Безопасны ли экстракты Cistanchis Tubulosa в здоровой пище?

Cistanchetubulosa-сушеныймясистыйстебльс чешуйчатыми листьями Cistanche tubulosa (шренк)- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да- да. R. Wight — вечная паразитическая трава [1]. Систанче тубулоса (шренк.) R. Wight — многолетнее паразитарное растение [1]. Он имеет эффект тонизирующего воздействия на почки и янь, благотворно влияет на сущность и кровь, увлажняя кишечник и слабительное [2], и также известен как «пустынный женьшень». Современные фармакологические исследования также показали, что она имеет различные фармакологические эффекты, такие как улучшение почечной функции, антиусталость, снижение артериального давления, антистарение, регулирование иммунной функции [3-4].

Чистанчи тубулосаИмеет долгую историю использования в синьцзяне из-за его замечательной фармакологической деятельности. В 2005 году Japan' министерство здравоохранения и социального обеспечения (мзсо) утвердило его заявку на продовольствие. Разработка соответствующих продуктов питания для здоровья имеет высокую ценность. Является ли Cistanchis tubulosa экстракт безопасным сырьем для здоровой пищи, и какова его безопасность и потребление дозы?

В этом исследовании безопасность экстракта цистанчи тубулозы оценивалась с помощью тестов на острую пероральную токсичность, а -mes, полиморфического эритроцитного микронуклея костного мозга мышей, анализа деформации сперматозоидов мышей и тератогения, с тем чтобы обеспечить надлежащую научную основу для его разработки и применения.

1. Материалы и методы

1.1 основные инструменты, оборудование И реагенты

MD200-3 верхняя посуда электронный баланс, электронное взвешивание, CXA Olympus двухзрачный микроскоп, XTL-I тип непрерывного зума стереомикроскоп, 500 парафиновый роторный резак, TS-12H биологическая тканевая автоматическая обезвоживающая машина, BM-VI биологическая тканевая морозильная машина, LEIT220 микроскоп, мириад BC-3000 анализатор гематокрита, мириад BC-2800Vet анализатор гематокрита, roch -400 автоматическая биохимия. Анализатор кровяных клеток, Myers бк - 2800vet анализатор кровяных клеток, Roche-400 автоматическая биохимия.

1.2 методы работы

1.2.1 испытание на острую пероральную токсичность

20 мышей куньминьской породы, масса тела 18~22 г, половина самца и половина самки. Весите 25 г экстракта цистанчи тубулозы, добавьте стерильную дистиллированную воду до 100 мл, а затем дайте экстракт мышям дважды с интервалом в 3 ч со скоростью 20 мл/кг м.т. После желудочного отвода мыши непрерывно наблюдались в течение 14 суток, а токсичность и смертность регистрировались.

1.2.2 испытание на микронуклеус полицитемии веры костного мозга мышей (пкэ)

50 мышей куньминьской породы, масса тела 25~30 г, были произвольно разделены на 5 групп, половина мужчин и половина женщин. Метод перорального гаважа использовался дважды с 24 - часовым интервалом, были установлены группы низкой, средней и высокой дозы цистанчи тубулозного экстракта (1,5, 3,0 и 6,0 г/кг м.т.), отрицательного контроля (стерилизованная дистиллированная вода) и положительного контроля (40 мл/кг м.т. Циклохоспимида, 10 мл/кг м.т. Внутрибрюшная инъекция).

 Животные были убиты в результате смещения шейки матки через 6 часов после последнего введения испытуемого вещества, и был проведен регулярный отбор проб и приготовление 10 000 ломтиков. В каждой мышке были подсчитаны 1 000 полиморфических эритроцитов костного мозга, было отмечено количество полиморфических эритроцитов, содержащих микроэлементы, и 200 полиморфических эритроцитов, было отмечено отношение числа полиморфических эритроцитов к зрелым эритроцитам (пкэ/РБК), а показатель микронуклеев был рассчитан как показатель микронуклеев (промилле). Частота микронуклея (×) = (число полицитопилических эритроцитов с микронуклеями/общее число полицитопилических эритроцитов) 100%.

