Как получить CQ10 Ubiquinol путем ферментации?

CQ10, также известный как убихинон, с относительным молекулярным весом 863,4, является жирорастворимым хиноном, химически известным как 2'3- диметоксий -5- метил -6- декалоизопентенилбензохинон.Код 10Представляет собой желтый или оранжево-желтый кристаллический порошок при комнатной температуре. CoQ10 - желтый или оранжево-желтый кристаллический порошок при комнатной температуре, с температурой плавления 49 гравационной, без запаха и вкуса, и нерастворимый в воде. Структурная формула выглядит следующим образом.

В 1957 году кран очистил CoQ10 от миокарда крупного вина и измерил его химическую структуру, подтвердив, что CoQ10 играет важную роль как редокс-носитель в дыхательной цепи млекопитающих, как липидорастворимый электрон-носитель в дыхательной цепи, как элемент, генерирующий клеточную энергию, и как природный активатор и антиоксидант, участвующий в клеточном метаболизме. Таким образом, CoQ10 имеет широкий спектр применения в клинической и медицинской помощи, косметике, уходе за кожей и т.д., и все больше подчеркивается людьми [1].

В настоящее время существуют три метода получения CoQ10: экстракция тканей растений и животных, химический синтез и микробная ферментация. Метод экстракции тканей животных и растений в основном относится к экстракции продуктов из органов животных или некоторых растительных тканей. Юань йи [2] использовал этот метод для извлечения CoQ10 из свиных сердец, но урожайность свежих свиных сердец составила всего 75 мг/кг, а из-за ограниченности источника сырья себестоимость продукции была высокой и дорогостоящей, а масштабное производство было ограничено.

Метод химического синтеза характеризуется тяжелыми условиями и многочисленными этапами. В отличие от этого,producing CoQ10 by fermentation of microorganisms is a promising method, which is more economical, easy to produce По состоянию наa large scale, easy to isolate and purify, and easy to be absorbed by the human body.

1. Микробные штаммы, вызывающие CoQ10

Содержание CoQ10 значительно варьируется в зависимости от штаммов, и в прилагаемой таблице показаны микробные штаммы с относительно высоким содержанием CoQ10, среди которых содержание CoQ10 в родобактерской сварикусе и родобактерской сварикусе является относительно высоким. Эти фотосинтезирующие бактерии относятся к ордену родобактерий, который подразделяется на подзаказы родобактерий и зеленого тиобактерия, и первый подразделяется на семьи родобактериологических и родобактериологических. Первый подразделяется на родобактерные спаероиды и родобактерные спаероиды. Родобактерские sphaeroides и родобактерные podocarpus относятся к семейству родобактерических, поэтому родобактерские sphaeroides являются одним из идеальных штаммов для производства кок10.

Таблица штаммов, вызывающих coq10 [4]

2. Штамм мутагенеза и строительство инженерных бактерий

Как правило, дикие штаммы имеют низкую урожайность, и их производственные мощности далеко не удовлетворяют потребности промышленного производства, поэтому необходимо генетически модифицировать их путем использования методов мутации и генной инженерии.

2.1 селекция для метаболического регулирования штаммов

Путь микробного синтеза CoQ10 в основном разделен на два направления: синтез ароматического кольца и биосинтез изосферной боковой цепи. Поэтому метаболическое регулирование селекции может осуществляться по биосинтезу ароматического кольца и изосферной боковой цепи.

2.1.1 размножение мутантов, испытывающих нехватку питательных веществ

В соответствии с принципом регулирования метаболических процессов можно увеличить производство кок10 путем ослабления или перекрытия путей разведения кок10 [5] (например, путей метаболического синтеза ароматических соединений, содержащих бензольные кольца, такие как тирозин, фенилаланин и триптофан, которые имеют общие прекурсоры с синтезом кок10). Лиу кешань [6] в качестве исходного штамма использовал азовактерий тумефациенс и проверил штамм мутантов с двойными дефектами тирозина и апартиковой кислоты путем двойного мутагенеза с помощью нитросогуанидина и диэтилсульфата. Производство штамма мутантов CoQ10 увеличилось на 91,28% по сравнению с исходным штаммом.

