Как получить D тагатозу методом ферментации?

D- тагатоза представляет собой шестиуглеродный кетоз и изомер d-галактозы. Чистый d-тагатозе нелегко найти, так как он находится только в жвачке, скрытой деревом стеркулия сетигера. Небольшое количество d-тагатозы также содержится в пастеризованном молоке, горячем шоколаде, сыре и сырных продуктах. Поскольку только около 20% d-тагатозы может быть поглощен тонким кишечником после потребления, он в основном не производит калорий и не вызывает колебаний сахара в крови. С другой стороны, д-тагатоза может предотвратить образование кариеса зубов, а также может быть использована микроорганизмами в кишечнике для развития определенных пробиотиков [1]. В последние годы в связи с повышением уровня жизни и распространением таких заболеваний, как ожирение и диабет, все чаще раздаются призывы использовать d-тагатозу в качестве функционального подслащающего средства вместо сукроуз, что привлекает к себе большое внимание.

- бидл. - бидл.et al. [2] изобрели процесс производства d-тагатозы из изомерной d-галактозы с использованием Ca(OH)2 в 1991 году. D- галактозу можно получить путем гидролиза лактозы или более доступной сыворотки (отходы производства молочных продуктов), а стоимость процесса приемлема для рынка. Однако этот метод требует использования большого количества сильной кислоты для нейтрализации раствора реакции, который может привести к загрязнению сточных вод; Кроме того, существует много побочных продуктов реакции, что затрудняет разделение по течению. Читам и др. [3] обнаружили, что l-арабинозный изомер (L-AI фермент, EC. C.5). 3. 1. 4. Может стимулировать производство d-тагатозы из d-галактозы. В последующие 20 лет в результате проверки ферментов, экзогенного выражения и характеристики различных типов микроорганизмов ученые обнаружили различные L-AI ферменты, пригодные для промышленного производства Д-тагатозе (D-tagatose)L-AI ферменты, пригодные для промышленного производства D-tagatose; Установлено, что они в основном обладают характеристиками высокой скорости преобразования d-галактозы, хорошей термостойкостью фермента, а оптимальным каталитическим pH/ч.фермента, как правило, являются кислотными условиями, пригодными для промышленного производства (pH/ч.от 5,0 до 6,0) [4].

С другой стороны, генная инженерия дикого фермента L-AI с использованием молекулярных биологических методов может также эффективно повысить потенциал промышленного применения дикого фермента; Это нашло свое отражение главным образом в создании структурной модели L-AI фермента с использованием технологии компьютерного молекулярного моделирования и рациональной конструкции важных остатков аминокислоты в ферменте. Что касается каталитических процессов, то технология пакетного преобразования иммобилизованных клеток/ферментов позволила добиться определенных результатов; Однако такие проблемы, как низкие коэффициенты преобразования субструтов, длительные циклы реакции и короткий период полураспада фермента, остаются узкими местами в этой технологии. Кроме того, неотложная задача разработки более безопасного пищевого фермента L-AI экзогенного выражения для замены рекомбинантной EscherichiA/данные отсутствуют.1. Колиявляется неизбежной. В настоящее время американская компания Spherix проводит III этап клинических испытаний d-тагатозы для лечения сахарного диабета 2 типа [5].

Если испытания будут успешными, Д-тагатозе (D-tagatose)будет иметь широкие перспективы в области биомедицины, а также создаст еще более срочный спрос на биологические производственные процессы. Автор сочетает в себе результаты исследований, проведенных исследовательской группой в последние годы по L-AI ферменту и биотехнологическому производству D-tagatose, чтобы обеспечить обзор скрининга и применения L-AI фермента, исследования по модификации генной инженерии, а также применения технологии иммобилизации, с целью обеспечить основу для экологически чистого производства новых функциональных подсладителей, таких как D-tagatose.

1 исследование источника и свойств L-AI фермента

Известные в настоящее время L-AI ферментов были получены из прокариотических микроорганизмов путем клонирования и иностранного выражения, включая Бациллы (Bacillus)subtilis [6], Lactobacillus plantarum [7], 1. Ацидотермусthermophilus [8], - геобакиллСтеаротермофил. - да[9] и Thermus thermophilus [10] (таблица 1. Политика 1.

Как видно из таблицы 1, вполне возможно, что в силу весьма различных условий жизни этих микроорганизмов каталитические свойства ферментов L-AI из различных источников также значительно различались после долгосрочной естественной эволюции.

1. Оптимальная температура для реакции d-галактозы изомеризации различна и, согласно сообщениям, варьируется от 15 до 95 градусов. Среди них L-AI ферменты из ShewanellA/данные отсутствуют.sp. Ана -3 и Lactobacillus sakei 23K могут стабильно катализировать при низких температурах 4 градуса [11-12], в то время как - аноксибациллокружающей среды очень отличается. После длительной естественной эволюции каталитические свойства ферментов L-AI из различных источников также существенно различались.

1. Оптимальная температура для реакции d-галактозы изомеризации различна и, согласно сообщениям, варьируется от 15 до 95 градусов.

