпоксисквален до cucurbitadienol. Это, кажется, несовместимо с SGCD в биосинтистическом пути Mogroside велосипедистов 2,3;22,23- диэпоксисквален для генерации 24,25- эпоксисквален-эпоксисквален (рис. 2). На самом деле, ItkВ случае необходимостии др. [32] использовали Saccharomyces cerevisiae и преобразовал табак никотиана табак L для функционального анализа SGCD и пришли к выводу, что SGCD может не только циклизировать 2,3;22,23- бисэпоксисквален, но и циклировать 2,3- эпоксисквален для производства сквален, хотя последний не участвует в синтезе Mogroside. Дальнейшие исследования показали, что для 2,3- эпоксисквалена циклизация SGCD предшествует эпоксификации ERG1, в результате чего SGCD в основном демонстрируют функцию циклизации 2,3- эпоксисквалена.

3.2.3 CYP450 и гликозилтрансферазы

CYP450 — это суперсемейство генов растений, играющих ключевую роль в окислении природных продуктов, таких как терпены, флавоноиды, алкалоиды и лигнин [75]. Со строгой спецификой субстрата и низким сходством последовательности. Гликозилтрансферазы могут быть членами второго по величине семейства ферментов растений 1ugt, которые передают различные сахара или сахара в различные рецепторы, и требуют различных гликозилтрансферазы [76]. Поэтому относительно сложно эффективно обнаружить и клонировать гены CYP450 и гликозилтрансферазы, которые катализируют биосинтез конкретных метаболитов. Танг и др. [77]выявили и проверили семь CYP450s и пять UDPGs в качестве потенциальных генов, ответственных за синтез M5 на основе комбинированного применения Рна-секи D- джи,в сочетании с быстрым накоплением M5 после 50-70 d после цветения. Этот метод создал эффективный способ выявления потенциальных генов, ответственных за биосинтез новых вторичных метаболитов в немодельных растений.

Чжан и др. [50] выявили многофункциональный цитохром P450 фермент (CYP87D18) и aГликозилтрансферазе (UGT74AC1) в ло хан го- да. Анализ ферментной активности In vitro показал, что CYP87D18 отвечает за каталитическое окисление положения C11 фуростанола до формы 11- оксофуростанола и 11- гидроксифуростанола; UGT74AC1 может специально передать глюкозу в положение C3 логанинола, чтобы сформировать логанин IE. Почти в то же время иткин и др. [32] выявили 191 кип и 131 уг в момордике гросвенори и предварительно проверили 40 кип и 100 уг, которые были выражены в развитии плодов. Функциональная проверка была проведена в дрожжах и эшерихия коли, соответственно. Результаты показали, что CYP87D18 (CYP102801) катализирует гидроксилирование позиции C11 транс - 2425 - дигидроксихолеста -4-en-3-one для производства росмолиевой кислоты; UGT74-345-2, UGT75-281-2, UGT720-269-1 и UGT720-269-4 отвечают за первичную гликозилирование на позиции C3, из которых UGT720-269-1 является также единственным ферментом, ответственным за первичную гликозилирование на позиции C24. UGT720-269-1, UGT94-289-1, UGT94-289-2 и UGT94-289-3 отвечают за разветвленную глюкозу цепей с3 и C24.

3.3 биосинтез cucurbitadienol

Ли шуй-лиань и др. [78]использовали тритерпеноидное соединение, полученное в лаборатории, для гетерогенного экспрессии и ферментации клонированных SGCD в дрожжевой шаговой деформации WD-2091 (FP- с,SQ- с,SQE и MVA пути были пережаты и регулировались), клонированные SGCD были гетерогенно выражены и ферментированы, а урожайность cucurbitadienol составила 27,44 мг/л. Ген cd был далее переведен из высококопированной плазмид pRS425 в низкокопировальную плазмид pRS313 для регулирования экспрессии гена cd, а также был получен 313-SL-CB Saccharomyces cerevisiae 1. Ячейкаfactory, с 202,07% увеличением производства cucurbitadienol. Высокая плотность ферментации достигла 1724,10 мг/л, что в настоящее время является самой высокой урожайностью микробного синтеза cucurbitadienol. Это исследование заложило основу для создания эффективной клеточной фабрики по производству тетрациклических тритерпеноидов типа cucurbit.