Чжан яньцзинь [7] использовал булеру псеу доальба в качестве материала для изучения воздействия добавок на урожайность. Было установлено, что соевое масло, соевая мука, томатный сок и апельсиновый кожух увеличили производство кок10 в связи с их высоким содержанием прекурсоров для синтеза кок10 и каротеноидов; Табачные листья и бета-каротин блокируют путь синтеза бета-каротина, что ведет к увеличению метаболического потока синтеза кок10 и увеличению производства кок10. Можно видеть, что синтез CoQ10 в микроорганизмах тесно связан с синтезом каротеноидов. Поэтому дефицитные питательные вещества каротеноидов могут быть проверены как высокоурожайные сорта кок10.

Олсон и рандей [8] разработали каротеноидный дефицитный штамм фотосинтетических бактерий, чтобы увеличить содержание CoQ10. Йошида [9] использовала ки -4113 в качестве исходного штамма бактерий красной крови с начальным содержанием CoQ10 2,4 мг/г стволовых клеток для мутации. Были проверены высокопродуктивные штаммы мутантов CL-37, Co-22 и Co-22-11 с дефицитом каротеноидов, которые увеличились соответственно на 88%, 150% и 263% по сравнению с исходным штаммом. В настоящее время Япония использует штамм мутантов Co-22-11 для производства ферментации, и его урожайность может достигать 770мг/л брота ферментации [10].

2.1.2 отбор метаболических сдерживающих мутантов

Содержание CoQ10 также может быть увеличено путем устранения обратного воздействия метаболических ингибиторов на синтез CoQ10 или связанный с ним анаболизм. Структурные аналоги CoQ10, стойкие к подавлению обратной связи синтеза CoQ10, включают l-этионин (структурный аналог l-метионина, прекурсоры синтеза CoQ10), зоэритромицин, витамин к3 и некоторые ароматические соединения, являющиеся структурными аналогами CoQ10 или ингибиторов дыхательной системы [9].

Лю кесуан [6] использовал агробактерий tume-faciens AGR1. 1416 в качестве исходного штамма использовался ультрафиолетовый свет (уф), l- метил -3- нитросогуанидин и диэтилсульфат в качестве мутагена, а также проверялись на наличие штаммов мутантов, которые были питательными свойствами тирозина, апартиковой кислоты и устойчивы к структурным аналогам, таким как витамин к3 и этилтионин, и был разработан простой, эффективный и действенный метод обнаружения мутации тирозина, апартиковой кислоты и структурных аналогов, таких как витамин к3 и этилтионин.

Штаммы мутантов AGR0619 и AGR0610 были отобраны методом скрининга тирозин, страдающий дефицитом питательных веществ, и штаммы мутантов, устойчивые к структурным аналогом витамина к3 и этионина, была разработана простая, эффективная и быстрая модель скрининга, получены штаммы мутантов AGR0619 и AGR0610, а урожайность CoQ10 достигла 29,14 мг/л и 31,42 мг/л, соответственно, что на l37,49% и l56,07% выше, чем у ранних штаммов.

Йошида использовала агробактерию Ky-3085 в качестве начальной бактерии и мутировала ее нитросогуанидином для получения штаммов мутантов ау -55 и м -37, которые были устойчивы к эритромицину, этилтионину, витамину K3 и т.д. Ау -55 выращивался в ферментационной цистерне в течение 58 часов, а максимальная производительность составляла 180 мг/л; М -37 культивировался 72 часа, прежде чем его можно было использовать в качестве исходного штамма бактерий. Время ферментации ау -55 в резервуаре для ферментации составляло 58 ч, а максимальная производительность - 180 мг/л. М -37 был культивирован в течение 72 часов, чтобы достичь этого уровня, по сравнению с ас -55, который имеет более короткое время ферментации, более высокую урожайность и более высокую терпимость к высокой концентрации CoQ10.

Актиномицин D (ActD) является тератогеном и канцерогеном, его структура содержит планарное феноксиновое кольцо и два циклических пентапептида, которые могут быть введены в молекулы ДНК и селективно ингибировать транскрипцию и синтез белка. Таким образом, ActD обладает высокой цитотоксичностью, и добавление определенного количества ActD в среду культуры приведет к стрессовому и токсичному воздействию на клетки бактерии. COQ10 является физиологически активным веществом, которое может повысить иммунитет организма, и если после мутагенеза мы можем получить штамм мутантов, устойчивых к действию, то можно увеличить количество внутриклеточной аккумуляции таких физиологически активных веществ, как COQ10, в штамме мутантов.

