Полезно ли фруктоолигосахариды для здоровья кишечника?
При производстве аквакультуры нерациональное использование антибиотиков может привести к бактериальной устойчивости, повредить кишечник и иммунитет животных, а его остатки в мясных продуктах и окружающей среде в конечном счете влияют на здоровье человека. Китай полностью запретил добавлять стимулирующие рост антибиотики для питания. Поэтому поиск кормовых добавок с тем же эффектом, что и антибиотики, для снижения производительности животноводства и птицеводства и увеличения смертности стал в настоящее время горячей точкой исследований. Благотворное влияние пробиотиков на здоровье кишечника подтверждено, но из-за тяжелых условий хранения, эффект их использования в корме нестабилен, и пребиотика считается хорошей альтернативой. Эта статья начинается с репрезентативного вещества пребиотики, олигофруктозы, и рассматривает его роль в поддержании кишечного здоровья животных и птицы, описывая его физико-химические свойства и физиологические эффекты.
1. Физико-химические свойстваСвойства олигофруктозы
Олигофруктоза имеет молекулярную формулу G-F-Fn (g-глюкоза, f-фруктоза, n=1-3), и является общим термином для класса углеводов, образующихся грау -1,2 гликоцидных связей молекул сукроза с несколькими D-fructose (Организация < < фанаро > >et al., 2010). Он устойчив к высоким температурам, имеет хорошую растворимость и стабилен в нейтральных растворах при 120 ° с. Однако его стабильность снижается по мере повышения кислотности и температуры. Его сладость немного ниже, чем у сукроза. Между 0 и 70 градусов вязкость фруктоолигосахаридов похожа на вязкость кукурузного сиропа с высоким содержанием фруктозы, и уменьшается с увеличением температуры. Он также препятствует старению крахмала, не очень хорошо окрашен, устойчив к щелочным воздействиям, удерживает воду, плохо впитывает влагу и обладает хорошей устойчивостью к плесени. Эти физические и химические свойства делают фруктоолигосахариды пригодными для использования в качестве отличных кормовых добавок (VandanA/данные отсутствуют.et al., 2015).
2 физиологические эффекты фруктоолигосахаридов
Кишечник животных является домом для большого числа микроорганизмов. В соответствии с взаимоотношениями между микроорганизмами и их хозяевами микроорганизмы в кишечнике могут быть разделены на семенные бактерии, условно патогенные бактерии и патогенные бактерии. При нормальных условиях бактериальная флора поддерживает баланс, благоприятный для организма, однако в условиях интенсивного ведения сельского хозяйства условно патогенные бактерии иногда могут стать инвазивными, а количество патогенных бактерий может превышать нормальные уровни, нарушая этот баланс и приводя к бактериальным заболеваниям (Zhang R.J., 2003). Fructooligosaccharides может предотвратить колонизацию экзогенных патогенов в кишечнике и избыточный рост эндогенных условно патогенов, тем самым поддерживая микроэкологический баланс кишечника.
Этот эффект обусловлен главным образом бактериостатическим эффектом короткоцепных жирных кислот, производимых бифидобактериями (уксусная кислота: соотношение молочной кислоты 3:2). Грау -1,2 гликозидные связи олигофруктозы не могут быть гидролизированы различными пищеварительными ферментами, выделяемыми животными, поэтому большая часть олигофруктозы может проходить через желудок и тонкую кишку без проблем. В толстой кишки полезные бактерии, такие как lactobacilli и бифидобактерии могут выделять ферменты, чтобы разорвать гравитационные -1,2 гликоцидные связи и размножаться, в то время как вредные бактерии не могут выделять эти ферменты. После благотворного распространения бактерий, они образуют фильм на слизистой оболочке кишечника, что делает его трудным для патогенных бактерий колонизировать. В то же время полезные бактерии могут также ферментируют большое количество жирных кислот, таких как уксусная кислота, пропионовая кислота и молочная кислота, получаемая фруктоолигосахаридами, что повышает кислотность кишечника и непосредственно препятствует росту патогенных бактерий (Munoz et al., 2012); Rober- froid et al., 2010; Callaway et al., 2009.