Среди них, L-AI ферменты из Shewanella sp. Ана -3 и Lactobacillus sakei 23K могут стабильно катализировать при низких температурах 4 °C [11-12], в то время как Anoxybacillus Флавитермус (флавитермус)L-AI ферменты могут поддерживать ферментную активность при экстремальных температурах 95 °C [17]. В целом, L-AI ферменты можно разделить на три категории в соответствии с их оптимальной температурой реакции: мезофильные L-AI ферменты, термофильные L-AI ферменты и гипертермические). Их оптимальная температура реакции меньше 60 градусов, между 60 и 80 градусов, и между 80 и 95 градусов, соответственно [18]. Среди них термофильный тип считается более подходящим для промышленного производства d-тагатозы, главным образом потому, что гиббса свободной энергии, необходимой для реакции изомеризации от d-галактозы до d-тагатозы является высокой (4,96 КДЖ/моль), относительно высокая каталитическая температура требуется для получения высокой скорости преобразования. Тем не менее, чрезмерно высокая температура приведет к реакции браунинг, что повлияет на качество продукта. Поэтому большинство ученых считают, что температура реакции от 60 до 70 градусов является наиболее подходящей [1, 4].

2. Оптимальная реакция pH варьируется и, согласно сообщениям, варьируется от 5,0 до 10,5. Большинство ферментов L-AI имеют оптимальный каталитический показатель pH от 7,5 до 8,5, но промышленное производство требует оптимального каталитического pH в кислотном диапазоне, чтобы избежать неспецифических побочных реакций, вызванных условиями щелочной реакции, и соответствовать кислотному pH, требуемому для гидролиза лактозы, избегая неоднократных корректировок и упрощения производственного процесса [1, 4].

3. Различные требования к ионам металлов. Большинство L-AI ферментов требуют ионы металлов, чтобы оказывать ферментативную активность и поддерживать тепловую устойчивость. Среди них наиболее распространенными являются Mn2 + и Co2 + ионы. Однако Co2 + не может быть использован в пищевой промышленности, поэтому L-AI ферменты, которые сильно зависят от Co2 +, имеют относительно ограниченное промышленное применение [10]. Интересно отметить, что ферментная активность L-AI от Бациллы (Bacillus)1. Галодураныи Бациллы (Bacillus)Стеаротермофил. - даСоединенные Штаты америкине уменьшилась после лечения EDTA. Возможные причины заключаются в Том, что эти два фермента не зависят от ионов металла, или активный центр фермента обладает сильной способностью связывания ионами металла, и ионы металла не легко отделяются [16].

4. Существуют значительные различия в специфике субстратов. Например, L-AI ферменты, полученные из Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis, способны лишь катализировать Г-н арабинозе[6, 13] и не могут катализировать d-галактозу, которая является очень особенной в L-AI ферменты семейства; Они пригодны для изучения селективности субстратов ферментов L-AI.

4. Различная каталитическая эффективность d-галактозы. Каталитическая эффективность (значение kcat/Km) почти всех ферментов L-AI для Г-н арабинозезначительно выше, чем для D-- галактоза., поэтому каталитическая эффективность L-AI ферментов для D-galactose, как правило, низкая. Однако ченг и др. [15] обнаружили, что L- ai фермент, получаемый из целлюлолитики ацидоthermus ATCC43068, обладает относительно высокой каталитической эффективностью (kcat/Km = 9,3 ммоль /(л · мин)) для d-галактозы. Рахим и др. [12] получили фермент L-AI из штамма Lactobacillus sakei 23K, который можетКатализатор d-галактозы при низких температурахИ в кислотной среде. Его значение kcat/Km для d-галактозы достигает 10,3 ммоль /(л · мин), что является самым высоким значением, указанным в литературе до сих пор.

Что касается промышленного производства d- тагатозы, то если термофильный, кислотно-стойкий, независимо от металла L-AI фермент с высокой каталитической эффективностью для d- галактозы может быть проверен, это значительно облегчит технологический прогресс. Исследовательская группа, к которой я принадлежу, проверила штамм лактобациллуса ферментума, который производит L-AI фермент из традиционных маринованных огурцов [19-20]. Гены кодирования L-AI фермента, содержащиеся в этом штамме, были обнаружены экзогенно выраженными, а рекомбинантный L-AI -AI фермент катализирует d-галактозу при оптимальной температуре 65 градусов и оптимальном pH 6,5, с каталитической эффективностью 9,02 ммоль /(л · мин), демонстрируя определенный потенциал промышленного применения [14, 21].

2 генная инженерия L-AI фермента

Учитывая, что существуют возможности для улучшения фермента L-AI, используемого в настоящее время в производстве d-тагатозы, были предприняты усилия для его рационального изменения на молекулярном уровне. В 2006 году была успешно решена кристальная структура L-AI фермента из Организация < < эшерихия > >1. Коли(номер присоединения к базе данных PDB: 2AJT/2HXG), которая заложила структурную биологическую основу генной инженерии L-AI фермента [22]. В последние годы технология прямой эволюции и мутагенез под руководством компьютерной гомологии стали эффективными средствами модификации фермента L-AI. В качестве важных показателей промышленного применения больше внимания стало уделяться изменению ферментной активности, оптимальной температуре реакции, оптимальной реакции pH и селективности субстритов (таблица 2).