Строительство завода по производству микробных клеток для M5 может быть связано с передачей первоначального биосинтеза или реконструкцией и строительством всего метаболического пути. Хотя доказано, что cucurbitadienol не является скелетом для синтеза логанина, инженерная бактерия 313-SL-CB, которая производит высокие уровни cucurbitadienol, может быть использована в качестве шасси клетки. Ген оксидазы может быть рекомбинирован для преобразования cucurbitadienol в 24,25- эпоксиcucurbitadienol, а затем катализирован эф, CYP450 и гликозилтрансферазы для производства M5 (рис. 3).

4 обсуждение и перспективы

С улучшением людей#39; санитарное просвещение, потребление и др#- 39; Погони за едой больше не ограничиваются удовлетворением вкусовых рецепторов, но также уделяют все больше внимания ее здоровью и функциональности, что привело к «взрывному» росту спроса на натуральные несахарные подсластители [30]. В частности,M5, Один из world's сильнейшие натуральные подсластители, не только встречается с публикой#39;s спрос в качестве натурального несахарного подсластителя, но также служит в качестве заменителя сахарозы для диабетиков и ожиренных людей из-за его лекарственных свойств [79]. Спрос на M5 постепенно растет во всем мире [80], и методы экстракции растений больше не могут удовлетворять рыночный спрос. Синтетическая биология обладает уникальными преимуществами в эффективном и устойчивом извлечении натуральных растительных продуктов и применяется при синтезе различных натуральных продуктов [81 — 83]. Поэтому широкомасштабное производство м5 с использованием синтетической биологии является неизбежной тенденцией. В настоящее время полностью прояснен биосинтетический путь M5, а ключевые ферменты клонированы и функционально проверены, однако исследования по микробному производству все еще отсутствуют.

Основываясь на принципах синтетической биологии, мы предлагаем две стратегии для строительства клеточного завода M5: во-первых, как упоминалось выше (рис. 3), переход на M5 может быть достигнут на основе высокопроизводительной инженерии производства огуретадиенола бактерии 329 - l- cb, что является наиболее удобным способом; Во-вторых, пять генов фермента, задействованных в преобразовании 2,3;22,23- диоксо-сквалена в M5 (рис. 2), могут быть рекомбинированы в дрожжевые клетки для достижения синтеза de novo. Существует еще много трудностей в реализации микробного производства активных молекул м5 с использованием этих двух стратегий: во-первых, фермента, который катализатор окисления сквалена до 24,25- эпоксисквалена в первой стратегии не был обнаружен, и вторая стратегия, yeast's эндогенный ERG1, не может обеспечить достаточным 2,2;22,23- бисепоксискволен для SGCD. День рождения.Во-вторых, биосинтезионные пути м5 включают в себя много ферментов и промежуточных веществ, метаболический процесс является сложным, и трудно достичь эффективного и скоординированного выражения экзогенных генов, интегрированных в одну микробную клетку, что также вызывает большее метаболическое давление на организм. Наконец, SGC- д,UGT720-269-1 и UGT94-289-3 являются неспецифическими ферментами, которые могут действовать на различных субстратах, образуя различные продукты, и порядок и направление катализа в шасси клетки трудно контролировать.

Для решения этих проблем мы предлагаем следующие стратегии: выявление и проверка окислителей, которые катализируют производство 2425 - эпоксилюлюидов из люпилюлов и квадратов, которые эффективно катализируют реакцию эпоксиляции; Более точно регулировать путь вниз по течению 2,3- эпоксисквалена и 2,3- эпоксисквалена в большей степени направлены на синтез могросида. В последние годы модульная технология совместного культивирования стала новой стратегией снижения клеточного напряжения и увеличения производства целевой продукции [84 — 85]. Таким образом, путь биосинтеза M5 можно разумно разделить на различные модули, и каждый модуль может быть интегрирован в конкретный штамм. Набранные штаммы могут быть интегрированы в одно пространство, а затем совместно культивировать набранные штаммы для достижения синтеза de novo M5. Структурная биология используется для анализа структуры фермента белков и понимания специфического каталитического механизма, а субстратная специфика фарнезилтрансферазы и гликозилтрансферазы повышается за счет соответствующей фермента модификации. Для достижения прямого катализа ферментов разрабатываются ключевые технологии мониторинга соединений в режиме реального времени и регулирования метаболических динамических процессов. С развитием синтетической биологии и метаболической инженерии,Масштабное производство м5, несомненно, будет реализовано.

Ссылка:

[1] 13 ч. 00 м. - суэц  - джей,  Корейская народно-демократическая республика  - т,  - зееви.  D,    В то же время  - эл. - привет.  Искусственные подсластители В случае необходимости Глюкоза (глюкоза) По борьбе с нетерпимостью По запросу: Изменения в системе   - нет, нет.   - микробиота.  - природа,   2014 год,   514(7521): 181-186.

