Как получить CQ10 Ubiquinol путем ферментации?

CQ10, также известный как убихинон, с относительным молекулярным весом 863,4, является жирорастворимым хиноном, химически известным как 2'3- диметоксий -5- метил -6- декалоизопентенилбензохинон.Код 10Представляет собой желтый или оранжево-желтый кристаллический порошок при комнатной температуре. CoQ10 - желтый или оранжево-желтый кристаллический порошок при комнатной температуре, с температурой плавления 49 гравационной, без запаха и вкуса, и нерастворимый в воде. Структурная формула выглядит следующим образом.

В 1957 году кран очистил CoQ10 от миокарда крупного вина и измерил его химическую структуру, подтвердив, что CoQ10 играет важную роль как редокс-носитель в дыхательной цепи млекопитающих, как липидорастворимый электрон-носитель в дыхательной цепи, как элемент, генерирующий клеточную энергию, и как природный активатор и антиоксидант, участвующий в клеточном метаболизме. Таким образом, CoQ10 имеет широкий спектр применения в клинической и медицинской помощи, косметике, уходе за кожей и т.д., и все больше подчеркивается людьми [1].

В настоящее время существуют три метода получения CoQ10: экстракция тканей растений и животных, химический синтез и микробная ферментация. Метод экстракции тканей животных и растений в основном относится к экстракции продуктов из органов животных или некоторых растительных тканей. Юань йи [2] использовал этот метод для извлечения CoQ10 из свиных сердец, но урожайность свежих свиных сердец составила всего 75 мг/кг, а из-за ограниченности источника сырья себестоимость продукции была высокой и дорогостоящей, а масштабное производство было ограничено.

Метод химического синтеза характеризуется тяжелыми условиями и многочисленными этапами. В отличие от этого, производство CoQ10 путем ферментации микроорганизмов является перспективным методом, который является более экономичным, легким для производства в больших масштабах, легким для изоляции и очистки и легким для поглощения человеческим телом.

1. Микробные штаммы, вызывающие CoQ10

Содержание CoQ10 значительно варьируется в зависимости от штаммов, и в прилагаемой таблице показаны микробные штаммы с относительно высоким содержанием CoQ10, среди которых содержание CoQ10 в родобактерской сварикусе и родобактерской сварикусе является относительно высоким. Эти фотосинтезирующие бактерии относятся к ордену родобактерий, который подразделяется на подзаказы родобактерий и зеленого тиобактерия, и первый подразделяется на семьи родобактериологических и родобактериологических. Первый подразделяется на родобактерные спаероиды и родобактерные спаероиды. Родобактерские sphaeroides и родобактерные podocarpus относятся к семейству родобактерических, поэтому родобактерские sphaeroides являются одним из идеальных штаммов для производства кок10.

Таблица штаммов, вызывающих coq10 [4]

2. Штамм мутагенеза и строительство инженерных бактерий

Как правило, дикие штаммы имеют низкую урожайность, и их производственные мощности далеко не удовлетворяют потребности промышленного производства, поэтому необходимо генетически модифицировать их путем использования методов мутации и генной инженерии.

2.1 селекция для метаболического регулирования штаммов

Путь микробного синтеза CoQ10 в основном разделен на два направления: синтез ароматического кольца и биосинтез изосферной боковой цепи. Поэтому метаболическое регулирование селекции может осуществляться по биосинтезу ароматического кольца и изосферной боковой цепи.

2.1.1 размножение мутантов, испытывающих нехватку питательных веществ

В соответствии с принципом регулирования метаболических процессов можно увеличить производство кок10 путем ослабления или перекрытия путей разведения кок10 [5] (например, путей метаболического синтеза ароматических соединений, содержащих бензольные кольца, такие как тирозин, фенилаланин и триптофан, которые имеют общие прекурсоры с синтезом кок10). Лиу кешань [6] в качестве исходного штамма использовал азовактерий тумефациенс и проверил штамм мутантов с двойными дефектами тирозина и апартиковой кислоты путем двойного мутагенеза с помощью нитросогуанидина и диэтилсульфата. Производство штамма мутантов CoQ10 увеличилось на 91,28% по сравнению с исходным штаммом.