Исследования, посвященные роли основных остатков аминокислот, в основном посвящены ферментам L-AI из Bacillus stearothermophilus. Rali et al. [23] провели молекулярное моделирование пространственной структуры B. stearothermophilus Соединенные Штаты америкиL-AI фермента и по месту действия мутировали 175 - ю аминокислоту. Таким образом, мутант (N175H) получил более широкий оптимальный температурный диапазон реакции (50-65 °C), чем дикий фермент, и по сравнению с диким ферментом (80 °C), который имеет более высокую оптимальную температуру реакции, мутант полезен для предотвращения браунга побочных реакций во время производства. О и др. [27] результаты, полученные в качестве основы для дальнейших исследований мутаций на местах, показали, что при изменении 408 - й аминокислоты фермента G. стеротермимофилуса L-AI с нейтральной аминокислоты на полярную или базовую аминокислоту оптимальная реакция pH штамма мутантов значительно снижается (с 8,5 до 7,5).

Предполагается, что это связано с тем, что это положение близко к активному центру L-AI фермента, поэтому изменение полярности аминокислоты может привести к изменению распределения заряда микросреды каталитического центра, тем самым повышая способность L-AI фермента катализировать субстрат в кислотных условиях. О и др. [28] пришли к выводу о Том, что бензольное кольцо аминокислоты 164 и размер боковой цепи аминокислоты 475 оказывают значительное воздействие на способность фермента L-AI катализировать d-галатозу путем мутагенеза под контролем участка многочисленных важных остатков аминокислоты фермента G. thermodenitrificans L-AI. - лактоза. Его двойной мутант C450S-N475K имеет 5- кратное повышение каталитической эффективности для D-galactoseА коэффициент преобразования d-галактозы увеличился с 46% до 58%. В 2010 году P rabhu et al. [25] использовали гомологическую модель для анализа остатков аминокислот в каталитическом центре B. licheniformis L-AI и вблизи него и выборочно мутировали несколько участков. Результаты показали, что мутант (Y333A) полностью утратил способность катализировать l-арабинозу. Автор считает, что расстояние между основными остатками аминокислоты в каталитическом активном центре и субстратом определяет каталитическую способность. Поэтому сохраняемые остатки аминокислоты вблизи каталитического центра имеют важное значение для субстратной специфики фермента L-AI. Это дает идеи для изменения субстратной специфичности L-AI фермента.

3 производство d-тагатозы с использованием технологии иммобилизации

В качестве наиболее эффективного биологического метода производства d-тагатозы на сегодняшний день была глубоко изучена технология иммобилизации клеток/фермента для производства d-тагатозы, и были разработаны различные производственные процессы (таблица 3).

3.1 производство d-тагатозы с использованием иммобилированной клеточной технологии

Метод использования альгината натрия для иммобилизации рекомбинантных клеток кишечной палочки для производства d-тагатозы давно находится в поле зрения ученых. Этот метод отличается высокой оперативностью, надежностью и дешевизной и имеет потенциал промышленного применения. Как правило, после промышленного выражения рекомбинантные клетки кишечной палочки E. coli могут использоваться для катализа d-галактозы после их встраивания в альгинат натрия и обработки с помощью CaCl2. В работе Гонконг (США)et al. [35] создана стабильная и недорогая технология производства d-тагатозы с использованием альгинально-иммобилированных рекомбинантных клеток E. coli натрия. Клетки коли для производства d-тагатозы.

Он имеет период полураспада 43 суток и производит d-тагатозу высокой чистоты (> 99%) после разделения ионным обменным столбиком. Однако использование Организация < < эшерихия > >coli в качестве штамма для производства d-тагатозы сопряжено с риском для безопасности; Поэтому одним из будущих направлений исследований могла бы стать разработка более безопасной технологии производства обездвиженных клеток с использованием пищевых микроорганизмов. Автор использовал штамм Lactobacillus fermentum CGMCC2921пищевого класса для производства иммобилизации клеток для производства d- тагатозы методом интродукции альгината натрия и перекрестного соединения глутаральдегида. При условии добавления борной кислоты, скорость преобразования d-галактозы в d-тагатозу может достигать 60%, с выходом 11,1 г /(л · ч). В течение восьми партий конвертации (в общей сложности 192 ч) значительного снижения коэффициента конвертации отмечено не было [37]. Вместе с тем для достижения стоимостных требований промышленного производства необходимо провести углубленные исследования по вопросу о высокоплотном культивировании и эффективном выражении производственной нагрузки.