1.2.3 мышь Тест на деформацию спермы

Двадцать пять мужчин чистенькой порода куньмин мышей, масса тела 26-33 г, были произвольно разделены на пять групп. Количество испытуемого вещества, препарат раствора и гаваж были такими же, как и при анализе микронуклея, а положительный контроль (45 мл/кг м.т. циклохоспимида) вводился внутрибрюшно в течение 11,25 мл/кг м.т. Один раз в день в течение 5 суток подряд. 30 дней после последнего введения испытуемого вещества положительный контроль вводился в брюшную полость в 11,25 мл/кг м.т. Животные были преданы смерти через 30 дней после последнего введения испытательного материала, и 5000 сперматозоидов с полной структурой были подсчитаны в фильтрации яичников, окрашенных эозином, и была подсчитана частота аберрантных сперматозоидов (%). Частота аберрантных сперматозоидов (%) = (число аберрантных сперматозоидов/общее число сперматозоидов) × 100%.

1.2.4 раздел 1.2.4 Проверка эймса

Тест на эймс был проведен с выявленными штаммами та97, та98, та100, та102 и микросомальными ферзимами крыс (S9), вызываемыми полихлорированным дифенилом (ПХД). Было пять групп доз (0,008, 0,040, 0,200, 1.000, 5.000 мг/блюдо), спонтанная группа ревертантов, группа контроля растворителей (дистиллированная вода) и группа позитивного контроля (мутагены). - S9: та97 и та98 были 2,4,7- тринитрофентаноном (0,2 - градиент/блюдо), та100 - азидом натрия (1,5 - градиент/блюдо) и та102 - митомицином с (4 - градиент/блюдо). +S9: та97, та98 и та100 — 2- аминофен (10 гранул/блюдо), та102 — 1,8- дигидроксиантрахинон (50 гранул/блюдо). Наблюдайте изменения в количестве колоний ревертантов в каждой группе.

1.2.5 тератогенное испытание

Чистый сорт су 100 самки крыс, масса тела 208~380 г, 60 самцов крыс, масса тела 302~450 г, соотношение спаривания 2:1 между самцами и самками.

Не менее 12 беременных крыс в каждой группе получали в дозах 0,25, 0,50 и 1,00 г/кг м.т. На 20 - й день беременности матка была вырезана и взвешена, количество мертворождений и живых плода было зарегистрировано и исследовано, масса тела и длина плода были зарегистрированы, а внешний вид плода был исследован на предмет каких-либо аномалий. 50% плода были подвергнуты осмотру скелета, а остальные 50% - первичному осмотру.

1.3 обработка статистических данных

Данные были преобразованы и статистически проанализированы с использованием pems3.1 для win-windows. Для общего сопоставления была использована односторонняя анова, если было установлено, что расхождения данных совпадают, и Dunnett' тест s использовался для сопоставления дозационных групп с контрольной группой, если было установлено, что отклонение совпадает. Если дисперсия не является однородной, то вместо нее используется непараметрический (ранговая сумма) тест. Для подсчета данных использовался метод chi- квадрата. Полихроматический тест эритроцитов микронуклея костного мозга мышей и тест аберрации сперматозоидов мышей были проведены в соответствии с Poisson' распределение s с испытательным уровнем α = 0,05. Уровень испытания был α= 0,05.

2. Результаты поиска по системе

2. Работа. 1 испытание на острую пероральную токсичность 

После откорма в дозе 10 г/кг м.т., никаких побочных признаков не наблюдалось в течение 14 дней. Не было явных симптомов отравления и смерти. Анатомическая экспертиза основных органов не выявила существенных аномальных изменений. Максимальная допустимая доза (МТР) при испытании на острую пероральную токсичность как у мышей, так и у мышей составляла > 10 г/кг мт. Экстракт цистанчи тубулозы практически нетоксичен.

2.2 мышь Тест полиморфофильного эритроцитного микронуклея костного мозга

После введения препарата микронуклеус костного мозга у мышей как в мужской, так и в женской дозировке существенно не изменился (количество исследуемых пцив составило 5000), а разница между скоростью эритрофильных микронуклея в каждой дозировке и отрицательной контрольной группе статистически не значительна (P >) 0,05 в то время как доля микронуклеев в группе позитивного контроля была выше, чем в группе отрицательного контроля, со статистически значимой разницей (P <) 0.01. Результаты микронуклеинового анализа цистанчевого туберкулеза были отрицательными. Результаты анализа микронуклея экстракта Cistanche tubiflora были отрицательными, как показано в таблице 1.