Чжан яньцзинь [7] использовал булеру псеу доальба в качестве материала для изучения воздействия добавок на урожайность. Было установлено, что соевое масло, соевая мука, томатный сок и апельсиновый кожух увеличили производство кок10 в связи с их высоким содержанием прекурсоров для синтеза кок10 и каротеноидов; Табачные листья и бета-каротин блокируют путь синтеза бета-каротина, что ведет к увеличению метаболического потока синтеза кок10 и увеличению производства кок10. Можно видеть, что синтез CoQ10 в микроорганизмах тесно связан с синтезом каротеноидов. Поэтому дефицитные питательные вещества каротеноидов могут быть проверены как высокоурожайные сорта кок10.

Олсон и рандей [8] разработали каротеноидный дефицитный штамм фотосинтетических бактерий, чтобы увеличить содержание CoQ10. Йошида [9] использовала ки -4113 в качестве исходного штамма бактерий красной крови с начальным содержанием CoQ10 2,4 мг/г стволовых клеток для мутации. Были проверены высокопродуктивные штаммы мутантов CL-37, Co-22 и Co-22-11 с дефицитом каротеноидов, которые увеличились соответственно на 88%, 150% и 263% по сравнению с исходным штаммом. В настоящее время Япония использует штамм мутантов Co-22-11 для производства ферментации, и его урожайность может достигать 770мг/л брота ферментации [10].

2.1.2 отбор метаболических сдерживающих мутантов

Содержание CoQ10 также может быть увеличено путем устранения обратного воздействия метаболических ингибиторов на синтез CoQ10 или связанный с ним анаболизм. Структурные аналоги CoQ10, стойкие к подавлению обратной связи синтеза CoQ10, включают l-этионин (структурный аналог l-метионина, прекурсоры синтеза CoQ10), зоэритромицин, витамин к3 и некоторые ароматические соединения, являющиеся структурными аналогами CoQ10 или ингибиторов дыхательной системы [9].

Лю кесуан [6] использовал агробактерий tume-faciens AGR1. 1416 в качестве исходного штамма использовался ультрафиолетовый свет (уф), l- метил -3- нитросогуанидин и диэтилсульфат в качестве мутагена, а также проверялись на наличие штаммов мутантов, которые были питательными свойствами тирозина, апартиковой кислоты и устойчивы к структурным аналогам, таким как витамин к3 и этилтионин, и был разработан простой, эффективный и действенный метод обнаружения мутации тирозина, апартиковой кислоты и структурных аналогов, таких как витамин к3 и этилтионин.

Штаммы мутантов AGR0619 и AGR0610 были отобраны методом скрининга тирозин, страдающий дефицитом питательных веществ, и штаммы мутантов, устойчивые к структурным аналогом витамина к3 и этионина, была разработана простая, эффективная и быстрая модель скрининга, получены штаммы мутантов AGR0619 и AGR0610, а урожайность CoQ10 достигла 29,14 мг/л и 31,42 мг/л, соответственно, что на l37,49% и l56,07% выше, чем у ранних штаммов.

Йошида использовала агробактерию Ky-3085 в качестве начальной бактерии и мутировала ее нитросогуанидином для получения штаммов мутантов ау -55 и м -37, которые были устойчивы к эритромицину, этилтионину, витамину K3 и т.д. Ау -55 выращивался в ферментационной цистерне в течение 58 часов, а максимальная производительность составляла 180 мг/л; М -37 культивировался 72 часа, прежде чем его можно было использовать в качестве исходного штамма бактерий. Время ферментации ау -55 в резервуаре для ферментации составляло 58 ч, а максимальная производительность - 180 мг/л. М -37 был культивирован в течение 72 часов, чтобы достичь этого уровня, по сравнению с ас -55, который имеет более короткое время ферментации, более высокую урожайность и более высокую терпимость к высокой концентрации CoQ10.