3.2 производство d-тагатозы с использованием иммобилизованных ферментов

Производство d-тагатозы с использованием иммобилизованного фермента может достичь высокой интенсивности производства, но требует сложного процесса очистки фермента. Ким ким кимet al. [31] использовали альгинат натрия для инкапсулирования термофильного L- ai фермента для производства d-тагатозы с производительностью 13,3 г /(л · ч). Рю (Ryu)et al. [30] использовали метод интродукции альгината натрия для обеззараживания очищенного фермента G. stearothermophilus L-AI, а затем использовали биореактор в пакованном слое для производства d- тагатозы. После изучения таких факторов, как оптимальное соотношение высоты и диаметра реакционного слоя, они успешно получили производительность 54 г /(л · ч), что является самым высоким значением, указанным в литературе на сегодняшний день. Юнг и др. [34] полагают, что причиной высокой урожайности д-тагатозы, полученной с использованием иммобилизованного фермента, является то, что после очистки фермент л-аи не подвергается воздействию других белков организма после иммобилизации, а биоокатализ может протеироваться с наиболее идеальной тенденцией реакции; В то время как иммобилизованные клетки содержат большое количество принимающих белков, присутствие этих белков имеет значительный стерильный эффект помехи, что приводит к гораздо более низкой d-тагатозы выход при использовании иммобилизованных клеток.

Кроме того, иммобилизованный L-AI фермент технология может также эффективно улучшить свойства L-AI фермент. Лианг (Liang)et al. [38] использовали альгинат натрия для встраивания фермента L-AI, полученного из загара. Матраний, и оптимальная температура реакции иммобилизованного фермента после встраивания была значительно улучшена (с 60 до 75 градусов). От 5 до 8. 0 может поддерживать более 80% активности фермента, и эти данные гораздо лучше, чем свободные ферменты. В работе Jebors et al. [39] впервые использовались полимерные материалы Noria/NoriaPG для иммобилизации фермента Lactobacillus sakei L-AI, и стабильность этого фермента при высоких температурах и низких значениях pH была повышена по сравнению со свободными ферментами.

4. Повышение урожайности д-тагатозы путем изменения равновесия химической реакции

В реакции L-AI фермент изомера d-галактозы, некоторые вещества с высокой степенью родства к продукту d-тагатозы (например, борическая кислота) могут координировать с ним, чтобы отделить его от реакции, в результате чего уменьшается продукт в растворе и сдвиг в химическом равновесии в сторону формирования продукта. Организация < < лим > >et al. [40 впервые использовали бориновую кислоту для повышения коэффициента преобразования d-галактозы в d-тагатозу с использованием очищенного термофильного L-AI фермента до 77,4%, что является самым высоким коэффициентом преобразования, полученным с использованием L-AI фермента для подготовки d-тагатозы. Образовавшийся комплекс d-тагатоса-бориновой кислоты растворим в метаноле, и бориновая кислота может быть удалена путем испарения, не влияя на чистоту продукта. Поэтому данный метод имеет большие перспективы применения. Дальнейшие исследования показали, что каталитическая эффективность L-AI фермента на субстрате значительно повышается при наличии борной кислоты. 1. Лиet al. [17] сообщили, что каталитическая эффективность (ккат/км) фермента Anoxybacillus flavithermus L- ai на d-галактозе увеличилась с 5,16 ммоль /(л · мин) до 9,47 ммоль /(л · мин) с добавлением бориковой кислоты, т.е. на 83,5%.

5 производство редких сахарных смесей, содержащих d-тагатозу, путем комбинированного действия L-AI фермента и коммерческого фермента

Лактоза гидролизируется для получения равноценной смеси глюкозы и д-галактозы. Глюкоза не участвует в производстве d-тагатозы и поэтому может использоваться для производства других редких сахара. - йоргенсен.et al. [32] первыми сообщили об использовании лактозы в качестве сырья для производства смешанного сиропа, содержащего д-тагатозу и фруктозу, с использованием имфрицированного фермента L- AI, грава-галактозидазы и коммерческого изомера глюкозы для производства смешанного сиропа, содержащего д-тагатозу и фруктозу из лактозы, с тем чтобы в полной мере использовать глюкозу для увеличения добавленной стоимости продукта. Rими et al. [41] использовали альгинат натрия для инкапсулирования генетически модифицированных бактерий, одновременно выражающих термостабильный L-AI фермент и изомеры глюкозы, и успешно производили d-тагатозу и фруктозу в непрерывной партии, используя в качестве сырья биологический упакованный слой с гидролизатом лактозы. Вместе с тем разделение компонентов в смешанном сиропе по-прежнему требует поддержки технологических исследований на последующих этапах и в настоящее время находится лишь в стадии изучения.