3Фруктоолигосахариды и здоровье кишечника
Отсутствует четкое определение здоровья кишечника животных, которое обычно включает эффективное пищеварение и усвоение питательных веществ, нормальную и стабильную флору кишечника, хороший иммунный статус и общее здоровое состояние. Она определяется главным образом тремя факторами: составом кормов, кишечным барьером и микробиоты (Pluske et al., 2018); Celi et al., 2017; Когут и арсено, 2016; Бишофф, 2011.
3.1 фруктоолигосахариды и кишечная флора
Fructooligosaccharides избирательно стимулирует рост бифидобактерий и лактобацилли, сдерживая при этом распространение вредных бактерий, таких как Escherichia coli, Clostridium perfringens и Streptococcus (Howard et al., 1995); FishbeВ случае необходимостиet al., 1988; Mitsuoka et al., 1987. В настоящее время большинство анализов кишечной микробной флоры основаны на методах, которые культивируют специфические бактерии. У свиней 4% олигофруктозы, добавленной к корму свиней, увеличило количество бифидобактерий в кишечнике (Modesto et al., 2009). Миккельсен и др. (- микельсен.et al., 2003) проанализировали фекалии отнятых свиней после добавления 4% олигофруктозы, и результаты показали, что это оказывает незначительное воздействие на физические и химические свойства и не оказывает существенного воздействия на другие микроорганизмы, за исключением стимулирования роста дрожжей. Однако они не анализировали микрофлору. Корм отнятых свиней с 5% олигофруктозой увеличил количество бифидобактерий и сократил количество эшерихической коли в проксимальной толстой кишке (1. Геббинкet al., 1999). Корм кур-бройлеров с 0,4% олигофруктозой в течение 14 дней не изменил общее количество бактерий в цекке, но выборочно увеличил количество бифидобактерий и бактерий (Цао (Cao)et al., 2005); Добавление 0,2%, 0,4% и 0,8% олигофруктозы в бройлеры, из которых 0,4% олигофруктозы может значительно способствовать росту бифидобактерий и лактобацилли в содержании тонкого кишечника и секи и препятствовать распространению Escherichia coli (Сюй (Xu)et al., 2003).
С быстрым развитием количественного флюоресценции, денатурансирующим градиентным гелевым электрофорезом и высокопроизводительными технологиями секвенирования она обеспечивает техническую поддержку углубленных исследований микробного разнообразия кишечника. Анализ воздействия олигофруктозы в размере 0,5% на илеальную микрофлору бройлеров с использованием градиентного градиентного геля электрофореза показал, что микрофлора изменилась (Geier et al., 2009). Добавление 0,25% олигофруктозы в корм бройлеров и анализ микрофлоры кишечника с использованием количественного флюоресцирующих ПЦР показали, что это увеличивает количество лактобацилли и уменьшает количество Clostridium perfringens и Escherichia coli (Kim et al., 2011). В исследовании Chen Fengmei et al. (2020) для изучения воздействия ежедневного обогащения 5 г олигофруктозы в сочетании с пробиотикой на кишечник лактующих телят используется генная последовательность 16С. SrRNA/данные отсутствуют.и базовый анализ альфа-разнообразия микробного сообщества. Результаты показали, что он оказал значительное влияние на изобилие кишечных микроорганизмов, значительно увеличив относительное изобилие рода бактериальных и значительно снизив относительное изобилие клостридиальных спорогенов, что в свою очередь значительно снизило частоту диареи.
3.2 фруктоолигосахариды и ферментация кишечника
Фруктоолигосахариды ферментируются полезными бактериями в индукте, чтобы производить молочную кислоту и уксусную кислоту, пропионовую кислоту, масляную кислоту и другие короткоцепные жирные кислоты, а также углекислый газ и метан. Большая часть органических кислот может быть поглощена, что означает, что fructooligosaccharides также может косвенно обеспечить часть энергии для хозяина. Органические кислоты также создают потенциально токсичные ионы аммиака, протонированные до образования NH4+, а молочная кислота повышает кислотность цекиты, что благотворно сказывается на росте молочных кислотных бактерий и бифидобактерий. Эти бактерии могут также использовать аммиак в качестве источника азота, тем самым уменьшая содержание аммиака в кишечнике и крови. При кормлении индюков-мужчин различные уровни олигофруктозы (0,5%, 1%, 2%) привели к уменьшению pH/ч.содержания илея и секи по мере увеличения содержания олигофруктозы, в то время как содержание жирных кислот не было подвержено воздействию, но накопление жирных кислот в илее увеличилось (Jus&.)#39; киевич и др., 2007 год. Добавление 8 г/д и 24 г/д олигофруктозы в рацион плода значительно увеличило общий объем летучих летучих жирных кислот, уксусной кислоты, масляной кислоты, пропионовой кислоты и молочной кислоты в фекалиях (Berg et al., 2005); Олигофруктоза может увеличить содержание короткоцепных жирных кислот в свиных фекалиях и мышечных кишках (Anthony et al., 2009; Ли сун юнг и др., 2003 год; Добавление 5% олигофруктозы в корм мыши может значительно увеличить содержание пропионовой и масляной кислот, но не влияет на общий летучих 020.