Актиномицин D (ActD) является тератогеном и канцерогеном, его структура содержит планарное феноксиновое кольцо и два циклических пентапептида, которые могут быть введены в молекулы ДНК и селективно ингибировать транскрипцию и синтез белка. Таким образом, ActD обладает высокой цитотоксичностью, и добавление определенного количества ActD в среду культуры приведет к стрессовому и токсичному воздействию на клетки бактерии. COQ10 является физиологически активным веществом, которое может повысить иммунитет организма, и если после мутагенеза мы можем получить штамм мутантов, устойчивых к действию, то можно увеличить количество внутриклеточной аккумуляции таких физиологически активных веществ, как COQ10, в штамме мутантов.

Компания Pan Chunmei[11] использовала RhizObiumradiObacter WSH2601 в качестве исходного штамма и использовала стойкость к актиномицину D в качестве модели скрининга для скрининга высокопроизводительных штаммов мутантов coq10, а также получила высокопроизводительные штаммы мутагенеза путем комбинирования мутагенеза с ультрафиолетовым светом и нитросогуанидином. Выход COQ10 штамма был оптимизирован с помощью экспериментов с трясущей фляжкой, а окончательный выход COQ10 достиг 34 мг/л, что в 3,6 раза выше, чем у штамма до мутагенеза и оптимизации.

2.2 создание генетически модифицированных бактерий

Используя методы молекулярной биологии, ключевые гены фермента, участвующие в производстве COQ10, вводятся в Escherichia coli через генные векторы, увеличивая количество копий и эффективное выражение этих генов, тем самым повышая синтезирующую способность COQ10. Это фундаментальный подход к строительству штаммов ферментации для производства кок10 с помощью генной инженерии.

Шагом ограничения скорости синтеза кок10 в микробных клетках является конденсация между предшественником бензохинонового кольца p- гидроксибензоиновой кислоты (пф) и структурой боковой цепи полиизопрена пирофосфата (ППС). Фермент, катализирующий эту реакцию, является p- гидроксибензоиновой кислотой полиизопреновой пирофосфатной трансферазы [12]. В E. coli этот фермент кодируется геном ubiA и не требует высокой конкретности длины полимеризации для длинноцепных полиизопреновых пирофосфатных субstrates (PPP). Он обладает относительно широкой спецификой для распознавания субстратов [13]; Формирование боковой цепи полиизопренового пирофосфата определяется полиизопреновым пирофосфатом синтазы, который ускоряет конденсацию фарнезилпирофосфата (ФПП) и изосферного пирофосфата (ипп), образуя полиизопреновый пирофосфат с определенной степенью полимеризации, определяя тем самым тип коэнзима Q [14].

В E. coli этот фермент кодируется геном isPB [15] и в конечном итоге производит COQ8. Если ген isPB не активирован и внедрен экзогенный ген полидекаизопрена пирофосфатного синтаза, то в эшеричиа коли можно создать биосинтез-систему COQ10.

Чжан ан [16] получил ген синтазы полидециленэпирофосфата (ddsA) от Gluconobacter oxytoca путем усиления ПЦР и восстановил требуемые фрагменты путем ферментативного пищеварения. Ген был секвенирован и признан гомологичным для других синтазных генов isopentenyl pyroфосфата (30%~50%), а затем клонирован в векторное выражение, индуцированное выражение векторного синтеза, и соответствующие диапазоны появились на полиакриламидовом гелевом электрофорезе (SDS-PAGE).