6 отделение и очистка д-тагатозы

Цель технологических исследований на последующих этапах заключается в налаживании эффективного процесса разделения и извлечения d-тагатозы. D- тагатоза в растворе преобразования может быть отделена путем экстракции органическим растворителем. Xu Guiqiang et al. [42] для отделения d- тагатозы использовали фенилбороническую кислоту-кватерничный аммиачный ионный жидкий растворитель с коэффициентом извлечения 65,7% и коэффициентом рекуперации 92,3%. Однако с учетом потенциальных рисков для безопасности пищевых продуктов и проблем загрязнения окружающей среды, связанных с системами органических растворителей, этот метод может оказаться непригодным для широкомасштабного использования. Поскольку d-тагатоза и d-галактоза являются различными формами альдопентозов, они могут быть разделены с помощью ионно-обменных смол. Хуан венся и др. [43] использовали ионно-обменную смолу типа Ca2+ для очистки d-тагатозы, синтезированной химическим методом, получая d-тагатозу с чистотой 98% и коэффициентом восстановления 83%. Опресненная d-тагатоза может быть кристаллизована с помощью этанола для получения чистого d-тагатозы. Этот метод прост в использовании и весьма осуществим.

7 эксплуатационные методы и требования к оборудованию для биологического производства д-тагатозы

Биологическое производство d-тагатозы в основном использует сыворотку сыворотки. Устройство мембранной сепарации используется для удаления таких примесей, как белок и соль, и для концентрации сыворотки. Смесь d-галактозы и глюкозы получается путем гидролиза концентрированной сыворотки иммобилизованной лактазы. Затем глюкоза в смеси ферментируется микроорганизмами (такими как brewer&)#39 дрожжи, и этанол выдирается. Оставшаяся d-галактоза преобразуется в d-тагатозу иммобилизированным L-AI ферментом (или генетически модифицированными бактериями, содержащими L-AI ферментом). D- галактоза, которая не была полностью преобразована, может быть отделена и восстановлена с помощью колонки обмена катиями. Испарение и концентрация раствора преобразования, содержащего только d-тагатозу, могут использоваться для кристаллизации и сушки продукта. Оборудование, задействованное во всем процессе, включает мембранные фильтрующие устройства, ферментеры, центрифуги (или пресс-подборщики и фильтры для рамы), дистилляционное оборудование, ионно-обменные смолы, кристаллизационное оборудование, сушилки и т.д. Принимая Kraft Foods Inc.' с д-тагатозный метод производства биотехнологических процессов в качестве примера [44], конкретные методы работы и использование оборудования показаны на рис. 1.

8 проблемы и перспективы развития биологического производства д-тагатозы

Будучи экологичной и низкоуглеродной технологией производства, биологический процесс производства d-тагатозы все еще не может заменить существующий химический каталитический метод, главным образом по следующим причинам:

1) Высокая стоимость процесса. С точки зрения современной технологии, самая высокая урожайность d-тагатозы достигается с помощью иммобилизованного L-AI фермента, но процесс очистки фермента требует сложного очистного оборудования и сложного управления процессом, которое является дорогостоящим в техническом обслуживании и трудоемким, а технический порог относительно высок. Производство d-тагатозы с использованием иммобилизованных рекомбинатов E. coli клеток является простым в эксплуатации и метод является зрелым. Недостаток заключается в Том, что урожайность низкая, и есть скрытые опасности в пищевой безопасности кишечной палочки хозяина. Однако этот метод по-прежнему имеет самые большие перспективы для промышленности.

2. Цикл реакции биологического метода подготовки д-тагатозы является относительно продолжительным. Время, необходимое для производства d-тагатозы с использованием пакетного преобразования, как правило, составляет 24 ч/партию или даже 168 ч/партию, и на протяжении всего процесса необходимо поддерживать высокую температуру. По сравнению с простым химическим каталитическим методом это не имеет преимуществ с точки зрения потребления энергии или цикла реакции. Хотя производство d-тагатозы с использованием фермента L-AI комнатной температуры относительно недорого с точки зрения потребления энергии, оно ограничено низким коэффициентом преобразования (от 20% до 30%) и имеет мало практического применения.

3. Недостаточное развитие и использование ферментов L-AI пищевой категории. Поскольку в будущем d- тагатоза будет применяться главным образом в пищевой и фармацевтической областях, необходимо развивать микроорганизмы пищевой категории (например, сертифицированные по грас) в качестве биокаталитических векторов. В число потенциальных кандидатов входят бациллусовые субтилии, оксиданы глуконобактера, Saccharomyces cerevisiae и т.д. Ким и др. [45] выразили фермент - геобакиллsp. L-AI в сертифицированном gras микробном хосте для производства d-тагатозы, но урожайность неизвестна. Следует отметить, что rali et al. [46] выразили B. stearothermophilus Соединенные Штаты америкиL-AI фермент в проботических штаммах L. bulgaricus и S. thermophilus. Новые штаммы смогли производить d-тагатозу во время ферментации молока, что привело к йогурту, который сохранил свой вкус и сократил калории.

4. Отсутствует достаточное понимание каталитического механизма фермента L-AI, что затрудняет эффективное улучшение каталитических свойств фермента. Из-за очень ограниченных структурных данных L-AI фермента, трудно использовать структурную биологию для анализа каталитического механизма и попытки фермента инженерной модификации; В качестве более точного средства технология кристаллизации белка имеет большое значение для изучения субстратного каталитического процесса L-AI фермента. Поэтому анализ кристаллической структуры фермента L-AI станет важной темой в будущем.