[2] Кокоту (Япония) Мг, мг, - асимакопулос - аг, - томайдис. - нс. - привет. Искусственное дыхание (искусственное дыхание) Подсластители для подсластителей По состоянию на 31 декабря Новые загрязнители В окружающей среде:     В целях анализа     Iii. Методологии      И окружающей среде Удар с места. Анальные методы, 2012, 4(10): 3057 — 3070.

[3] Гупта п., Гупта н, - павар ап, В то же время Al. Роль С сахаром и сахаром Сахар с сахаром 3. Заменители В случае необходимости Стоматология и стоматология - карис: a  - рецензия. ISRN Dent, 2013, 2013: 519421.

[4] - брэй!  - привет. - привет. - привет, попкин. М. : м.  Питание с пищей  Сахар с сахаром и Вес тела: мы достигли кризиса в эпидемии ожирения и - диабет? : : категория: В области здравоохранения быть Черт бы тебя побрал! За счет заведения - на сахар. Диабет, 2014 год,37(4): 950 — 956.

[5] Ян ць, чжан цф, грег фу и др. Добавили потребление сахара и смертность от сердечно-сосудистых заболеваний  - взрослые люди.  Организация < < джама > >  - стажер.   - мед,  2014 год,   174(4): 516-524.

[6]  Świader - к,Wegner - к,Piotrowska A.,и др. Растения в качестве  Источник:  Соединенные Штаты америки По окружающей среде Высокая интенсивность света  Подсластители:  - обзор. - да. - J.Appl Bot - продукты питанияQual, 2019, 92: 160-171.

[7] - до свидания.   - м,   - майстер, майстер.   - к,   - да, кава.   - р.   Малокалорийные подсластители и другие заменители сахара: обзор Безопасность на рабочем месте - какие-то проблемы. Компания < < компар > > В настоящее время - продукты питания Sci-i (Sci) - продукты питания Saf, 2006, 5(2): 35-47.

[8]  (подпись) джин    В мл,    Организация < < мугурума > >    - м,    13. Мото    - м,    В то же время    Эл. 13 недель - повторное рассмотрение  3. Доза Токсичность для окружающей среды  Соединенные Штаты америки Сирайтия гросвенори 1. Выписка В случае необходимости 3. < < вистар > > Париж (Франция)  (галас) крысы. - продукты питанияПо химии и химииToxicol, 2007, 45(7): 1231-1237.

[9] - кингхорн.   - о, боже.   Канеда (Канада)   - н,   Пэк (пэк)   - ни,   В то же время   Al. Некариогенные интенсивные натуральные подсластители. Med В настоящее времяRev, 1998, 18(5): 347-360.

[10] Адеогун (Adeogun)  - о,  < < адекунле > >  A.,  3. Ашафа  - A.  Химический состав, Смертность в результате несчастных случаев и Противогрибковые средства Мероприятия в области развития Постоянный представитель российской федерации Выдержки из статьи Соединенные Штаты америки Листья и листья Соединенные Штаты америки Тауматококк. - да Даниэллиант (Бразилия) Продукты питания, переносимые - грибы. Бени-суэф Организация < < юнив > > - J. Базовый Appl Sci, 2016 год,5(4): 356-368.

[11] - гоял.  - ск,  - сэмшер,  - гоял.  - в рк.  В чем дело?  (стевия ребаудина) Био-подсластитель: a  - рецензия. По запросу Int - J. Питание Sci-i (Sci)Nutr, 2010 год,61(1): 1-10.

[12] Сингх (США)   М, д,   3. Кумари   - м,   - "пракаш"   HG,   В то же время   Al. Фитохимия и Лекарственные препараты и лекарственные препараты И важное значение Из стевии: натуральный подсластитель без калорий. Sugar Tech, 2019, 21(2): 227-234.

[13] Джин джейс, ли джей х. Фитохимические и фармакологические аспекты сирайтии гросвенория, Лу хан ко. Oripharm Exp Med, 2012, 12(4): 233-239.

[14] Чжан (Китай) Вб, вр, Песня для песни - да, День святого валентина Tryp celle hotel, В то же время - эл. - привет. Последствия для окружающей среды В могросиде  По состоянию на  С высоким содержанием жиров  - ожирение;  И безалкогольные жирные заболевания печени у мышей. Молекулы, 2018, 23(8): 1894.

[15] Мидзутани к, курамото т, тамура и др. Сладость глициретической кислоты 3-O- гранат-д-моноглюкуронид и связанные с ним гликозиды. Biotechnol Biochem, 1994, 58(3): 554 — 555.