Фан и [17] выбрал 10 различных E. coli в качестве рецептора для выражения ddsA, гена синтазы поли (deca-isopentene pyroфосфат) от Gluconobacter oxytoca. Анализ продуктов подтвердил, что E. coli может выражать активный поли (декаизопрена пирофосфата) синтазы, а затем синтезировать COQ10, и было также установлено, что выражение ddsA в одном из штаммов E. coli превышает выражение COQ8 в диком типе, что свидетельствует о возможности использования E. coli для производства COQ10 путем крупномасштабной ферментации.

Поэтому выбор подходящего рецептора E. coli имеет важное значение для будущих исследований и промышленного производства. Однако увеличение производства COQ10 будет сопровождаться производством других coenzyme Q. поэтому следует уделять внимание изучению ферментативных свойств полиизофрена пирофосфата синтазы и изменению других связанных с этим генов (например, неактивация гена isPB и улучшение эксплосии гена ubiA и т.д.) для создания генетически модифицированной бактерии для производства COQ10.

3. Оптимизация производственных условий COQ10

В дополнение к применению теории метаболического управления для выбора высокоурожайных штаммов мутантов или построения рекомбинантных штаммов для повышения ферментации COQ10, оптимизация условий ферментации также является эффективным и удобным способом повышения ферментации COQ10. Оптимизация условий ферментации также является эффективным и удобным способом повышения урожайности ферментации, который в основном включает оптимизацию среды культуры, условий культуры и добавление необходимых веществ.

Лю лин [18] извлек COQ10 из желтых криптококков, и после анализа условий источника азота, источника углерода, первоначального значения pH, температуры ферментации и т.д., были получены наилучшие условия ферментации: Углерод сукроза и глюкозы 1,25г/л каждый, азот дрожжевой пасты и кукурузного сиропа 0,3g/л каждый, pH 6,5, температура 28 ℃, инокулят объем 5% и объем жидкости в 500мл флаконов 50мл, фактор роста белков, и факторы роста белков и белков, и инокулят объем 5%. Инокулят составлял 5%, а объем флаконов 500 мл - 50 мл, а фактором роста был гидролизат белка. Ферментация проводилась при 28 градусе, объем инокулята составил 5%, объем треугольной бутылки 500 мл — 50 мл, фактором роста стал раствор гидролиза белка.

У зуфан [19] использовал радиодуранцы ризобия в качестве штамм, создающего кок10, в соответствии с важностью факторов, влияющих на ферментацию и их взаимосвязь, ортогональное испытание было проведено на источине углерода (глюкозе, сукрозе и соединении), дрожжевой паче, первоначальном значении рн и количестве загруженной жидкости, и были определены окончательные условия ферментации: Источником углерода является смесь 1,5 г / 100мл глюкозы и 2,5 г / 100мл сукроуз, дрожжевой пасты 0,8 г / 100мл, первоначального значения рн 0,8 г / 100мл, источника углерода 1,5 г / 100мл глюкозы и 2,5 г / 100мл сукроуз, а дрожжевой пасты 0,8 г / 100мл. Первоначальный pH составил 7,0, а объем жидкости в 500 мл фляг составил 50 мл. Скорость роста бактерий достигла 13,8 г/л, а урожайность COQ10 достигла 22,7 мг/л, что на 34% и 53% выше, чем до оптимизации, соответственно, в условиях дрожащей ферментации фляжки.

Юань цзин [20] оптимизировал условия среды и культуры COQ10 фотосинтетической бактерии R. caPsulatus и получил следующие результаты: массовая концентрация дрожжевой пасти 3,13 г/л, сульфат аммония 0,8 г/л, Mg2+ 0,64 г/л, Fe2+45 2мг/л, Mn2+18 мг/л, CO2+16 мг/л, начальное значение pH 7,0 и температура 30 градусов. Температура 30 градусов. После 4 - d инкубации массовая концентрация COQ10 в бактерии увеличилась с 15,213 мг/л до 20,365 мг/л, а урожайность увеличилась примерно на 33,87%.