Конечно, развитие промышленного процесса по производству д-тагатозы имеет большой потенциал. По сравнению с химическими методами производства преимущества биологических методов включают простоту извлечения продуктов, высокую каталитическую специфичность и социально приемлемую продовольственную безопасность. Была также раскрыта концепция развития основной технологии, которая заключается в Том, чтобы найти L-AI фермент, который может эффективно производить d-тагатозу и установить недорогой и безопасный производственный процесс, который может эффективно производить d-тагатозу. Считается, что с постоянным углублением соответствующих исследований может созревать биологический процесс использования фермента L-AI для подготовки д-тагатозы.

Ссылка:

[1] О, боже мой! D. Д. - к. Tagatose: свойства, приложения и Биотехнологические процессы [J]. Appl Микробиол (микробиол)Biotechnol,2007,76:1-8.

[2] Beadle  - J.R,Saunder - J.P,Wajada T J. Технология производства тагатозы: US,500261[P].1991-3-26.

[3] Читам п. С джей, вуттон На букву "н". Биопреобразование d-галактозы в d-тагатозу [J]. Фермент микроб технол,1993,15:105 — 108.

[4] 1. Будеббуз  - с, магуин  И, рахими,  - м. С помощью бактерий  L- арабинозы изомеразы: промышленные 3. Применение для D-1. Тагатозе Производство [J]. Недавно Пэт ДНК ген Seq,2011,5 (3) : 194-201.

[5] Лу и, левин Джи ви, доннер ти Ч. : м. Тагатоза, новый антидиабетический контроль и контроль ожирения Наркотик [J]. 3. Диабет Obes Metab,2008,10 (2) :

109-134.

[6] Ким ким ким J  Ч, прабху - п, джея.  М, и  Al.description (характеристика) Соединенные Штаты америки А вот и нет. L- изомеры арабинозы Из российской федерации Bacillus  Subtilis [J]. Группа по планированию семьи  Микробиол (микробиол) Биотехнол,2009,85 (6) : 1839 — 1847.

[7] - чуайе H,Bejar W, rхими M,et al.ization Соединенные Штаты америкиL- арабинозе1. Изомеры (изомеры)Из российской федерацииВ настоящее времяLactobacillus plantarum NC8 - штамм С выраженным выражением Стабильность в эксплуатации По адресу: Кислотный pH[J]. Фонд финансовой помощи Микробиол (микробиол) Летт,2007,277 :260 — 267.

[8] В чем дело? С. S Дж., ли  D. Д. W,Choe E. E. A,et и Al.description (характеристика) Соединенные Штаты америки - термоацидофилия  Г-н арабинозе  1. Изомеры (изомеры)   Из российской федерации  Alicyclobacillus acidocaldarius: роль лис -269 в pH optim[J]. Appl Environ Microbiol,2005,71 :7888-7896.

[9] В чем дело? О 'кей, чу E. E.A,Ким ким кимС. SB,et al.metal dependence Для каталитических и структурных функций в l-арабинозем изомере Из российской федерации В настоящее время  - мезофилия Bacillus  halodurans   и В настоящее время - термофилия Geobacillus stearothermophilus[J]. Arch - биохим.Biophys,2005, 434:333 — 343.

[10] В чем дело? D. Д. Ч, чжан, H  Дж., чхве  E. E. A,et и Al.description (характеристика) Соединенные Штаты америки A термостабильный. Г-н арабинозе   (d-галактоза)  1. Изомеры (изомеры)  Из российской федерации   - гипертермофилия 3. Эвбактерия Термотога (термотога) Маритима [J]. Appl Environ Microbiol,2004,70:1397-1404.

[11] Организация < < рахими > > - м, баджик  - джи, иламмами R,et и И в то же время Кислотно-стойкий L- изомеры арабинозы из мезофильной Shewanella sp. Анаа -3 Высокая активность при низких температурах [J]. Факт микробных клеток,2011,10:

96. - да. Doi: 10.1186 /1475-2859-10-96.

[12] Организация < < рахими > > М-р ильхаммами - р, баджик G,et и И в то же время - кислота; А. обеспечение терпимости L- изомеры арабинозы из пищевой марки Lactobacillus sakei 23K Привлекательный д-тагатозе Производитель [J]. 1. Биорезор Технол,2010, 101 :9171 — 9177.

[13] Прабху (прабху) P,Tiwari С. О.K,Jeya M, и др. клонирование и характеристика нового l-арабинозного изомера из Bacillus licheniformis[J]. Appl Microbiol Biotechnol,2008,81 :283 — 290.

[14] Сюй зи, цин уJ,Li С, и, и Al.A роман Г-н арабинозеизомеры из Lactobacillus ферментум CGMCC2921  Для ди-тагатозе Производство: клонирование, очистка и определение характеристик генов [J]. J Моль (Mol)Catal B: Enzy,2011,70:1-7.