[16] - "исбрукер"   - ра,  - бурдок,   - привет. - привет.  Риск для окружающей среды  и  Оценка уровня безопасности По состоянию на В настоящее время 1. Потребление Соединенные Штаты америки - лакрица. Корневой (глицирриза) Sp., его экстракт и порошок в качестве пищевого ингредиента, с акцентом на фармакологии и токсикологии     Соединенные Штаты америки    - глицирризин.     Regul Toxicol Pharmacol, 2006, 46(3): 167-192.

[17] - дюбуа.  GE,   Пракаш и.некалорийный  Сладости, сладость моя  - модуляторы,  и  - подсластитель.  - усилители. Annu В настоящее времяFood Sci-i (Sci)Technol, 2012, 3: 353 — 380.

[18] - уильямсон. Эм, лю хм, иззо аа. Тенденции в области использования, фармакологии и клинического применения новых лекарственных средств растительного происхождения. Br - J.фармакол, 2020 год,177(6): 1227-1240.

[19] - мацумото.  - к, В провинции касаи - р, - отани. K,   В то же время - эл. - привет. По делам несовершеннолетних Кукурбан-гликозиды   Из российской федерации   Фрукты и фрукты   Соединенные Штаты америки   13. Сирайтия Гросвенори (Cucurbitaceae). Хем фарм булл, 1990, 38(7): 2030 — 2032.

[20] Лю (Liu)  - т,  13. Ван  X- г,XH,  1. Ли  C,   В то же время  - эл. - привет.  Исследования по теме:  По состоянию на  Антитостические, ожидаемые и антиспазмодические эффекты сапонина V от момордики гросвенори. Чин фарм - джей,2007, 42(20): 1534-1536, 1590.

[21] Лю (Liu) C,  1. Даи В общем, да. 29. Доу Д-р кью,  В то же время - эл. - привет. A  По окружающей среде  Подсластитель для пищевых продуктов с  Антиподжелудочной железы  - Рак; - в собственность. Oncogenesis, 2016, 5(4): e217.

[22] - такасаки.  - м,   Организация < < коносима > >  - т,  - "мурата"   - Y,  В то же время  - эл. - привет. - антикарциноген  Деятельность организации объединенных наций  Соединенные Штаты америки  По окружающей среде  - подсластители, Кукурбитан гликозиды, из момордики гросвенори. Рак летт, 2003, 198(1): 37 — 42.

[23] Чэнь (Китай) Ж/д, 13. Ван - джей, Qi (Qi) - СИ, В то же время - эл. - привет. В настоящее время Антиоксидантная деятельность И природных ресурсов - подсластители, - могросайды, От плодов и фруктов Из провинции сирайтия - гросвенори. По запросу Int - J. Food  Sci-i (Sci) НТР, 2007, 58(7): 548 — 556.

[24] Чжоу - Y,чжэн - Y,эберсоул дж., и др. Секреция инсулина стимулирует эффект mogroside V и фруктовый экстракт Luo В чем дело?Kuo (13. Сирайтияgrosvenori Swingle). Acta Pharm Sin, 2009, 44(11): 1252-1257.

[25] В ту  Д-р кью,  - m  X- джей,XJ,  Чжао чжао чжао  - г,  В то же время  - эл. - привет.  1. Клонирование  и Выражение SgCYP450-4 от Сирайтия гросвенория.Acta Pharm SВ случае необходимостиB, 2016, 6(6): 614 — 622.

[26] Хк макапугай, НДП нанаяккара, суджарто дд и др.    Высокая производительность    В жидком состоянии    Хроматографический анализ основного сладкого принципа к ло хан ко фруктам. - J.Agric Food - чем могу помочь?1985, 33(3): 348-350.

[27] Рао (Россия)  - старший,  < < равишанкар > >  - привет. - привет.  На территории предприятия  cell   Культура: химическая   Предприятия и предприятия   Соединенные Штаты америки   Вторичные продукты питания   Метаболиты в организме. Biotechnol Adv, 2002, 20(2): 101-153.

[28]  А. дударева   - н,   - деллапенна.   D.    На территории предприятия   Метаболическая инженерия: В будущем Перспективы на будущее и 3. Задачи. - на курреОрганизация < < опин > >Биотехнол,2013, 24(2): 226 — 228.

[29]  - да, да. - Эм-джей, Париж (Франция) - г, - класен? - да. - джей, В то же время - эл. - привет. Синтетическая биология По адресу: Доступ к интернету и Расширение сети интернет Природа и природа Химическое разнообразие. Нат (Nat)Rev - микробиол,2016, 14(3): 135-149.