3.3 фруктоолигосахариды и кишечный барьер
Пребиотика, такая как fructooligosaccharides, может регулировать морфологию, структуру и функции слизистой оболочки кишечника, такие как высота кишечного вилли, глубина склепов, толщина эпителиального слоя, количество эпителиальных клеток, количество митозных клеток, слизистых клеток и клеток гоблита. Эти изменения кишечника могут способствовать пищеварению и усвоению питательных веществ. Механизм этих изменений может исходить из следующих аспектов: (1) ферментируемые сахара могут влиять на уровень глюкагона кишечника для регулирования распространения криптоклеток в тонком кишечнике (Gee et al., 1996); (2) пребиотика способствует синтезу полиамина, который может позитивно регулировать рост и развитие кишечной и кишечной слизистой (- делзенн.et al., 2000); (3) пребиотика может повысить активность пищеварительного фермента, что может способствовать росту и трансформации тонкой слизистой оболочки кишечника (Yang et al., 2005); (4) увеличение синтеза короткоцепного жирного кислотного синтеза также способствует распространению больших и малых кишечных клеток, что может улучшить пищеварение и усвоение питательных веществ кистью границы путем регулирования высоты кишечного волокна и глубины склепов.
Добавление 0,25% олигофруктозы в свиной корм может увеличить высоту волокна в проксимальном тонком кишечнике и соотношение высоты волоса к глубине склепки (Shim, 2005); 0,4% и 0,6% олигофруктозы могут увеличить высоту поселка в свинине jejunum и отношение высоты поселка к глубине склепа (Сюй (Xu)et al., 2002); Олигофруктоза может увеличить скорость распространения эпителиальных клеток слизистой оболочки в цеке и толстой кишке сосущих свиней и предотвратить атрофию эпителиальных клеток слизистой оболочки (Howard et al., 1995); Было установлено, что добавление 0,4% олигофруктозы в рацион значительно увеличивает высоту поселка и соотношение высоты поселка к глубине склепа в jejunum и ileum цыплят, в то время как глубина склепа была значительно уменьшена. Однако добавление 0,8% олигофруктозы не дало этого эффекта (Xu et al., 2003); 0.5% олигофруктоза может значительно улучшить высоту, глубину склепа и эпителиальную толщину бройлера ileum, но не влияет на дуоден и jejunum (Shang et al., 2014); Добавление 0,4% и 0,6% олигофруктозы значительно увеличило глубину склепа и плотность клеток (jean et al., 2003); Добавление 4 г/г олигофруктозы и 6 г/г олигофруктозы в корм ранних отнятых от груди телят может увеличить высоту кишечника и толщину слизистой оболочки кишечника (Tai et al., 2009).
3.4 олигофруктоза и иммунитет
Животный кишечник-это место, где взаимодействуют кишечные микроорганизмы, иностранные антигены и иммунная система. Влияние пребиотики, такой как олигофруктоза, на иммунную функцию домашнего скота еще не до конца изучено. Возможные механизмы включают: (1) прямую связь с воздействием молочных кислотных бактерий или их продуктов на иммунные клетки; (2) продукты ферментации короткоцепных жирных кислот могут стимулировать увеличение количества т лимфоцитов в желудочно-кишечном тракте; (3) путем регулирования производства слизистых веществ увеличить количество клеток гоблет (Schley иField, 2009). Пребиотика может регулировать функцию и тип кишечной лимфоидной ткани, особенно Peyer's пятна, вторичные лимфоидные фолликулы и клетки в периферической циркуляции (Организация < < самал > >et al., 2009). У свиноматок, питавшихся 10 г/д fructooligosaccharides, наблюдалась тенденция к увеличению коэффициента роста β1 в молозиме, что привело к увеличению концентрации ига, увеличению интерфероновой гравитационной концентрации, выделяемой Peyer' пятна и брыжеечные лимфоциты, а также увеличение ига, скрываемой Peyer's патч-клетки. Интерферон граван ассоциируется с активированными лимфоцитами (Cindy et al., 2014). Добавление 0,5% олигосахарида в бройлере может уменьшить долю лимфоцитов в чекальных миндалях и увеличить содержание IgС. О.в крови и IgG. Г.(Janardhana et al., 2009).