[15] Чэн (Китай) L,Mu Ч, чжан, T,et, Организация < < ал.ан > > Г-н арабинозе 1. Изомеры (изомеры) Из российской федерации Acidothermus   - целлюлолит   ATCC43068: Клонирование, выражение, очищение и определение характеристик [J]. Appl Microbiol Biotechnol, 2010,86:1089 — 1097.

[16] Организация < < рахими > >   - м, бежар  - с. Клонирование, очистка   и  1. Биохимическая технология Характеристика металлических ионов независимых и термоактивных L- арабинозе 1. Изомеры (изомеры) Из российской федерации В настоящее время Bacillus  stearothermophilus  US100  Штамм [J]. Biochim Biophys Acta,2006,1760:191 — 199.

[17] Li  уJ,Zhu Y,Liu A и др. идентификация и характеристика A Роман о любви  Г-н арабинозе  1. Изомеры (изомеры)   Из российской федерации  Anoxybacillus   flavithermus  Очень полезная информация   В случае необходимости   D-tagatose    Производство [J]. Экстремофилы,2011, 15 :441 — 450.

[18] Hong  Y  Г, ли ли D. Д. W, пён (фр.) Y  R,et и Al.Creation. Создание Соединенные Штаты америки Металл-независимый    - гипертермофилия    Г-н арабинозе     1. Изомеры (изомеры)    По запросу: Гомологическая рекомбинация [J]. - J. 3. Агрик - продукты питания  Химия,2011,59: 12939-12947.

[19] ван фуронг, сюй хон, ли ша и др. Выявление штаммов, вызывающих d-тагатоз [J]. Пищевая и ферментационная промышленность, 2009, 35 (8): 15-19.

[20] сюй хон, ван фуронг, ли ша и др. Метод приготовления д-тагатозы с использованием ферментируемого лактоцилля и лактоцилля: Китай, 200910025982. 9 [P]. 2010-12-29.

[21] сюй хон, сюй чжэн, чжу хуньян и др. Высокотемпературный изомер l-арабинозе и его применение: Китай, 2010-10153253. 4 [P]. 2011-08-31

[22] манжасетти Б а, шанс м р. Кристаллическая структура Escherichia coli Г-н арабинозеизомера (ECAI) - как предполагается. Целевой показатель Соединенные Штаты америки Биологическое производство тагатозы [J]. J Mol Biol,2006,360 :297 — 309.

[23] Организация < < рахими > > - м, агаджари - нет, джуй. М, и Аль.рациональное использование природных ресурсов Проектирование зданий и сооружений Бацилл стеаротермофил   US100     Г-н арабинозе     Изомеры (isomdelete) : Потенциальные области применения для производства д-тагатозы [J]. Биохимия,2009,91:650 — 653.

[24] Организация < < рахими > > M,Juy M,Aghajari N и др. проверка основных каталитических остатков и  1. Субстрат  3. Аффинити (аффинити)   В случае необходимости  the   1. Термоактивный элемент Бацилл стеаротермофил US100  Г-н арабинозе 1. Изомеры (изомеры) По запросу: Site-режиссер mutagenesis[J]. J бактериология,2007,189:3556 — 3563.

[25] Прабху п, джея - м, ли J  - к. Я проверяю молекулярную ткань Определение каталитической эффективности изомера l-арабинозы из Bacillus licheniformis[J]. Appl Environ Microbiol,2010,76:1653 — 1660.

[26] Kim  Эйч джей, ким джей О, о, о H J,et Al.description (характеристика) По состоянию на 31 декабря - с мутацией Geobacillus     stearothermophilus     Г-н арабинозе    1. Изомеры (изомеры)     - что? Увеличивает производительность D-tagatose[J]. J Appl Microbiol, 2006,101 :213 — 221.

[27] О, боже мой! D. Д.K,О, боже мой!H J,Kim H J, и др. изменение оптимального pH в л-арабинозе 1. Изомеры (изомеры) Из российской федерации  Geobacillus   - стеротермический мофил для D- галактоза Изомеризация [J]. - J.  Mol   Организация < < ката > >  Б: фермент,2006,43: 108-112.

[28] Oh  Х джей, ким х джей, о ди кей. Увеличение производства d-тагатозы  Сюжет на сайте  1. Мутагенез   Соединенные Штаты америки  L-Арабинозе (арабский язык)   1. Изомеры (изомеры)   От геобакилла Термоденитрификаны [J]. - биотехнол  Летт,2006,28:145 — 149.

[29] Цзян бо, му ванменг, чэн липан. Фермент-мутант L20A с высокой урожайностью d-тагатозе и методом мутанта: Китай, 2010-10112337. 3[P]. 2012-05-23.

[30] Ryu  S  A, ким C  С, ким, H  J,et и  Al.Continuous (продолжение) Производство D-tasgatose путем иммобилизации термостабильного l-арабинозного изомера в a  Кровать с пакетом   Биореактор [J]. Биотехнол (биотехнол)   Prog,2003, 19:1643 — 1647.