[30] - Филипп (Франция)  - RN,  Д/д  - Мэй!  - м,  Андерсон (США)  J,   В то же время  Al. Биотехнологическое производство натуральных безкалорийных подсластителей.   - на курре   OpВ случае необходимости   Биотехнол,   2014 год,   26: 155-161.

[31] Кэмерон де, башор СИ джей, коллинз джей джей. Краткая история проекта Синтетические продукты (синтетические продукты)  - биология. Нат (Nat)  Rev   Microbiol,   2014, 12(5): 381 — 390.

[32]  Иткин м, давидович-риканати р, коэн с и др. Биосинтетические пути несахарного подсластителя высокой интенсивности mogroside  V  Из российской федерации 13. Сирайтия - гросвенори. Организация < < за сотрудничество > >   Организация < < натл > >   Организация < < асад > >    Sci    Соединенные Штаты америки,    2016,     113(47): E7619-E7628.

[33]  1. Ли М, д, Чжан (Китай) Отдел кадров.  Ii. Исследования и А. виды применения  Соединенные Штаты америки Китайская медицина  Луоханго-а  По специальным политическим вопросам  Местные органы власти  Товар (по запросу)  - в гуанси.   - гихайя,   2000 год,   20(3):   270-276.

[34] В чем дело?  - ч.  - интенсивный процесс  - подсластитель.  Из российской федерации  Ос (Lo)  Han   Куо (момордика гросвенори). - эксперимент, 1975 год, 31(5): 533-534.

[35] Касай р, ни рл, наши к и др. Сладкий кукурбитан гликозиды Из российской федерации Фрукты и фрукты О сирайтии сименсис (чи-зи Лу-хан-го), a  Китайский язык (english) Народная медицина. Народная медицина. Agric 1. Биол- чем могу помочь?1989, 53(12): 3347-3349.

[36] Организация < < юкия > > - м, Организация < < акихиса > > - т, 1. Токуда - г, В то же время - эл. - привет. Ингибиторные эффекты cucurbitane гликозидов и других тритерпеноидов от плодов Momordica grosvenori на эпштейн-барр  В случае вируса  В первой половине дня  Антиген, вызванный - опухоль. - нет. Промоутер 12- о-тетрадеканойлфорбол -13- ацетат. - J.Agric Food Chem, 2002, 50(23): 6710-6715.

[37] Ван л, ли лк, фу ЙКС и др. Разделение, синтез и цитотоксичность ряда mogrol производных. - J.Asian Nat Prod Res, 2019: 1-15.

[38] Мурата и ё сикава с, судзуки я и др. Характеристики подсластия   Соединенные Штаты америки  В настоящее время   - тритерпене.   - гликозиды.   В городе сирайтия - гросвенори. J  В настоящее время ПГС (ГСС) Food  Sci  Технол, 2006, 53(10): 527-533.

[39] Такэмото т, арихара с, накаджима т и др. Исследования по вопросу о Состав участников - из капусты - момордика. Я-да. По состоянию на - о, боже. - в принципе. Якугаку (якугаку) - засси,  1983 год, 103(11): 1151-1154.

[40] Такэмото т, арихара с, накаджима т и др. Исследования составляющих момордики fructus. II. Положение в области прав человека Структура организации объединенных наций - сапогенин.  Якугаку (якугаку)  - засси,  1983 год,  103(11): 1155-1166.

[41] Такэмото т, арихара с, накаджима т и др. Исследования по вопросу о   Состав участников   Соединенные Штаты америки   - фрукт (fructus)   - момордика.   III. Положение в области прав человека Ii. Структура Соединенные Штаты америки - могросайды. Якугаку (якугаку) - засси,  1983, 103(11): 1167-1173.

[42] Ли дп, икеда т, хуан ил и др. Сезонные вариации могрозидов в ло хан ко (сирайтия гросвенори) фруктов. J нат мед, 2007, 61(3): 307 — 312.

[43] Иткин м, хайниг у, цфадия о, и др. Биосинтез антинутриционного действия  1. Алкалоиды  В случае необходимости  D. солановые вещества  А. сельскохозяйственные культуры  В качестве посредника   По запросу:   Группы по группам   - гены.   - наука,   2013, 341(6142): 175 — 179.

[44] - гаррисон.  Дм. : дм.  В настоящее время 2. Биосинтез  Соединенные Штаты америки Тритерпеноиды, стероиды и каротеноиды. Nat Prod Rep, 1990, 7(6): 459-484.