Компания Pan Chunmei[11] использовала RhizObiumradiObacter WSH2601 в качестве исходного штамма и использовала стойкость к актиномицину D в качестве модели скрининга для скрининга высокопроизводительных штаммов мутантов coq10, а также получила высокопроизводительные штаммы мутагенеза путем комбинирования мутагенеза с ультрафиолетовым светом и нитросогуанидином. Выход COQ10 штамма был оптимизирован с помощью экспериментов с трясущей фляжкой, а окончательный выход COQ10 достиг 34 мг/л, что в 3,6 раза выше, чем у штамма до мутагенеза и оптимизации.

2.2 создание генетически модифицированных бактерий

Используя методы молекулярной биологии, ключевые гены фермента, участвующие в производстве COQ10, вводятся в Escherichia coli через генные векторы, увеличивая количество копий и эффективное выражение этих генов, тем самым повышая синтезирующую способность COQ10. Это фундаментальный подход к строительству штаммов ферментации для производства кок10 с помощью генной инженерии.

Шагом ограничения скорости синтеза кок10 в микробных клетках является конденсация между предшественником бензохинонового кольца p- гидроксибензоиновой кислоты (пф) и структурой боковой цепи полиизопрена пирофосфата (ППС). Фермент, катализирующий эту реакцию, является p- гидроксибензоиновой кислотой полиизопреновой пирофосфатной трансферазы [12]. В E. coli этот фермент кодируется геном ubiA и не требует высокой конкретности длины полимеризации для длинноцепных полиизопреновых пирофосфатных субstrates (PPP). Он обладает относительно широкой спецификой для распознавания субстратов [13]; Формирование боковой цепи полиизопренового пирофосфата определяется полиизопреновым пирофосфатом синтазы, который ускоряет конденсацию фарнезилпирофосфата (ФПП) и изосферного пирофосфата (ипп), образуя полиизопреновый пирофосфат с определенной степенью полимеризации, определяя тем самым тип коэнзима Q [14].

В E. coli этот фермент кодируется геном isPB [15] и в конечном итоге производит COQ8. Если ген isPB не активирован и внедрен экзогенный ген полидекаизопрена пирофосфатного синтаза, то в эшеричиа коли можно создать биосинтез-систему COQ10.

Чжан ан [16] получил ген синтазы полидециленэпирофосфата (ddsA) от Gluconobacter oxytoca путем усиления ПЦР и восстановил требуемые фрагменты путем ферментативного пищеварения. Ген был секвенирован и признан гомологичным для других синтазных генов isopentenyl pyroфосфата (30%~50%), а затем клонирован в векторное выражение, индуцированное выражение векторного синтеза, и соответствующие диапазоны появились на полиакриламидовом гелевом электрофорезе (SDS-PAGE).

Фан и [17] выбрал 10 различных E. coli в качестве рецептора для выражения ddsA, гена синтазы поли (deca-isopentene pyroфосфат) от Gluconobacter oxytoca. Анализ продуктов подтвердил, что E. coli может выражать активный поли (декаизопрена пирофосфата) синтазы, а затем синтезировать COQ10, и было также установлено, что выражение ddsA в одном из штаммов E. coli превышает выражение COQ8 в диком типе, что свидетельствует о возможности использования E. coli для производства COQ10 путем крупномасштабной ферментации.

Поэтому выбор подходящего рецептора E. coli имеет важное значение для будущих исследований и промышленного производства. Однако увеличение производства COQ10 будет сопровождаться производством других coenzyme Q. поэтому следует уделять внимание изучению ферментативных свойств полиизофрена пирофосфата синтазы и изменению других связанных с этим генов (например, неактивация гена isPB и улучшение эксплосии гена ubiA и т.д.) для создания генетически модифицированной бактерии для производства COQ10.

3. Оптимизация производственных условий COQ10

В дополнение к применению теории метаболического управления для выбора высокоурожайных штаммов мутантов или построения рекомбинантных штаммов для повышения ферментации COQ10, оптимизация условий ферментации также является эффективным и удобным способом повышения ферментации COQ10. Оптимизация условий ферментации также является эффективным и удобным способом повышения урожайности ферментации, который в основном включает оптимизацию среды культуры, условий культуры и добавление необходимых веществ.