[31] Kim  H J,Ryu S A,Kim P, и др Производство d-тагатозы иммобилизированным термостабильным l-арабинозом Изомеры в пакетном биореакторе [J]. Биотехнол Prog,2003, 19 :400-404.

[32] Jorgensen  F, хансен, Франция О (1) - к, стаугар - п. 1. Ферментативная ферма Преобразование должностей в должности Соединенные Штаты америки От д-галактозы до д-тагатозы: гетерологично Выражение на английском языке И определение характеристик a  1. Термостабильность L-arabinose  1. Изомеры (изомеры) Из российской федерации Термоанаэробактер матрании [J]. Группа по планированию семьи Microbiol  Biotechnol, 2004,64:816-822.

[33] Организация < < лим > > Би СИ, ким х джей, о ди кей. Производство тагатозы с контролем pH a   - в волнение.  В цистерне  В отношении реактора  В которых содержатся  В неподвижном состоянии  L- арабиноз изомеры  Из российской федерации   Термотога (термотога)   Неаполитана [J]. Группа по планированию семьи   Biochem Biotechnol,2008,149 :245 — 253.

[34] Чон э с, ким х джей, о ди кей. Производство тагатозы С помощью иммобилизованного рекомбинанта   Escherichia     coli    2. Камеры    В которых содержатся    Geobacillus stearothermophilus L-arabinose изомеров мутанта в пакетной кровати биореактор [J]. Биотехнол Prog,2005,21:1335-1340.

[35] Гонконг Y Г, ли ли D  Ч, ли S J,et Al.Production. Производство Из д-тагатозе На высшем уровне  - температура воздуха   Использование программного обеспечения  В неподвижном состоянии   Escherichia    coli    Количество ячеек, выражающих L-arabinose  1. Изомеры (изомеры) - из термотоги Неаполитана [J]. Biotechnol Lett,2007,29 :569 — 574.

[36] Фу фенген, сюй чжэн, ли гисян и др. Производство d-тагатозы с использованием иммобилизованных рекомбинатов Escherichia coli клеток [J]. Китайский журнал биоинженерии, 2011, 31 (7): 85-90.

[37] Сюй зи, ли С, ф, ф F. F. G,et и Al.Production. Производство Д-тагатозе, а Функциональный подсластитель, используя Альгинат (альгинат) Иммобилизованный Lactobacillus fermentum CGMCC2921 Клетки [J]. Группа по планированию семьи  Biochem   Биотехнол,2012,166 (4) : 961-973.

[38] Liang  M,Chen M,Liu X,et al.Bioconversion of D- галактоза в D- тагатоза: непрерывное В упаковке Кровать в номере Реакция на них с А вот и нет. В неподвижном состоянии Термостабильный l-арабиноз 1. Изомеры (изомеры) и В целях повышения эффективности Очистка с помощью На выборочной основе На микробной основе Деградация [J]. Группа по планированию семьи  1. Микробид Биотехнол, 2012,93:1469 — 1474.

[39] Jebors S,Tauran Y,Aghajari N, и др. надмолекулярная стабилизация кислоты А. обеспечение терпимости L-arabinose   1. Изомеры (изомеры) От Lactobacillus sakei [J]. М. : химия,2011,47:12307 — 12309.

[40] Lim  Би СИ, ким х джей, о ди кей. Высокое производство d-тагатозы путем добавления борной кислоты [J]. Биотехнол Prog,2007,23:824 — 828.

[41] Организация < < рахими > > - м, мессауд E  B, борги (борги) M  A,et и Al.co-выражение of  L- arabinose  1. Изомеры (изомеры) и D- глюкоза 1. Изомеры (изомеры) В случае необходимости 1. E.coli  и Разработка эффективного процесса производства Одновременно д-тагатоза и д-фруктоза [J]. 1. Фермент Microb Technol,2007,40: 1531-1537.

[42] сюй гицян, фэн бьяо, цзян бо и др. Отделение тагатозы фенилбороновой кислотой/четвертичным аммиачным ионным экстракцией жидкого растворителя [J]. Наука и технологии пищевой промышленности, 2010(8): 294-297.

[43] хуан вэнься, му ванменг, цзян бо. Отделение и очистка д-тагатозе [J]. Пищевая и ферментационная промышленность, 2008, 34(6): 168 — 171.

[44] В. ибрагим О, распылин джей и. Технология производства D-tagatose: US,6057135[P].2000-05-02.

[45] Ким с. B, ли, М, парк с W,et al.Food класс термофилии arabinose    isomerase    Выраженные в процентах    from    Гра, и   tagatose  Способ изготовления: US,20080124771[P]. 2008- 05-29.

[46] Организация < < рахими > > - м, чуайе - эйч, гуйлуар I, и др. производство D- тагатоза, низкокалорийный подсластитель при ферментации молока с использованием L- арабинозы   Изомеры [J]. 1. Биорезор    Technol, 2011, 102: 3309-3315.