[45] Ланге (Lange) - бм, - ах ками. A.  3. Метаболизм Инженерно-технические работы 1. Вид растений       - монографии,       - сескитерпенес        И ток дитерпенса 1. Статус и В будущем - о возможностях. Завод биотехнол J, 2013, 11(2): 169-196.

[46] - добрый вечер.  F, F,   - добрый день.  A,    В чем дело?  - б.   Биогенез, молекулярный   Правила и положения    и    3. Функция    Соединенные Штаты америки   Растительные изопреноиды. Prog Lipid Res, 2005, 44(6): 357-429.

[47] Ляо п, хеммерлин а, бах тиджей и др. Потенциал мевалонатного пути для увеличения производства изопреноидов. Biotechnol Adv, 2016, 34(5): 697-713.

[48] Лоле (Laule) - о, - фурхольц. A,  - чанг. - хш, В то же время - эл. - привет. Перекресток между   - цитозолик   и   Пластицид (пластицит)   Iii. Пути развития   - изопреноидной кислоты  2. Биосинтез  В случае необходимости Арабидопсис (арабидопсис)  - талиана. - привет. Proc Natl Acad Sci USA, 2003, 100(11): 6866-6871.

[49] 13. Шибуя - м, адачи - с, Эбизука и я. Cucurbitadienol synthase,    Первый выделенный фермент для биосинтеза cucurbitacВ случае необходимости— это отдельный фермент от циклоартенола Синхронизация функций для Фитостерол (фитостерин) - биосинтез. Тетраэдр, 2004, 60(33): 6995-7003.

[50]  Чжан (Китай) - сп, 1. Даи В общем, да. Париж (Франция) - джей джи, В то же время - эл. - привет. 5. Окисление Из кукурбадиенола  Каталитические нейтрализаторы  По запросу:  CYP87D18   В случае необходимости  Биосинтез могросидов с сирайтии гросвенории. Физиол растительных клеток, 2016, 57(5): 1000-1007.

[51] В чем дело?   - джей-эйч,   - вайкманн.   - джей эл.   - кодури.   Республика Корея,   В то же время   Al. Выражение мнения Соединенные Штаты америки Синтетические продукты (синтетические продукты) - тхауматин Гены и гены В случае необходимости - дрожжи. Биохимия, 1988, 27(14): 5101-5107.

[52] - даниэль. - привет. S,  Меллит х, фаус I и др. Снова складываю сладкую дегустацию Содержание белка в крови - тхауматин II. Положение в области прав человека Из российской федерации Нерастворимое включение И других органов  В обобщенном виде in  Организация < < эшерихия > > - коли. - коли? Food Chem, 2000, 71(1): 105-110.

[53] - масуда.    - т,   - китабатаке    - н.   Ii. События    В области биотехнологий Производство и продажа  Соединенные Штаты америки - с удовольствием.  - белки. J Biosci Bioeng, 2006, 102(5): 375-389.

[54] Сеунен с, гюнс СИ. Стевиол гликозиды: химическое разнообразие, Обмен веществ, и - функция. J  Nat  Prod, 2013, 76(6): 1201 — 1228.

[55] 13. Ван  - JF,  1. Ли   - сай,  Сионг (Китай)  - ZQ,   В то же время  - эл. - привет.   Путь минная интеграция критических ферментов для биосинтеза de novo steviolglycosides sweetener в Escherichia coli. Мобильный Res, 2016, 26(2): 258-261.

[56] В чем дело? K,  Карлсен (Carlsen) S,  Семмлер а, В то же время - эл. - привет. Производство микробов  Соединенные Штаты америки Следующее поколение:  В чем дело?  - подсластители. Факт микробных клеток, 2016, 15: 207.

[57]  Сюй (Xu)   - джи джей,   Цаи (Cai)   Ч, ч, ч.   Гао (Gao)   Ч, ч, ч.   В то же время   - эл. - привет.   A    Новый глюкуронилтрансферазы    В настоящее время    an     Беспрецедентная способность к работе      По адресу:      Каталитические нейтрализаторы      Непрерывные операции (продолжение)      Двухступенчатая глюкурониляция Соединенные Штаты америки - глициретинический - кислота; По адресу: Выход глициризина. Новый Phytol, 2016, 212(1): 123-135.

[58]  1. Ли C,  Чжао чжао чжао - эй джей, По запросу: XD, XD,  В то же время - эл. - привет. 3. Применение  - из гликозила Трансфер из аэропорта в аэропорт in  - глицирризик - кислота; Синтез: CN, 110106222. 2019-08-09.