Liu Ling[18] extracted COQ10 from Cryptococcus yellowsИ после анализа условий источника азота, источника углерода, исходного значения pH, температуры ферментации и т.д., были получены лучшие условия ферментации: источник углерода сукроза и глюкозы 1,25г/л каждый, источник азота дрожжевой пасты и кукурузного сиропа 0,3g/л каждый, pH 6,5, температура 28 ℃, объем инокулята 5% и объем жидкости в 500мл флаконов 50мл, фактор роста белков, и факторы роста белков и белков, и объем инокулята 5%. Инокулят составлял 5%, а объем флаконов 500 мл - 50 мл, а фактором роста был гидролизат белка. Ферментация проводилась при 28 градусе, объем инокулята составил 5%, объем треугольной бутылки 500 мл — 50 мл, фактором роста стал раствор гидролиза белка.

У зуфан [19] использовал радиодуранцы ризобия в качестве штамм, создающего кок10, в соответствии с важностью факторов, влияющих на ферментацию и их взаимосвязь, ортогональное испытание было проведено на источине углерода (глюкозе, сукрозе и соединении), дрожжевой паче, первоначальном значении рн и количестве загруженной жидкости, и были определены окончательные условия ферментации: Источником углерода является смесь 1,5 г / 100мл глюкозы и 2,5 г / 100мл сукроуз, дрожжевой пасты 0,8 г / 100мл, первоначального значения рн 0,8 г / 100мл, источника углерода 1,5 г / 100мл глюкозы и 2,5 г / 100мл сукроуз, а дрожжевой пасты 0,8 г / 100мл. Первоначальный pH составил 7,0, а объем жидкости в 500 мл фляг составил 50 мл. Скорость роста бактерий достигла 13,8 г/л, а урожайность COQ10 достигла 22,7 мг/л, что на 34% и 53% выше, чем до оптимизации, соответственно, в условиях дрожащей ферментации фляжки.

Юань цзин [20] оптимизировал условия среды и культуры COQ10 фотосинтетической бактерии R. caPsulatus и получил следующие результаты: массовая концентрация дрожжевой пасти 3,13 г/л, сульфат аммония 0,8 г/л, Mg2+ 0,64 г/л, Fe2+45 2мг/л, Mn2+18 мг/л, CO2+16 мг/л, начальное значение pH 7,0 и температура 30 градусов. Температура 30 градусов. После 4 - d инкубации массовая концентрация COQ10 в бактерии увеличилась с 15,213 мг/л до 20,365 мг/л, а урожайность увеличилась примерно на 33,87%.

Ван генхуа [21] взял ризобий легуминосарум в качестве объекта исследования и изучил культурные условия, влияющие на рост клеток и синтез COQ10. Оптимальными условиями роста штамма были pH 5,0, температура 30 ° с, объем инокулята 2%, треугольная бутылка по 500 мл, содержащая 25 мл жидкости, и время инкубации 24 часа.

Лю пин [22] оптимизировал условия ферментации Saccharomyces cerevisiae и обнаружил, что оптимальными условиями ферментации являются: 15г/л глюкозы, 15г/л сукроза, 10г/л белка, 10г/л дрожжей, 10г/л дрожжевой пасты, 41,0г/л мгсо, 41,0г/л K2HPO, 41,0г/л KH2PO, 5,0 PH, 50мл прививки и 50мл прививки в 250 мл флаконах с 24 - часовой инкубацией. Объем инокулята составил 10%, температура инкубатора - 28 ° ~30 °, скорость шейкера - 200 ° с/мин, время инкубации - 18 ° с. Оптимизированная урожайность COQ10 достигла 26,85 мг/л, а клеточная биомасса - 27,56 г/л. На основе этого исследования мы изучили прекурсоры, поставляемые через боковую цепочку (каннабинол), и прекурсоры, поставляемые через квиннол (гидроксибензовая кислота и кок0) для кок10 и выявили подходящие прекурсоры для ферментации дрожжевых дрожжевых соединений в кукурузном вине. 

Оптимальные условия ферментации для роста дрожжи деления из кукурузного вина и высокой конверсии прекурсоров в COQ10 были определены следующим образом: 28℃, 200r/min, 18h инкубации, 0,5g /L каннабинола был добавлен для продолжения ферментации и инкубации на 18h для конверсии прекурсоров, а внутриклеточный выход COQ10 был до 33,1мг/л, что было на 91% выше, чем контрольной пробы.