Ван генхуа [21] взял ризобий легуминосарум в качестве объекта исследования и изучил культурные условия, влияющие на рост клеток и синтез COQ10. Оптимальными условиями роста штамма были pH 5,0, температура 30 ° с, объем инокулята 2%, треугольная бутылка по 500 мл, содержащая 25 мл жидкости, и время инкубации 24 часа.

Лю пин [22] оптимизировал условия ферментации Saccharomyces cerevisiae и обнаружил, что оптимальными условиями ферментации являются: 15г/л глюкозы, 15г/л сукроза, 10г/л белка, 10г/л дрожжей, 10г/л дрожжевой пасты, 41,0г/л мгсо, 41,0г/л K2HPO, 41,0г/л KH2PO, 5,0 PH, 50мл прививки и 50мл прививки в 250 мл флаконах с 24 - часовой инкубацией. Объем инокулята составил 10%, температура инкубатора - 28 ° ~30 °, скорость шейкера - 200 ° с/мин, время инкубации - 18 ° с. Оптимизированная урожайность COQ10 достигла 26,85 мг/л, а клеточная биомасса - 27,56 г/л. На основе этого исследования мы изучили прекурсоры, поставляемые через боковую цепочку (каннабинол), и прекурсоры, поставляемые через квиннол (гидроксибензовая кислота и кок0) для кок10 и выявили подходящие прекурсоры для ферментации дрожжевых дрожжевых соединений в кукурузном вине. 

Оптимальные условия ферментации для роста дрожжи деления из кукурузного вина и высокой конверсии прекурсоров в COQ10 были определены следующим образом: 28℃, 200r/min, 18h инкубации, 0,5g /L каннабинола был добавлен для продолжения ферментации и инкубации на 18h для конверсии прекурсоров, а внутриклеточный выход COQ10 был до 33,1мг/л, что было на 91% выше, чем контрольной пробы.

Что касается внутриклеточного производства кок10, то эти два прекурсоры были добавлены вместе, что было ниже, чем каннабинол в отдельности, в то время как в случае экстраклеточного производства кок10 различные добавления прекурсоров не оказали на него значительного воздействия. Тем не менее, с точки зрения урожайности COQ10 на единицу измерения, когда ликопель и COQ0 были объединены, урожайность COQ10 на единицу измерения достигла 1,35 мг/г, что на 117% выше, чем у чистого элемента управления.

4. Разделение и очистка

Поскольку COQ10 легко окисляется, необходимо избегать окислительного уничтожения COQ10 в процессе изоляции и экстракции. Например, в щелочных условиях следует добавить антиоксидантную пирогаллическую кислоту. В настоящее время используются методы очистки для отделения сапонификации и отделения экстракции растворителей.

4.1 отделение извлечения спирта и щелочной сапонификации

Приготовленные ферментированные бактерии в колбасу с круглыми бутилиями добавляют определенную долю пирогаллической галлиевой кислоты, перемешивая, а затем добавляют определенное количество гидроксида натрия-этанола раствора, перемешивая, на этот раз бактерии в чёрную пасту, и добавляют n- алкане для экстракции рефлекса, быстро охлаждаются до комнатной температуры. Извлекаемый с помощью нефтяного эфира несколько раз, экстракт должен быть промыт водой до нейтрального, а затем безводный сульфат натрия для удаления воды, цель состоит в Том, чтобы сделать COQ10 и углеводородные растворители лучше смешиваются, чтобы облегчить последующую обработку.

Концентрируйтесь до небольшого объема, хроматография на адсорбционной колонке силикагеля, мойте с помощью нефтяного эфира для удаления примесей, затем очищайте с помощью этилового эфира-нефтяного эфира смесь и дистиллируйте раствор под пониженным давлением, чтобы получить желтое жирное вещество в виде безводного этанола и оранжево-желтые оранжевые кристаллы в виде коэнзима COQ10[23-24]. При наличии этанола продолжительная сапонификация приведет к транspositiПо состоянию наметоксической группы на колье кок10 с этиоксиновой группой этанола, что приведет к образованию моно-или диэтиоксиевых производных, которые не могут быть обнаружены в продукте кок10, и во избежание образования этих примесей ко может использоваться вместо нао и сапонификации метанолом [24].