[59] Лю джей ди, чжан рг, ду су и др. Перепроизводство гераниола    По запросу:    Усиленная система управления    Информация о прекурсоре    3. Поставки    В сакчаромициях  - церебрысия.  J   Биотехнол,  2013, 168(4): 446 — 451.

[60] 6. Огюстен  - джей м.  Кузина (Китай)  - V,  - привет, андерсен.  - сб,  В то же время  Al. Молекулярная структура Мероприятия, биосинтез и Iii. Эволюция - тритерпеноида - сапонины. Фитохимия, 2011, 72(6): 435-457.

[61] Го (фр.)  Ч-ч,  1. Ли  - рф,  Лю (Liu)   - сб,   В то же время   - эл. - привет.  Молекулярная характеристика,   Выражение:   и   Правила и положения   Генов эпоксидазы гиностеммы пентафиллум сквален

1. Физиология растений Biochem, 2016, 109: 230 — 239.

[62] Расбери ДЖМ, шан х, леклер рж и др. Арабидопсис талиана - сквален. Эпоксидаза (эпоксидаза) 1  В настоящее время По вопросам существа Для развития корнеплодов и семян. J 1. БиолChem, 2007, 282(23): 17002-17013.

[63] у Y,  - чанг. ПК, у - г, В то же время - эл. - привет. В целях развития Амирин синтазы   для   В целях повышения эффективности   У-амирин   Ii. Обобщение   В области машиностроения Saccharomyces  - церебрысия. Организация < < акг > > Synth - биол,2018, 7(10): 2391-2402.

[64]  13. Ван  - ж, - да. - да. - т, Han  - г, В то же время - эл. - привет. 1. Клонирование И определение характеристик  Соединенные Штаты америки - оксидоскален  3. Циклоны  От kalanche daigremontiana: 1. Ферменты В целях стимулирования  10  Изменение структуры организации  В этом разделе На пути к успеху  - фриделин. И другие вопросы - тритерпеноиды. J  Biol  Chem,  2010,  285(39): 29703-29712.

[65] Яо (фр.) - Z, Чжоу пп, Су бм и др. Увеличение производства изопрена По запросу: По реконструкции и восстановлению И метаболических процессов Баланс между показателями    Укрепление потенциала организации объединенных наций    Информация о прекурсоре    3. Поставки    И более совершенные   - изопрену.   Синхронизация функций   in    Сакчаромициес цевисии. ACS Synth Biol, 2018, 7(9): 2308-2316.

[66] Paramasivan K, Mutturi S. регенерация надph в сочетании с редуктазой HMG-CoA повышает сквален Ii. Обобщение in  Saccharomyces  - церебрысия. J Agric Food Chem, 2017, 65(37): 816-8170.

[67] Ro (*) DK, Paradise E- м,OuellВ то же времяM, и др. Производство противомалярийных лекарственных средств-прекурсоров артемизиновой кислоты в искусственных дрожжах. Природа, 2006, 440(7086): 940-943.

[68] Нельсон джа, стекбек старший, спенсер та. Биосинтез (биосинтез)    24,      25- эпоксихолестерин     Из российской федерации     Сквален 2,3;22,23- диоксид углерода.  J   Biol   Chem,    1981 год,  256(3): 1067-1068.

[69] - в буто.  - о,  В чем дело?  - дх,  - шубер.  - ф.  Преимущественное использование велосипедов Соединенные Штаты америки 2,3(S):22(S),23- диоксидоскален Материал, подготовленный млекопитающими  2,3- окислитель-ланостерол  - киклаз. - биохим.  Биофис (биофис)  Res   В общем, до свидания.   1992 год,  188(2): 898-904.

[70] - годио!  - RP,  - фусес.  - р,  В чем дело?  - джей ф.  A   Скволеновая эпоксидаза В настоящее время Участие в проекте in  2. Биосинтез И то, и другое Антиопухолевое соединение клаварической кислоты и стеролов в базидиомиете н. - сублатериций. Chem  Biol,  2007, 14(12): 1334-1346.

[71] < < судзуки > > - г, 10 ч. 00 м. - ахнин - L, Xu  - р, В то же время - эл. - привет. A  Подход на основе геномики to  В настоящее время В первой половине дня На всех этапах - из тритерпена Биосинтез сапонина в Medicago truncatula. Завод J, 2002, 32(6): 1033-1048.