Что касается внутриклеточного производства кок10, то эти два прекурсоры были добавлены вместе, что было ниже, чем каннабинол в отдельности, в то время как в случае экстраклеточного производства кок10 различные добавления прекурсоров не оказали на него значительного воздействия. Тем не менее, с точки зрения урожайности COQ10 на единицу измерения, когда ликопель и COQ0 были объединены, урожайность COQ10 на единицу измерения достигла 1,35 мг/г, что на 117% выше, чем у чистого элемента управления.

4. Разделение и очистка

Поскольку COQ10 легко окисляется, необходимо избегать окислительного уничтожения COQ10 в процессе изоляции и экстракции. Например, в щелочных условиях следует добавить антиоксидантную пирогаллическую кислоту. В настоящее время используются методы очистки для отделения сапонификации и отделения экстракции растворителей.

4.1 отделение извлечения спирта и щелочной сапонификации

Приготовленные ферментированные бактерии в колбасу с круглыми бутилиями добавляют определенную долю пирогаллической галлиевой кислоты, перемешивая, а затем добавляют определенное количество гидроксида натрия-этанола раствора, перемешивая, на этот раз бактерии в чёрную пасту, и добавляют n- алкане для экстракции рефлекса, быстро охлаждаются до комнатной температуры. Извлекаемый с помощью нефтяного эфира несколько раз, экстракт должен быть промыт водой до нейтрального, а затем безводный сульфат натрия для удаления воды, цель состоит в Том, чтобы сделать COQ10 и углеводородные растворители лучше смешиваются, чтобы облегчить последующую обработку.

Concentrate to a small volume, chromatography on silica gel adsorption column, wash with petroleum ether to remove impurities, then elute with ethyl ether-petroleum ether mixture, and distill the eluent under reduced pressure to obtain the yellow oily substance as anhydrous ethanol crystals, and orange-yellow orange crystals as coenzyme COQ10[23-24] . In the presence of ethanol, prolonged saponification will lead to the transposition of the methoxy group on the ring of COQ10 with the ethoxy group of ethanol, resulting in the formation of mono- or di-ethoxy derivatives, which cannot be detected in the product of COQ10, and to avoid the formation of these impurities, KOH can be used instead of NaOH and saponification with methanol [24].

4.2 метод извлечения и разделения щелочной сапонификации

Приготовленные ферментированные бактерии в колбу с круглыми бутылками добавляют определенное количество гидроксида натрия, рефлюса нагрева, быстрого охлаждения, с петролевым эфиром, эфиром или этаном, а также изопропанол смесь экстракции. Затем промывка воды, холодные осадки для удаления примесей, хроматография силикагелевой колонны, сбор раствора кок10, а затем концентрированные безводные кристаллы этанола, можно получить кристаллизацию кок10 [24-25].

4.3 экстракция углеводородного растворителя и отделение от сушеных или замороженных сушеных материалов

Прямая добыча кок10 с помощью нефтяного эфира, алкана, n- гексана или n- гептана является более полной. Тем не менее он должен повторяться несколько раз или трястись в течение нескольких часов, и этот метод должен обеспечивать, чтобы материал был абсолютно сухим и достаточно тонко измельчен, чтобы растворитель мог легко проникать в материал. Если замороженный замороженный материал может поглощать воду в открытой системе при комнатной температуре, что влияет на эффективность экстракции, необходимо заранее добавить 0,5% ~ 1% метанола в углеводородные растворители, такие как нефтяной эфир, и последующая переработка является такой же, как и выше. По сравнению с методом сапонификации, за которым следует извлечение, количество добытого экстракта меньше, но имеет преимущество не уничтожать COQ10 [26-28].

5. В целях анализа 3. Идентификация

5.1 видимый спектрофотометрический метод

В зависимости от щелочных условий, этилцианоацетат может заменить метаксию на молекуле COQ10 для получения принципа синего, взять небольшое количество пробы и COQ10 стандарт, соответственно, добавить безводный этанол, этилцианоацетат и калиевый гидроксид тест раствор, дрожащий хорошо, см. есть синяя реакция, абсорбция была замерена на 620 нм, стандартная кривая была пломбирована COQ10, и содержание COQ10 в образцах было окончательно рассчитано. Наконец, было рассчитано содержание COQ10 в выборке [27].