4.2 метод извлечения и разделения щелочной сапонификации

Приготовленные ферментированные бактерии в колбу с круглыми бутылками добавляют определенное количество гидроксида натрия, рефлюса нагрева, быстрого охлаждения, с петролевым эфиром, эфиром или этаном, а также изопропанол смесь экстракции. Затем промывка воды, холодные осадки для удаления примесей, хроматография силикагелевой колонны, сбор раствора кок10, а затем концентрированные безводные кристаллы этанола, можно получить кристаллизацию кок10 [24-25].

4.3 экстракция углеводородного растворителя и отделение от сушеных или замороженных сушеных материалов

Прямая добыча кок10 с помощью нефтяного эфира, алкана, n- гексана или n- гептана является более полной. Тем не менее он должен повторяться несколько раз или трястись в течение нескольких часов, и этот метод должен обеспечивать, чтобы материал был абсолютно сухим и достаточно тонко измельчен, чтобы растворитель мог легко проникать в материал. Если замороженный замороженный материал может поглощать воду в открытой системе при комнатной температуре, что влияет на эффективность экстракции, необходимо заранее добавить 0,5% ~ 1% метанола в углеводородные растворители, такие как нефтяной эфир, и последующая переработка является такой же, как и выше. По сравнению с методом сапонификации, за которым следует извлечение, количество добытого экстракта меньше, но имеет преимущество не уничтожать COQ10 [26-28].

5. В целях анализа 3. Идентификация

5.1 видимый спектрофотометрический метод

В зависимости от щелочных условий, этилцианоацетат может заменить метаксию на молекуле COQ10 для получения принципа синего, взять небольшое количество пробы и COQ10 стандарт, соответственно, добавить безводный этанол, этилцианоацетат и калиевый гидроксид тест раствор, дрожащий хорошо, см. есть синяя реакция, абсорбция была замерена на 620 нм, стандартная кривая была пломбирована COQ10, и содержание COQ10 в образцах было окончательно рассчитано. Наконец, было рассчитано содержание COQ10 в выборке [27].

5.2 ультрафиолетовое излучение Спектрофотометрический метод

Согласно COQ10 имеет устойчивое поглощение при 275 нм, взять стандартный образец COQ10, растворенный в безводной смеси этанола, измерить его поглощение при 275 нм, сделать стандартную кривую COQ10, а затем рассчитать содержание COQ10 в соответствии с поглощением образца. Кривая ультрафиолетового поглощения образца и стандартная кривая в целом последовательная, но из-за очистки COQ10, многократного использования органических растворителей, а также выщелачивания некоторых примесей в клетке, так что наблюдаемая кривая ультрафиолетового поглощения образца в 275 нм будет иметь некоторое отклонение, есть несколько небольших шальных пиков, поэтому определение содержания COQ10 таким образом приведет к некоторым ошибкам. В этом случае сырой экстракт может быть дополнительно очищен тонкослойной хроматографией и в сочетании с ультрафиолетовым излучением для определения содержания COQ10 [28].

5.3 высокопроизводительный анализ и определение жидкостной хроматографии (HPLC)

Первичный экстракт образца был дополнительно очищен тонкослойной хроматографией, а затем проанализирован высокопроизводительной жидкостной хроматографией (HPLC) для определения эффекта очистки [29]. В то время анализ HPLC показал, что примесей было мало и не мешало определению COQ10. Для дальнейшего подтверждения результатов стандарты и образцы могли бы анализироваться HPLC на другой длине волны путем изменения длины волны обнаружения. В то же время в соответствии с принципом отсутствия пика поглощения в уменьшенном состоянии COQ10 в образец, подлежащий проверке, может быть добавлено определенное количество борогидрида натрия, и если только что обнаруженные пики поглощения исчезают, то можно далее подтвердить, что это COQ10[28], а содержание COQ10 можно получить путем расчета площади пиков поглощения.