4. Резюме
В настоящее время исследования по применению олигофруктозы в кормах для животных сосредоточены главным образом на свиньях и цыплятах, и имеется мало сообщений о ее применении в других видах домашнего скота и птицы, таких как крупный рогатый скот, овцы и кролики. Отсутствуют также фундаментальные и механические исследования в этой области. Поэтому необходимо продолжить изучение эффекта и механизма применения олигофруктозы в животноводстве и птицеводстве. Дальнейшее развитие методов молекулярной биологии, таких как высокопроизводительная секвенирование, привнесло новые идеи в изучение олигофруктозы.
Ссылки на статьи
[1] чэнь фенгмей, чэн гуанмин, гу тиантиан и др. Влияние сложного микробного препарата в сочетании с олигофруктозой на показатели роста, скорость диареи и микробиоту кишечника лактующих телят [J]. Журнал питания животных, 2020, 32 (8): 3896 ~ 3905.
[2] гао шиян, ван йиру, ван янбо. Исследования по применению пробиотики в аквакультуре [J]. Feed Research, 2011, 5: 21 — 23.
[3] он чен. Исследование пребиотического эффекта четырех функциональных сахаров у мышей [D]. Хэбэйский инженерный университет, 2020.
[4] тай сюлин, лонг сян, сян чжао и др. Влияние олигофруктозы на слизистую оболочку кишечника и иммунные показатели ранних отнятых телят [J]. Китайский журнал животноводства, 2009, 45(7): 36-39.
[5] тан ли, лей мин, се сяохонг и др. Прогресс в исследованиях и перспективы применения пребиотики в кроличьем корме [J]. Современное животноводство, 2018, 428(24): 17-19.
[6] чжан сюань, ху кайхун, сюй зиронг. Влияние фруктоолигосахаридов на рост, кишечную флору и морфологию кишечника бройлеров [J]. Китайский журнал ветеринарной медицины, 2003, 23 (2): 196 ~ 196.
[7] чжан р. исследования по абсорбции и метаболизму питательных веществ микроорганизмами и хозяевами пищеварительного тракта [J]. China Feed, 2003, 2: 11 ~ 14.
[8] Энтони р, птица. Сравнительный эффект крахмала с высоким амилозом a фруктуолигосахарид По состоянию на По категории общего обслуживания Бифидобактерии (бифидобактерии) 1. Число 1 И короткоцепные жирные кислоты у свиней скармливают бифидобактерии animalis[J]. Ди - - Гестические заболевания и Наука,2009,54(5):947 ~ 954.
[9] Berg E L,Fu CJ,Porter J H,et al.fr [J]. Журнал о животных Пси - - Енс,2005,83(7):1549 ~ 1553.
[10] Bischoff с.' кишечное здоровье и#39; новая цель в медицине [J]. BMC. C.Medicine,2011,9:24.
[11] Callaway T R - дауд с и ,Wolcott R D, и др. оценка С помощью бактерий Разнообразие в системе организации Организация < < секал > > - содержание Кур-несушек кормили по-разному Литые диеты с использованием бактериального кодированного FLX X X XamplicПо состоянию наpyrosequ[J].Poult,2009,88(2):298 ~ 302.
[12] Cao B. H/ч. По городу, г. карасава у - привет, го. у С. О. .эффекты Соединенные Штаты америки - зеленый цвет Чай полифенолы и Fructo-oligosaccharides в полуочищенных диетах на производительности бройлеров и Организация < < кэкал > > 1. Микрофлора и Метаболиты [J]. Asian Australasian Журнал по темеСоединенные Штаты америкиAnimal Sciences,2005,18 (1):85 ~ 89.