5.2 ультрафиолетовое излучение Спектрофотометрический метод

Согласно COQ10 имеет устойчивое поглощение при 275 нм, взять стандартный образец COQ10, растворенный в безводной смеси этанола, измерить его поглощение при 275 нм, сделать стандартную кривую COQ10, а затем рассчитать содержание COQ10 в соответствии с поглощением образца. Кривая ультрафиолетового поглощения образца и стандартная кривая в целом последовательная, но из-за очистки COQ10, многократного использования органических растворителей, а также выщелачивания некоторых примесей в клетке, так что наблюдаемая кривая ультрафиолетового поглощения образца в 275 нм будет иметь некоторое отклонение, есть несколько небольших шальных пиков, поэтому определение содержания COQ10 таким образом приведет к некоторым ошибкам. В этом случае сырой экстракт может быть дополнительно очищен тонкослойной хроматографией и в сочетании с ультрафиолетовым излучением для определения содержания COQ10 [28].

5.3 высокопроизводительный анализ и определение жидкостной хроматографии (HPLC)

The crude extract of the sample was further purified by thin-layer chromatography and then analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC) to identify the purification effect [29]. At this time, the HPLC analysis showed that the impurities were few and did not interfere with the determination of COQ10. To further confirm the results, the standards and samples could be analyzed by HPLC at another wavelength by changing the detection wavelength. At the same time, according to the principle that there is no absorption peak in the reduced state of COQ10, a certain amount of sodium borohydride can be added to the sample to be tested, and if the absorption peaks detected just now disappear, it can be further confirmed that it is COQ10[28] , and the content of COQ10 can be obtained by calculating the area of the absorption peaks.

6. Перспективы на будущее

В настоящее время цена COQ10 на международном рынке относительно высока, и Китай ежегодно потребляет более 20 т COQ10, большинство из которых зависит от импорта, и существует большой разрыв на внутреннем рынке, который в основном объясняется низкой изолированностью и очистными мощностями напряжен с низким ферментационным оборудованием. Для получения высокоурожайных штаммов необходимо провести большое количество исследований мутации селекционной, использование генной мутации и направленной мутации для ускорения скорости поиска и добавления прекурсоров для продвижения биосинтеза с целью улучшения содержания COQ10 и т.д.

В последние годы строительство штаммов кок10 получило широкое признание китайского правительства. В последние годы строительство рекомбинантных штаммов COQ10 дало определенные результаты, но из-за сложности пути синтеза COQ10 участвующие гены многочисленны и разбросаны, чтобы реализовать крупномасштабное промышленное производство, необходимы дальнейшие исследования. В заключение, для реализации промышленного производства COQ10 необходимо начать с различных аспектов, включая изучение In vivo биосинтезионных путей, отбор и селекцию высокопродуктивных сортов, оптимизацию условий ферментации, изучение прекурсоров и биосинтезионных веществ, оптимизацию изоляции и очистки и так далее.

Справочные материалы:

[1] WU Zufang,И др.Progress of functional studies on coenzyme Q10[J].Журнал университета нинбо (наука и техника),2001, 14(2):85-88.

[2] юань и. Экстракция и очистка коэнзима Q10 из свиного сердца [J]. Журнал аньхуйского сельскохозяйственного университета, 1997,24(2):200-203. [3] жао мейфа.

[3] жао мейфа. Coenzyme Q10 является важным prodrug[J]. Мелкие и специализированные химикаты 2001, (22):35-40.

(22):35-40.

[4] гу чжу фэнь, чэнь гуань-мин, ли шу чжен. Синтез коэнзима Q10 путем преобразования микробов [J]. Фармацевтический прогресс,2001,25(6):339-343.

[5] биосинтез меганатана р. увихинона в микроорганизмах [J]. FEMS Microbiol Lett, 2001,203:l3l-l39.

[6] лю к-с, у у-ф, хан с-к, и др. Журнал шэньянского сельскохозяйственного университета,2005,36(1):89-92.

[7] чжан яньцзинь, юань ципень, лян хао. Исследование условий ферментации дрожжей, производящих коэнзим q10 [J]. Microbiology Bulletin,2003,30(2):65-69.

[8] OLSON E O, RUDNEY H. Biosynthesis of ubiquinone [J]. Витам хорм, 1983,40:1-43.

[9] YOSHIDA H, KOTANI Y, OcHIAI K, и др. производство u- biquinone-10 с использованием бактерий [J]. J Gen Appl Microbiol,1998,44: 19-26.

[10] тейзил у. производство бихинона и бактериохлоропии Ⅱ a by Rhodobacter sphaeroides and Rhodobacter sulfidophilus [J]. J фермен биоенг, 1993,76: 191 — 194.