2. Работа. 3 тест на деформацию спермы у мышей

Скорость аберрации сперматозоидов у мышей мужского Пола существенно не изменялась каждой группой доз, и разница не была статистически значимой при сравнении с отрицательной группой контроля (P >) 0,05, в то время как коэффициент отклонения спермы у положительной контрольной группы был выше, чем у отрицательной контрольной группы, и разница была статистически значимой (P <) 0,01. - 1. Разница была статистически значимой (P <) 0.01, что указывает на то, что экстракт цистанчи тубулозы не оказывает какого-либо аномального воздействия на сперматозу мышей, как показано в таблице 2.

2.4 испытание на эймс   

Количество колоний-мутантов в каждой группе доз не более чем в два раза превышало количество самопроизвольных колоний-мутантов, и не было никакой зависимости дозы-отражения, в то время как количество самопроизвольных колоний-мутантов в позитивной контрольной группе было значительно больше, чем в самопроизвольных колониях-мутантов. Таким образом, мутагенное воздействие не наблюдалось в штаммах та97, та98, та100 и та1024 с добавлением S9 или без него, как показано в таблице 3.

Таблица 1Результаты анализа микронуклея на полихроматические эритроциты костного мозга мышей (x- ±s, n=5)

Примечание: по сравнению с отрицательной контрольной группой * P < 0.05.

Таблица 2Результаты теста на деформацию спермы у мышей

Примечание: по сравнению с отрицательной контрольной группой * P < 0.05.

Таблица 3Результаты теста Ames (x- ±s)

2. Работа. 5 тератогенный тест

Сравнение показателей и коэффициентов мертворождений беременных крыс и плода в каждой группе доз с соответствующими показателями контрольной группы не является статистически значимым (P >). - 0,05; Во внутренних органах плода в каждой группе не было обнаружено никаких деформаций, однако осмотр скелета животных в каждой группе доз и контрольной группе показал, что грудная клетка отдельных плода не была полностью осцифицирована. Согласно стандарту оценки тератогенности GB15193-2003, тератогенного эффекта в каждой группе доз обнаружено не было.

3. Iii. Выводы и рекомендации

Для того чтобы обеспечить более адекватную основу для разработки продуктов, связанных с Cistanchis tubulosa, в этом исследовании была проведена оценка безопасности экстракта Cistanchis tubulosa. Испытание на острую пероральную токсичность показало, что экстракт цистанчи тубулозы является практически нетоксичным при максимально допустимой дозе (МТР) > 10 г/кг мт; Результаты трех тестов на генотоксичность (тест микронуклея костного мозга (BMMT), тест на аномалии спермы (SAT) и тест эймса (AMT)) были отрицательными, что указывает на то, что образец не является мутагенным. Результаты трех тестов на генотоксичность (тест микронуклея костного мозга, тест деформации спермы и тест эймса) были отрицательными, что указывает на отсутствие мутагенного эффекта у образца. Cistanchis tubulosa экстракт имеет хорошую безопасность и может быть использован для разработки здоровой пищи.

Справочные материалы:

[1] национальная фармакопеевая комиссия. Национальная фармакопея людей#39; китайская республика: часть I [и]. Издание 2010 года. Пекин: химическая промышленность пресс, 2010: 126.

[2] хоу чжихуа, чан го вэнь. Ход фармакологических исследований по цистанчиакису [J]. Журнал китайской национальной медицины, 2003, 9(4) : 3-4.

[3] цзинь сюлиан, чжан цинжун. Прогресс химического состава чистанчикии [J]. Китайский журнал традиционной китайской медицины, 1994, 19(11): 695-697.

[4] ли юн, сян юаньцзюнь, цзя сяогуань и др. Влияние экстракта цистанчи тубулозы на кровяное давление, кислотность эритроцитной мембраны и вязкость всей крови у крыс, питаемых высокой солью [J]. Исследования и разработки природных продуктов, 2009, 21(5): 220 — 222.