[13] сили п Ковисон а джей - фру-нджи F,et и Желудочно-кишечный фанк В случае необходимости - на животных. Питание и питание и Охрана здоровья: Новая версия сайта Возможности для есз - Доступное животноводство [J]. Наука о кормах для животных и Технологии, 2017,234:88 ~ 100.
[14] синди л би, феррет-Бернард стефани, Лоренс л н, и др. ма Влияние короткоцепных фруктоолигосахаридных добавок - кишечник. Иммунитет от болезней В системе организации объединенных наций Созревание (созревание) В случае необходимости - свиньи! [J]. 2. Ноо Один, 2014,9(9):e107508.
[15] Delzenne N. П. С. О. Москва, Москва, Россия N. П. - привет, делойер. P,et и Аль.диетическое питание Фруктаны модулируют концентрацию полиамина в цексе крыс [J]. Журнал питания,2000,130(10):2456 ~ 2460.
[16] Fanaro С. S - привет, гюнтер. Бом, гарссен. Привет J,et и Al.Galacto -oligosac- колесницы и длинноцепные fructo -oligosaccharides как 6. Пребиотикаin in-fant формулы: обзор [J]. Acta Paediatrica,2010,94(s449):22 ~ 26.
[17] фишбейн л, каплан м, гоф м Fr. Uctooligosaccharides :a re- вид.[J]. Ветеринарная и токсикология человека,1988,30(2):104 ~ 107.
[18] Gebbink G - привет, саттон. - а, ричер B, и др. эффекты добавления Fructooligosaccharide (FOS) и сахарной свеклы от целлюлозы до отнятой свиньи di- В наличии: Представление, микрофлора и - кишечник. В области здравоохранения [J]. Acess, 1999,12:53 ~ 59.
[19] джи джей м - лефиглас W - привет, уортли. G W, и др С высоты над уровнем моря Плазма и плазма Энтероглюкагон, но высокая вязкость необходима также для стимулирования небольшого распространения слизистых клеток кишечника у крыс [J]. Журнал питания,1996,126(2):373.
[20] Geier С. О.S,Torok V. Категория VA,AllisПо состоянию наG E,et al.Indigestible carbo- Гидраты изменяют микробиоту кишечника, но не влияют на per- 3. Форма - в бройлере. - цыплята. [J]. Журнал по теме Прикладной микробиологии, 2009,106(5): 1540 ~ 1548.
[21] GibsПо состоянию наG R,- роберфруа.С. О.B.диетаmodulatiПо состоянию наСоединенные Штаты америкиВ настоящее времяhuman 1. Колония 1microbiota: представление концепции пребиотики. [J]. Журнал питания,1995,125(6):1401 ~ 1412.
[22] Howard С. О.D,Gordon D T,Pace 1. ОW и др с Фруктовые туолигосахариды on colonic Микробиоты и распространение эпителиальных клеток у новорожденных свиней [J]. J Pe - Гастроэнтерол нутр,1995,21(3):297 ~ 303.
[23] джанардхана V - на бродвее. M M M ,Bruce M P,et al.Prebiotics модулируют иммунную реакцию при связанном с гутом лимфоидном тисе-гусеница кур [J]. Журнал питания,2009,139(7):1404 ~ 1409.
[24] до свидания#39; киевич дж., янковский и др. Влияние диеты с различным содержанием олигофруктозы на продуктивность и желудочно-кишечную и метаболическую систему индюшек [J]. Feed Expo: техническое издание, 2007, 3: 62.
[25] Kim G B,Seo Y M,Kim C. C.H,et al.Effect Соединенные Штаты америкиfood prebiotic on В настоящее время Производительность, кишечник Микрофлора, и Im-реакция муна бройлеров [J]. Наука о птице,2011,90(1):75.
[26] когут м - арсено, Р п. .редакция: кишки Охрана здоровья: В настоящее время Новая парадигма в пищевом животноводстве [J]. Границы в ветеринарии Sci-ence,2016,3:71.
Ли сун юн, чо чон хва, ли кён э. Последствия для окружающей среды Из фрукта-туолигосахарида и фруктоолигосахарида содержащие губку торт На липидах крови, функции кишечника и короткоцепной жирной кислоте Pro- duction у крыс [J]. Корейский журнал "Journal" Питание,2003,36(4): 344 - 351 год.