[11] Пан чунмэй, буо гочэн, чэнь цзянь. Отбор и оптимизация условий ферментации радиобактера ризобия, бактерии, производящей коэнзим q10 [J]. Журнал технологического инжиниринга,2004,4(5):451-456.

[12] сиберт м и др. Биосинтез Ubiquinone: клонирование генов кодирования для Хориспат (chorismate) - пировательяз И 4- гидроксибензоат октапренил трансферазы из Escherichia coli  [J].  Февраль 2009 года Летт, 1992, 307:347.

[13] Соединенные Штаты америки - хашими. - Z, (подпись) самуэль - о, et al.  1. Биохимическая технология Исследования по теме: on  Биосинтез увихинона в Escherichia coli.1. Специфика пара-гидрабензоат полипренол-трансферазы [J]. Биохимия, 1974,56: 1239 — 1247.

[14] OKADA K, et al. polyprenyl diфосфат synthase essentiallyопределяет длину боковой цепи ubiquinone [J]. Biochem Biophys Acta, 1996,1302: 217 — 223.

[15] асаи ки и др. Идентификация гена Escherichia coli ispB(cel), кодирующего октапренилдифосфатный синтаз [J]. Biochem Bioph Res co., 1994,202:340-345.

[16] чжан ан, у хайчжэнь, чжоу сюэфен и др. Клонирование гена ddsA от Gluconobacter oxytoca и его выражение в Escherichia coli [J]. Журнал восточно-китайского университета науки и техники,2002, (3):321-325

[17] фан и, лю синьи, чэнь гохао. Выражение гена ddsA глуконобактера окситоцина в различных бактериях организма Escherichia coli[J]. Промышленная микробиология,2002,32(4):39-41.

[18] лю лин, ли джи. Выбор оптимальных условий для производства коэнзима Q10 путем ферментации желтых криптококков [J]. Журнал далянской академии рыболовства,2004, 19(3): 199-203.

[19] у зуфан, джу гочэн, чэнь цзянь. Ферментация фляжек ризобиевых радиодуранов WSH2601 для производства коэнзима Q10[J]. Журнал вуси университета легкой промышленности,2003,1(1):65-69.

[20] юань цзинь, вэй хон. Исследование условий ферментации коэнзима Q10, производимого фотосинтетическими бактериями [J]. Аминокислоты и биоресурсы,2003,25(2): 24-26.

[21] ван ген хуа, цянь хэ. Влияние условий ферментации на рост клеток и синтез коэнзима Q10 в ризобиевом горохе [J]. Журнал вуси университета легкой промышленности,2003, (3): 101 — 104.

[22] лю пин, цю вэйхуа, чжэн я' ан, и др. Воздействие веществ-прекурсоров на биосинтез коэнзима Q10 [J]. Пищевая промышленность и ферментация,2005, (4): 1-5.

[23] ван чуньлин. Экстракция, изоляция и характеристика coenzyme Q10 из китайской сои [J]. Китайский журнал фармацевтической промышленности, 1996,27(3): 102-104.

[24] цю вэй-хуа, лю пин, чжун ги-фан и др. Извлечение и определение coenzyme Q10 в дрожжах деления из кукурузного вина [J]. Пищевая промышленность и ферментация,2004,30(11):31 — 35.

[25] институт зоологических исследований юньнань, биофармацевтическая фабрика цзянсу тайчжоу. Изоляция coenzyme Q10 от остатков свиного сердца для подготовки цитохрома C[J]. Фармацевтическая промышленность,1976,2: 22 — 25.

[26] оян пинкай, ху ё н хон. Производство и применение coenzyme Q10[J]. Прогресс химической промышленности,1994 год (4:9-11).

(4):9-11.

[27] ван чуньлин. Экстракция, изоляция и характеристика коэнзима Q10 из соевых бобов китая [J]. Китайский журнал фармацевтической промышленности, 1996,27(3):102-104.

[28] у зуфан, джу гочэн, чэнь цзянь. Разделение, очистка и количественный анализ коэнзима Q10 в броте ферментации [J]. Журнал вьюси университета легкой промышленности, 2002,21 (4):420-423.

[29] YAMADA M K. система ubiquinone в Hasegawaea japon — ica(Yukawet Maki) YAMADA et Banno: новый метод для гомологов из дрожжевых клеток identi — fyingubiquinone [J]. IFORes comm, 1999, 19:41-46.