6. Перспективы на будущее

В настоящее время цена COQ10 на международном рынке относительно высока, и Китай ежегодно потребляет более 20 т COQ10, большинство из которых зависит от импорта, и существует большой разрыв на внутреннем рынке, который в основном объясняется низкой изолированностью и очистными мощностями напряжен с низким ферментационным оборудованием. Для получения высокоурожайных штаммов необходимо провести большое количество исследований мутации селекционной, использование генной мутации и направленной мутации для ускорения скорости поиска и добавления прекурсоров для продвижения биосинтеза с целью улучшения содержания COQ10 и т.д.

В последние годы строительство штаммов кок10 получило широкое признание китайского правительства. В последние годы строительство рекомбинантных штаммов COQ10 дало определенные результаты, но из-за сложности пути синтеза COQ10 участвующие гены многочисленны и разбросаны, чтобы реализовать крупномасштабное промышленное производство, необходимы дальнейшие исследования. В заключение, для реализации промышленного производства COQ10 необходимо начать с различных аспектов, включая изучение In vivo биосинтезионных путей, отбор и селекцию высокопродуктивных сортов, оптимизацию условий ферментации, изучение прекурсоров и биосинтезионных веществ, оптимизацию изоляции и очистки и так далее.

Справочные материалы:

[1] WU Zufang,И др.Progress of functional studies on coenzyme Q10[J].Журнал университета нинбо (наука и техника),2001, 14(2):85-88.

[2] юань и. Экстракция и очистка коэнзима Q10 из свиного сердца [J]. Журнал аньхуйского сельскохозяйственного университета, 1997,24(2):200-203. [3] жао мейфа.

[3] жао мейфа. Coenzyme Q10 является важным prodrug[J]. Мелкие и специализированные химикаты 2001, (22):35-40.

(22):35-40.

[4] гу чжу фэнь, чэнь гуань-мин, ли шу чжен. Синтез коэнзима Q10 путем преобразования микробов [J]. Фармацевтический прогресс,2001,25(6):339-343.

[5] биосинтез меганатана р. увихинона в микроорганизмах [J]. FEMS Microbiol Lett, 2001,203:l3l-l39.

[6] лю к-с, у у-ф, хан с-к, и др. Журнал шэньянского сельскохозяйственного университета,2005,36(1):89-92.

[7] чжан яньцзинь, юань ципень, лян хао. Исследование условий ферментации дрожжей, производящих коэнзим q10 [J]. Microbiology Bulletin,2003,30(2):65-69.

[8] OLSON E O, RUDNEY H. Biosynthesis of ubiquinone [J]. Витам хорм, 1983,40:1-43.

[9] YOSHIDA H, KOTANI Y, OcHIAI K, и др. производство u- biquinone-10 с использованием бактерий [J]. J Gen Appl Microbiol,1998,44: 19-26.

[10] тейзил у. производство бихинона и бактериохлоропии Ⅱ a by Rhodobacter sphaeroides and Rhodobacter sulfidophilus [J]. J фермен биоенг, 1993,76: 191 — 194.

[11] Пан чунмэй, буо гочэн, чэнь цзянь. Отбор и оптимизация условий ферментации радиобактера ризобия, бактерии, производящей коэнзим q10 [J]. Журнал технологического инжиниринга,2004,4(5):451-456.

[12] сиберт м и др. Биосинтез Ubiquinone: клонирование генов кодирования для Хориспат (chorismate) - пировательяз И 4- гидроксибензоат октапренил трансферазы из Escherichia coli  [J].  Февраль 2009 года Летт, 1992, 307:347.