[28] Mikkelsen 1. О 1. О Г-н якобсен M Дженсен би би .эффекты of Диетические олигосахариды on На микробной основе Разнообразие форм собственности и Fructo -oligosaccharide унизительные бактерии в фекалиях свиней после отъеживания [J]. Наука о кормах для животных и Технологии,2003,109(1 ~ 4):133 ~ 150.
[29] Mitsuoka T,Hidaka H,Eida T.Effect offructooligosaccharides on кишечную микрофлору [J]. Питание/Nahrung,1987,31(5 ~ 6):427 ~ 436.
[30] модесто м, д "Aimmo M R,Stefanini I,et al.A novel strate — gy to Выберите штаммы бифидобактерий и 6. Пребиотика По состоянию на 31 декабря По окружающей среде Стимуляторы роста у свиней, недавно отнятых от груди [J]. Наука о животноводстве,2009,122(2 ~ 3):248 ~ 258.
[31] муньос M Москва, Москва, Россия A - сиджей альмесига - диас, и Al.Fruc - Метаболизм туолигосахаридов и воздействие на бактериологическое производство в штаммах лактобацилла, изолированных от сенсированной кукурузы и мелассы [J]. Анаер — обе,2012,18(3):321 ~ 330.
[32] Pluske J R,Turpin D L,Kim J C Здоровье желудочно-кишечного тракта (кишечника) у молодой свиньи [J]. Корм для животных,2018,4(2):187 ~ 196.
[33] - роберфруа. M .пребиотика: the Концепция организации объединенных наций К этому вопросу вернемся. [J]. Журнал Питание,2007,137(2):830.
[34] Roberfroid - м, гибсон Джи, хойлз, пожалуйста L,et, - аль.пребиотик Воздействие: 3. Метаболизм и В области здравоохранения Преимущества и выгоды [J]. Великобритании и северной ирландии Journal of Питание, 2010,104:51 ~ 63.
[35] Samal L . Пребиотика: ан Новые технологии и технологии Питание и питание Ii. Подход Для улучшения кишечного здоровья домашнего скота и птицы [J]. Журнал < < Азия джорнал > > Животных и ветеринарных достижений,2009,10(11):724 ~ 739.
[36] шли п По программе, поле C C J - укрепление иммунитета Последствия для окружающей среды Ди-с-с Изделия из волокон и prebiotics [J]. < < бритиш джорнал > > Питание,2002,87 (S2):S221 ~ S230.
[37] шанг и Г-н ким дж. H Ким у. К. К. .Dietary фруктуолигосахарид Добавки в качестве альтернативы антибиотикам по показателям роста, морфологии кишечника и иммунной реакции бройлера Цыплята [A].
Ежегодное совещание участников PSA 2014.
[38] М: Сим (фр.) S B. последствия Пребиотики, пробиотики и Синбиотика (synbiotics) in - диета. По правам человека Пигс. докторская диссертация, животное Питание и питание Группа, вагенин-институт ген - на животных. Наука, вагенинген Университет и другие учебные заведения По-прежнему - Центр поиска, вагенинген, Нидерланды,2005 год.
[39] Вандана, бали, пармджит и др Al.fr. Ucto -oligosaccharides: Продукт-очищение and B. потенциальные возможности Применение программного обеспечения [J]. В важнейших проблемных областях Обзоры в Food Science & Питание,2015,55(11): 1475 ~ 1490.
[40] Xu 1. Z Ч, цзоу X Д, у, у C H, и др. эффекты В рационе питания Fructooligosaccharide on Digestive Enzyme Activities,Intestinal Microflo- ra и Morphology of Growing Pigs [J]. Asian-Australasian Journal of Animal Sciences,2002,15(12): 1784 ~ 1789.
[41] Xu 1. Z Ч, ху C H,Xia M С, и, и Al.Effects (аль.эффекты) of Питание с пищей фруктуолигосахарид on 3. Пищеварение 1. Фермент Деятельность, кишечник 1. Микрофлора И морфология самец 1. Бройлеры [J]. Мясо птицы и птицы Наука,2003,82(6): 1030 ~ 1036.
[42] янь с ,Chen J Y,Shang H F,et al.Effect of synbiotics На кишечной микрофлоре и деятельности пищеварительного фермента у крыс [J]. 2005,11(47):7413 ~ 7417.