[72] Чжао чжао чжао  - г,  Guo   J,   Г-н тан  - Q,  В то же время  - эл. - привет.  1. Клонирование  И выражения мнений 3. Анализ Соединенные Штаты америки - сквален.  Эпоксидаза (эпоксидаза) Гены сирайтии гросвенории. Китай J Chin Mater Med, 2018, 43(16): 3255-3262

[73] У у у - тз, - чанг. Ч, лю йт, В то же время Al. Saccharomyces cerevisiae    Оксидоскален-ланостерол    Велосипедная разгрузка:    Химия-биология  По междисциплинарным вопросам  Исследования по теме:  Соединенные Штаты америки  - протеин...    Структурно-функциональная реакция    Отношения между механизмами. Химический рек, 2008, 8(5): 302-325.

[74]  Dai   В общем, да.  Лю СИ, чжу  - Эм,   et   al.    Определение функциональных характеристик  Соединенные Штаты америки cucurbitadienol   Синхронизация функций  И тритерпене      гликозилтрансферазы      Участие в проекте      В области биосинтеза     Соединенные Штаты америки    1. Могросайды     Из российской федерации     Siraitia grosvenorii.    На территории предприятия   1. Ячейка   - телосложение,   2015 год,   56(6): 1172-1182.

[75] Han  - джей, Ким ким ким - HJ, - вон там. - да, да. et  al.  В настоящее время Организация < < сэт > > P450 фермент  - CYP716A47  3. Катализаторы  В настоящее время  1. Формирование вооруженных сил  Из протоанаксадиола из даммаренедиола-ii во время женьшеня 2. Биосинтез in  Организация < < панакс > > Женьшень и женьшень. Физиология растительных клеток, 2011, 52(12): 2062 — 2073.

[76] - капути!  - L,  - малной.  M,   - горемыкин.  - V,  et   al.   Общегеномная фитогенетическая реконструкция семьи

1 udp-гликозилтрансферазы показали расширение семьи во время адаптации растений к жизни на земле. Завод J, 2012, 69(6): 1030-1042.

[77]  Танг Q, ма XJ, мо см и др. Эффективный подход к решению     Поиск по сайту     Siraitia      grosvenorii      Биосинтез тритерпене Гены и гены По запросу: RNA-seq  и В цифровом формате Анализ экспрессии генов. BMC Genomics, 2011, 12: 343.

[78]  Ли сл, ван д, лю и др. Изучение гетерологического эффективного синтеза cucurbitadienol. Китай J Chin Mater Med, 2017, 42(17): 3326-3331.  

[79] Xia (Xia)  Y,   Ривера-хугет  - я,  - хьюз.  - биг,  et   Al. Изоляция Соединенные Штаты америки В настоящее время - с удовольствием. Компоненты и компоненты Из российской федерации Сирайтия гросвенория. Food Chem, 2008, 107(3): 1022-1028.

[80] 13. Ван  - L,  Париж (Франция) - ZM,  Лу (Lu) * FL,  et   al.   Кукурбитан гликосайд     Полученный в результате      Из российской федерации     mogroside       Ii: структура-вкус  - отношения,  Антиоксидант (антиоксидант)  Деятельность, и   Острая токсичность   - токсичность.   Молекулы,   2014,     19(8): 12676-12689.

[81] Лю (Liu) - LQ, Лю (Liu) H,  Чжан (Китай) Ч, ч, ч. et  al.  Инженерно-технические работы - биосинтез.  Соединенные Штаты америки  - кофеин.   - кислота;  in   Saccharomyces cerevisiae с гетерологическими комбинациями фермента. Инжиниринг, 2019, 5(2): 287 — 295.

[82] Шринивасан п., - смолке. CD. Проектирование Микробный биосинтез Ii. Платформа для de  novo  Производство и продажа - тропановых алкалоидов. Nat Commun, 2019, 10: 3634.

[83] Чэнь хф, чжу СИ, чжу мз и др. Высокое производство валенсины in  Saccharomyces  cerevisiae  Через метаболическую инженерию. Факт микробных клеток, 2019 год, 18: 195.

[84] Ван рф, чжао ши, ван цт и др. Последние достижения в области Модульная система управления 2. Совместная культура Инженерно-технические работы для Ii. Обобщение И природных ресурсов - продукты питания. Curr  Организация < < опин > > Biotechnol,  2020,  62: 65-71.

[85] 1. Ли  - ж,  13. Ван  XN, XN,  Чжан (Китай)  Отдел кадров.  B. обеспечение сбалансированности  Нелинейный биосинтез росмариновой кислоты по модульной схеме 2. Совместная культура - инженерное дело. Организация < < метаб > > Английский язык, 2019, 54: 1-11.