[13] Соединенные Штаты америки - хашими. - Z, (подпись) самуэль - о, et al.  1. Биохимическая технология Исследования по теме: on  Биосинтез увихинона в Escherichia coli.1. Специфика пара-гидрабензоат полипренол-трансферазы [J]. Биохимия, 1974,56: 1239 — 1247.

[14] OKADA K, et al. polyprenyl diфосфат synthase essentiallyопределяет длину боковой цепи ubiquinone [J]. Biochem Biophys Acta, 1996,1302: 217 — 223.

[15] асаи ки и др. Идентификация гена Escherichia coli ispB(cel), кодирующего октапренилдифосфатный синтаз [J]. Biochem Bioph Res co., 1994,202:340-345.

[16] чжан ан, у хайчжэнь, чжоу сюэфен и др. Клонирование гена ddsA от Gluconobacter oxytoca и его выражение в Escherichia coli [J]. Журнал восточно-китайского университета науки и техники,2002, (3):321-325

[17] фан и, лю синьи, чэнь гохао. Выражение гена ddsA глуконобактера окситоцина в различных бактериях организма Escherichia coli[J]. Промышленная микробиология,2002,32(4):39-41.

[18] лю лин, ли джи. Выбор оптимальных условий для производства коэнзима Q10 путем ферментации желтых криптококков [J]. Журнал далянской академии рыболовства,2004, 19(3): 199-203.

[19] у зуфан, джу гочэн, чэнь цзянь. Ферментация фляжек ризобиевых радиодуранов WSH2601 для производства коэнзима Q10[J]. Журнал вуси университета легкой промышленности,2003,1(1):65-69.

[20] юань цзинь, вэй хон. Исследование условий ферментации коэнзима Q10, производимого фотосинтетическими бактериями [J]. Аминокислоты и биоресурсы,2003,25(2): 24-26.

[21] ван ген хуа, цянь хэ. Влияние условий ферментации на рост клеток и синтез коэнзима Q10 в ризобиевом горохе [J]. Журнал вуси университета легкой промышленности,2003, (3): 101 — 104.

[22] лю пин, цю вэйхуа, чжэн я' ан, и др. Воздействие веществ-прекурсоров на биосинтез коэнзима Q10 [J]. Пищевая промышленность и ферментация,2005, (4): 1-5.

[23] ван чуньлин. Экстракция, изоляция и характеристика coenzyme Q10 из китайской сои [J]. Китайский журнал фармацевтической промышленности, 1996,27(3): 102-104.

[24] цю вэй-хуа, лю пин, чжун ги-фан и др. Извлечение и определение coenzyme Q10 в дрожжах деления из кукурузного вина [J]. Пищевая промышленность и ферментация,2004,30(11):31 — 35.

[25] институт зоологических исследований юньнань, биофармацевтическая фабрика цзянсу тайчжоу. Изоляция coenzyme Q10 от остатков свиного сердца для подготовки цитохрома C[J]. Фармацевтическая промышленность,1976,2: 22 — 25.

[26] оян пинкай, ху ё н хон. Производство и применение coenzyme Q10[J]. Прогресс химической промышленности,1994 год (4:9-11).

(4):9-11.

[27] ван чуньлин. Экстракция, изоляция и характеристика коэнзима Q10 из соевых бобов китая [J]. Китайский журнал фармацевтической промышленности, 1996,27(3):102-104.

[28] у зуфан, джу гочэн, чэнь цзянь. Разделение, очистка и количественный анализ коэнзима Q10 в броте ферментации [J]. Журнал вьюси университета легкой промышленности, 2002,21 (4):420-423.

[29] YAMADA M K. система ubiquinone в Hasegawaea japon — ica(Yukawet Maki) YAMADA et Banno: новый метод для гомологов из дрожжевых клеток identi — fyingubiquinone [J]. IFORes comm, 1999, 19:41-46.